凌云乌鸡高致病性禽流感免疫抗体监测与效果分析

黄雪娇 吴克富 罗强 郁再洛

（1，广西凌云县泗城镇水产畜牧兽医站 533199；2，广西凌云县动物疫病预防控制中心 533199）

凌云乌鸡是广西优良地方鸡品种之一，具备耐粗饲、觅食能力和抗病力强、羽毛漂亮、肉质细嫩、味美香浓、食用药用价值高等特点，是餐桌上的滋补佳品，具有很好的市场开发潜力。近年来，凌云县人民政府把凌云乌鸡生态特色养殖作为“十三五”脱贫攻坚战特色养殖产业项目来抓。采取“公司+基地+合作社+贫困户”和“政府主导+公司+基地+合作社+贫困户”等精准扶贫新模式作为加快扶贫产业发展新途径，有效带动了一大批贫困户发展产业实现脱贫致富。为确保凌云县政府实施凌云乌鸡特色生态养殖项目的顺利进行，凌云县动物疫病防控中心承担项目技术支撑，从动物疫病防控、免疫与监测为乌鸡产业发展提供技术支撑，把禽流感免疫工作作为免疫工作的主要措施来抓。为及时掌握凌云乌鸡的免疫情况和免疫效价，笔者通过对凌云乌鸡规模养殖场和部分散养户高致病性禽流感免疫抗体情况进行监测，全面评估高致病性禽流感的免疫效果。旨在客观评估免疫工作，为科学指导防控工作提供依据。

1 材料与方法

1.1 疫苗来源及用量

重组禽流感病毒（H5+H7）三价灭活苗（H5N1Re-11 株+Re-12 株，H7N9H7-Re3 株）免疫用苗由政府统一采购，哈尔滨维科生物技术有限公司生产，批号为2020019。胸部肌肉或颈部皮下注射，15～35 日龄，每只0.3ml；35 日龄以上的鸡，每只0.5ml。预防H5亚型2.3.4.4d 分支、2.3.2.1d 分支和H7亚型禽流感病毒禽流感。

1.2 样品来源与数量

监测样品来自凌云县瑞东农牧有限公司乌鸡保种场、广西百色凌泰养殖有限责任公司凌云乌鸡核心产业区等6 个规模养鸡场，按1%的比例随机抽取。散养户采集泗城镇后龙村凌云乌鸡产业扶持点，随机平行采集。采血部位为翅静脉，血清分离后，置冰箱冻存待检。

2 诊断试剂与仪器

2.1 诊断试剂来源

诊断试剂生产厂家为哈尔滨国生生物科技有限公司，其中H7-Re3 株禽流感间接血凝试验抗原批号20201118，阳性血清批号20 201105；H5-Re11 珠禽流感间接血凝试验抗原批号20191217，阳性血清批号20 191210；H5-Re12 株禽流感间接血凝试验抗原，批号20 190819；阳性血清批号20191216。

2.2 主要仪器设备

离心机、单道移液器、多道移液器、微振荡器、水浴锅、96 孔V 型微量反应板等，移液器等计量器均通过校正合格。

2.3 检测方法

参照2020 年新颁布的《高致病性禽流感诊断技术》（GB/T18936-2020）规定的微量法，采用血凝试验（HA）与血凝抑制试验（HI）进行。

2.4 结果判定

以完全抑制4 个HAU 抗原的血清最高稀释倍数作为HI 滴度，阳性血清对照HI 效价达8log2(1:152) 以上试验成立。免疫时间达21d 后，H5和H7亚型的HI 抗体效价≥4log2 为阳性，判定为合格。HI 抗体效价＜4log2 为阴性，判定为不合格。

3 结果与分析

从表1 可知，规模场H5Re-11 株、H5Re-12、H7Re-11的抗体合格率规模场分别为94.23%、95.19%、92.78%，散养分别为82.19%、87.67%、73.97%。由此可见，规模场的抗体合格率比散养的抗体率理想。

表1 规模场及散养户不同亚型的免疫抗体监测结果

从表2 可知，肉鸡H5Re-11 株、H5Re-12、H7Re-11 的抗体合格率分别为87.75%、90.18%、82.99%，蛋鸡分别为96.67%、98.33%、95%。监测表明，不同生产性能的鸡其免疫抗体合格率存在差异。蛋鸡饲养周期长，经过3 次免疫，保持较高的抗体水平。

