一种晒后修复组合物的研制

童 星 张 咪

江苏雪豹日化有限公司，江苏无锡，214400

紫外线（UV）属于太阳光中的不可见光，根据波长不同，可以分为UVA、UVB、UVC、UVD四种，其中对皮肤有危害的紫外线辐射主要是UVA和UVB。

当人体皮肤受到超过耐受量的UVA和UVB照射后，会促使细胞释放多种炎症介质，导致真皮毛细血管扩张充血、皮下组织水肿并激发炎症，出现刺痛、红斑、脱屑瘙痒等不适症状。此外，紫外线侵入皮肤后，还在表皮细胞内外产生大量氧自由基，造成角质形成细胞和成纤维细胞活动异常，引起皮肤光老化，使皮肤形成皱纹、失去弹性、色素改变等[1-2]。

在阳光强烈照射下，即使做了防晒工作，也无法完全避免紫外线的伤害，所以晒后对皮肤进行修复也尤为重要。目前，市场上的晒后修复产品多以植物提取物中的功效成分对晒后受损的细胞进行修复，如黄酮类化合物、苯丙素类化合物、多酚、类胡萝卜素等，可以起到清除自由基、抑制黑色素生成与沉积、延缓老化等作用。

玫瑰茄花又名洛神花，含有花青素、多酚酸、有机酸、黄酮等成分，具有抗氧化、抗肿瘤、降血脂、降血压等生物活性，黄琼等研究发现，玫瑰茄多糖具有较好的还原能力，能够有效清除•OH、O2-•和DPPH自由基[3]。金花葵是秋葵属草本植物，具有抗氧化、镇痛消炎、降血脂、免疫调节等药理作用，研究发现其富含的黄酮类化合物具有较强的抗氧化活性和良好的抗炎作用，对酪氨酸酶活性也有一定的抑制作用[4]。本研究以玫瑰茄花提取物、金花葵提取物为主要修复成分，研制了一种晒后修复组合物，通过自由基清除效果测试、晒后修复效果测试、皮肤刺激试验，对所研制样品的晒后修复效果进行功效评价。

1 实验试剂与设备

无水乙醇、邻二氮菲、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、硫酸亚铁、30%过氧化氢，分析纯，国药集团化学试剂有限公司；DPPH，优级纯，Sigma；2,4-二硝基氯苯，99%，Aldrich；组氨酸ELISA试剂盒，上海一研生物科技有限公司。

电子天平，上海天美天平仪器有限公司；水浴恒温振荡器，常州市亿能实验仪器厂；旋转蒸发器，上海亚荣生化仪器厂；数控超声机，昆山禾创超声仪器有限公司；实验专用微波炉，南京杰全微波设备有限公司；紫外分光光度计，上海仪电分析仪器有限公司；真空冷冻干燥器，上海叶拓仪器仪表有限公司。

2 实验方法

2.1 玫瑰茄提取物的制备

将玫瑰茄花自然干燥，碾磨成粉，加入一定量75%乙醇，使玫瑰茄花粉和乙醇的重量比为1:50，300W微波处理5min，再500W超声提取15min，过滤收集提取液，真空冷冻干燥过夜。

2.2 金花葵提取物的制备

将金花葵自然干燥，碾磨成粉，加入一定量水，使金花葵粉和水的重量比为1:20，加热回流提取1.5 h后，再加入5倍重量的水，加热回流提取1 h，过滤，合并收集两次提取液，真空冷冻干燥过夜。

2.3 晒后修复组合物的制备

配制不同配比的晒后修复组合物，各组分及含量见表1，将不同配方的晒后修复组合物溶于水，制成5%的水溶液（w/w），作为待测样品。

表1 晒后修复组合物配方

2.4 晒后修复组合物自由基清除效果测试

2.4.1 羟自由基清除试验

在具塞试管中，加入0.5 ml浓度为0.75 mmol/L的邻二氮菲无水乙醇溶液，再分别加入2 ml浓度为0.2 mol/L的磷酸盐缓冲液（pH=7.4）和1 ml待测样品，充分混匀后加入0.5 ml浓度为0.75 mmol/L的FeSO4•7H2O溶液，再次混匀后加入0.5ml浓度为0.01%的H2O2（v/v），37℃水浴1h，测定536 nm处的吸光度值，按公式计算羟自由基清除率。

式中：Ax是待测样品的吸光度值，Ab是以蒸馏水替代H2O2的损伤组的吸光度值，An是以蒸馏水为空白组的吸光度值。

2.4.2 DPPH自由基清除试验

在比色皿中加入3 ml浓度为0.2 mmol/L的DPPH无水乙醇溶液，再加入1ml待测样品混匀，室温避光反应30 min，测定其在517 nm处的吸光度值，记为Ax；以3 ml无水乙醇和1 ml待测样品作为空白对照，测定吸光度值，记为Ab；以3 ml DPPH无水乙醇溶液和1 ml无水乙醇溶液作为对照组，测定吸光度值，记为An，按公式计算DPPH自由基清除率。

2.5 晒后修复效果测试

选取体重300～350 g的SD大鼠，雌雄各半。将SD大鼠随机分为空白组、模型组、实验组，每组20只。试验前24 h将大鼠背部去毛，面积约为3 cm×3 cm，除空白组外，其余各组用2,4-二硝基氯苯在大鼠背部皮肤造模，并用紫外线照射12 h，在造模成功后（皮肤表现为干燥、脱屑、烧灼、刺痛、肿胀、红斑等症状）的0 h、8 h，实验组取按配方1～8制备的待测样品0.5 ml，涂抹大鼠背部的脱毛区，涂抹范围约2.5 cm×2.5 cm，空白组、模型组用去离子水涂抹，每天给药一次，连续给药14 d，于第15天观察各组大鼠背部皮肤情况，按照表2的评价标准进行记录，并检测各组大鼠样品中的血清组氨酸（HIS）浓度。

表2 皮肤情况评价标准

2.6 多次皮肤刺激性试验

选取体重2.5～3 kg的健康兔子，雌雄各半，试验前将兔子背部脊柱两侧被毛剪掉，去毛范围为3 cm×3 cm，涂抹面积2.5 cm×2.5 cm。取按配方1～8制备的样品约0.5 ml，涂抹在兔子一侧皮肤上，另一侧以去离子水作为对照，每天涂抹1次，连续涂抹14 d。从第2天开始，每次涂抹前应剪毛，用水清除残留受试物，1 h后观察结果，按表3进行评分，对照区和试验区同样处理。按公式计算每天每只动物平均积分，以表4判定皮肤刺激强度。

表3 皮肤刺激反应评分

表4 皮肤刺激强度分级

3 实验结果

3.1 自由基清除效果

由表5可见，按配方1～3制备的晒后修复组合物样品均含有玫瑰茄花提取物、金花葵提取物，对羟自由基和DPPH自由基的清除率均在80%以上，配方4和配方5所制备样品含单一的玫瑰茄花提取物或金花葵提取物，自由基清除率都低于50%，表明玫瑰茄花提取物和金花葵提取物具有一定的自由基清除效果，且两者组合使用效果更强；配方6以等量的金缕梅提取物代替了金花葵提取物，自由基清除率都低于60%，表明金花葵提取物的自由基清除效果优于金缕梅提取物；与配方1相比，配方7和配方8不含酪朊酸钠，其所制备样品的自由基清除率低于60%，表明酪朊酸钠可以增强玫瑰茄花提取物和金花葵提取物的相容性，提高组合物的自由基清除效果。

表5 晒后修复组合物自由基清除效果

3.2 组合物晒后修复效果

由表6可见，配方1～3制备的晒后修复组合物样品，涂抹在造模成功后0 h的受损皮肤上，可以显著降低血清组氨酸（HIS）浓度，减轻炎症反应，显著改善受损皮肤的干燥、脱屑、肿胀、红斑等症状；配方4～8制备所得组合物样品对炎症和皮肤情况也有一定的改善效果，但改善效果明显低于配方1～3制备所得样品。

表6 造模成功后0 h修复效果

由表7可见，配方1～3制备的晒后修复组合物样品，涂抹在造模成功后8 h的受损皮肤上，仍然可以显著降低HIS浓度，减轻炎症反应，显著改善受损皮肤的干燥、脱屑、肿胀、红斑等症状；配方4～8制备所得组合物样品，对HIS浓度没有显著的影响，对皮肤的改善效果也较差。

表7 造模成功后8 h修复效果

3.3 多次皮肤刺激试验结果

由表8可见，配方1～3制备的晒后修复组合物样品，在观察期内，受试兔子皮肤未见红斑、水肿等异常反应，未出现其他不良反应症状，表明所制备样品对皮肤无刺激性；配方4～8所制备的样品，在涂抹1 h后有轻度红斑和水肿症状，24 h后可以消除。

表8 皮肤刺激试验结果

4 结语

本研究研制了一种晒后修复组合物，以玫瑰茄花提取物、金花葵提取物和酪朊酸钠为修复成分，通过自由基清除效果测试、晒后修复效果测试、皮肤刺激试验，对所研制样品的晒后修复效果进行相关功效评价。结果显示，含玫瑰茄花提取物、金花葵提取物和酪朊酸钠的5%组合物水溶液，对羟自由基和DPPH自由基的清除率均在80%以上；酪朊酸钠与单一玫瑰茄花提取物或单一金花葵提取物的组合物，其5%组合物水溶液对羟自由基和DPPH自由基的清除率均低于50%，表明玫瑰茄花提取物和金花葵提取物具有一定的自由基清除效果，且两者组合使用效果更强；当组合物中不含酪朊酸钠时，其自由基清除率有所下降，表明酪朊酸钠可以增强玫瑰茄花提取物和金花葵提取物的相容性，提高组合物的自由基清除效果；组合物中三者协同作用，在晒后8h使用仍具有显著的修复效果，可以起到长效的抗炎、消肿、清除自由基作用，对皮肤无刺激，作为功效成分添加于晒后修复化妆品中，具有广阔的应用前景。