表2 不同和产性能的抗体监测结果

从表3 可知，在监测样品中，经过一次免疫，H5Re-11株、H5Re-12、H7Re-11 的抗体合格率85.47%、88.89%、77.78%，而经过二次以上免疫的抗体合格率分别为96.67%、98.33%、99.16%。结果表明，经过二免的鸡抗体合格率比只进行一免的免疫抗体水平高。

表3 不同免疫次数的抗体监测结果

4 讨论与小结

4.1 实现一次免疫同时防控多流行毒株

从监测结果看，凌云乌鸡禽流感H5、H7亚型免疫抗体合格率都比较高，免疫应答显著，群体合格率均超过国家规定标准达70%以上，对防控禽流感提供有效的免疫保护作用[1]。同时也说明重组禽流感病毒（H5+H7）三价灭活苗免疫原性良好，安全有效，该苗的推广使用避免了单苗注射、降低了成本，减少了家禽应激次数，实现一次免疫同时防控H5N1Re-11 株+Re-12 株，H7N9H7-Re3 株亚型禽流感流行毒株的目的[2]。

4.2 对不同饲养方式、不同性能的禽类别抗体效价有差异

从检测结果看，规模场的禽流感免疫抗体水平比农村散养禽流感免疫抗体水平高，主要原因是农村散养的鸡局限于春秋两防突击性免疫，不能按规定的日龄计划免疫，加上饲养管理水平欠缺，环境条件差易导致家禽营养不良，对禽流感的免疫效价和保护作用有一定的影响。同时笔者注意到，不同规模场的抗体合格率存在差异，抗体滴度高低不齐，抗体相对不稳定，以鸡的个体差异，鸡群健康状况，免疫注射操作不规范、疫苗接种剂量密切相关，剂量不足产生不了免疫应答，剂量超大造成免疫抑制或麻痹，其抗体水平不一定很理想。此外，疫苗运输、保存条件同样影响免疫效价，监测中发现凌泰养殖有限责任公司山逻村金矿养殖区的抗体水平非常低或无抗体，通过调查了解，鸡场管理人员将疫苗按不规定保存，造成疫苗效价大幅下降，导致免疫失败，动物防疫监督机构立即下发整改通知，责成该场补免。

4.3 不同的免疫程序对凌云乌鸡禽流感的免疫群体保护至关重要

从监测结果看，二免的免疫抗体合格率达90%以上，而仅进行一免的鸡抗体滴度参差不齐，无抗体或抗体水平很低的鸡为病毒感染埋下隐患。试验证明：一次免疫仅给机体一个刺激，产生的抗体效价不高，且抗体维持时间不长，免疫产生的抗体水平难以保护群体不受野毒攻击或疫情的潜在威胁。只有通过二免，一方面可以减少或消除人为因素的影响，如漏免或疫苗剂量不足等。另一方面可以在初免的基层上加强刺激免疫系统，使之产生更高的免疫抗体及免疫保护维持时间[3]。凌云乌鸡饲养期一般为120d，规模养殖场最理想是15～20 日龄进行第一次基础免疫，间隔3 周后再进行一次加强免疫。农村散养家禽实施集中免疫，对超免疫期或新补栏家禽及时补免。

4.4 加大督查力度

通过这次凌云乌鸡抗体监测发现有漏免和疫苗保管不当等问题，要针对性采取形式多样的宣传、技术培训和指导，提高防疫队伍业务素质和养殖者的防疫意识，规范免疫操作。同时，动物疫病监督管理部门要加大督查力度，对不按要求开展禽流感计划免疫的单位或个人给予批评教育，拒不接受强制免疫的给予相应处罚。

4.5 强化家禽免疫监测效果评估工作

加强凌云乌鸡免疫是预防与控制高致病性禽流感最有效的措施，通过免疫抗体监测掌握群体免疫抗体水平，了解免疫状况，对控制疫病起至关重要的作用。进一步强化家禽免疫监测评估工作。按照“农业农村部高致病性禽流感等主要动物疫病监测方案”的要求，定期对散养户、养殖场采取集中监测、常规监测和随机检测相结合的办法，开展家禽免疫抗体效价评估，总结免疫中存在的问题，提出整改措施，对未达到免疫抗体保护水平的应及时补免，全面提高防疫密度和防疫质量，建立稳固的免疫屏障，有效控制禽流感疫情的发生，保护凌云乌鸡特色生态产业健康发展。