性病门诊女性就诊者及性伴口腔、生殖器HPV感染情况

王建彬，梁春梅，廖玉英，陈惠茹，赖嘉希，柯吴坚

（1.汕头市澄海区人民医院，广东 汕头 515800；2. 南方医科大学皮肤病医院，广东 广州 510009）

人类乳头瘤病毒（Human papillomavirus，HPV）感染是全球最常见的性传播感染之一［1］。HPV可在多个部位（如生殖器、口腔、肛门、直肠等）出现良性、潜在恶性或恶性肿瘤等病变，对患者身体和心理造成极大的危害［2］。虽然HPV疫苗近年来在国内外得到广泛接种，使得HPV检出率出现大幅下降，然而对于未接种HPV疫苗者或疫苗无法保护的其他HPV型别而言，其检出率却出现不断增加的趋势［3、4］。通过生殖器与生殖器的直接性接触导致男女双方HPV交叉感染的传播途径已获得足够认识［5］，但男女双方是否通过口—口和口—生殖器等其他部位的直接接触导致HPV传播的认识，相关临床研究则相对不多［6］。为进一步明确性病门诊女性就诊者口腔和生殖器HPV的感染情况，以及其性伴HPV的感染能否造成女性就诊者口腔和生殖器的感染，我们招募200名性病门诊女性就诊者及其男性性伴侣，对男女双方口腔和生殖器进行HPV核酸检测和临床危险因素分析，报告如下。

1 材料与方法

1.1 患者招募 自2016年1月至2018年1月期间，我们共招募性病门诊女性就诊者200名，其中167对女/男性伴共同完成口腔和生殖器部位的HPV标本采集。入组标准：男女双方在过去1年内为固定性伴侣关系，且每月发生性行为次数平均超过1次。排除标准：年龄均小于18岁、孕妇、无固定性伴侣者、确诊HIV或性病者、长期服用糖皮质激素或免疫抑制剂者、合并其他系统并发症者。

1.2 样本采集［7］嘱咐女性就诊者及其男性性伴侣在采集样本前的24小时内禁止性行为。医务人员采用专用的HPV取样细胞刷，分别对入组者口腔、女性外阴和阴道壁内、男性包皮和龟头等部位取样。每个部位用细胞刷反复10次，以获得足够多的脱落上皮细胞标本。将细胞刷放入提前编号且含有专门细胞保存液的取样管中。所有样本低温保存或直接进行检测。

1.3 DNA提取［7］样本的HPV DNA提取采用HybriBio公司的细胞裂解液进行提取。具体方法如下：① 移液枪吸取临床样本500ul，置于离心机中14000 rpm离心1min后，去除离心管中的上清液体；② 溶液I在45℃水浴锅中提前预热并振荡混匀。在去除上清的离心管中加入400 ul溶液I，100℃水浴锅中加热15min后，常温下静置2min；③ 点动离心加热后的离心管。取振荡混匀的溶液II 400ul加到离心管中，常温下静置2min。再次将离心管置于离心机中14000 rpm离心5min后，去除离心管中的上清液体；重复该步骤2次后，常温静置2min；④ 取溶液III 60ul加入离心管中，常温放置10min，置于离心机中14000 rpm离心1min；⑤ 采用紫外分光光度计检测离心后的上清液OD 260/280比值，当OD 260/280比值介于1.7～2.0时则达到所需检查纯度，将符合检测纯度的DNA低温保存或进行PCR检测。

1.4 PCR检测［7］HPV PCR检测采用HPV通用L1引物：MY 09/11（MY09：5’-CGT CCM ARR GGA WAC TGA TC-3’；MY11：5’-GCM CAG GGW CAT AAY AAT GG-3’；M：A/C；R：A/G；W：A/T；Y：C/T），引物由上海生工合成并经PAGE纯化。PCR反应体系：样本DNA、上海生工HPV通用引物、Promega Go Taq Polymerase、Promega Go Taq Buffer、Thermo dNTP、Sigma MgCl2、Sigma H2O。PCR反应条件：95℃加热2min；95℃变性1min，55℃退火1min，72℃延伸1min，共40个循环；72℃延伸10min。扩增片段大小450 bp。扩增产物置于70V的1.5%琼脂糖凝胶电泳40min，将电泳后的琼脂糖凝胶置于凝胶成像仪中观察HPV PCR扩增结果。

1.5 统计分析 采用SPSS 26.0对数据进行统计学分析，采用配对t检验对性病门诊女性就诊者及其性伴侣年龄进行比较，采用两个独立样本t检验分别对男女双方口腔和生殖器HPV的检出率、就诊者年龄进行比较，采用χ2检验分别对女性就诊者口腔和生殖器HPV的检出率、口交的危险因素、性伴侣口腔或生殖器HPV的检出率进行比较，当P＜0.05有统计学差异。

2 结果

2.1 性病门诊女性就诊者及其性伴侣口腔和生殖器HPV检出率 入组167位性病门诊女性就诊者的平均年龄为（30.62±8.21）岁，低于其男性性伴侣平均年龄的（32.57±8.86）岁（P＜0.001）。女性167份口腔样本中有8份HPV DNA阳性，阳性率为4.79%。女性167份生殖器样本中有95份HPV DNA阳性，阳性率为56.89%。男性性伴侣167份口腔样本中有14份HPV DNA阳性，阳性率为8.38%。男性性伴侣167份生殖器样本中有97份HPV DNA阳性，阳性率为58.08%。性病门诊女性口腔HPV为低于男性口腔HPV检出率（χ2=25.066，P＜0.001）。性病门诊女性生殖器HPV检出率低于男性生殖器HPV检出率（χ2=9.671，P=0.002）。详见表1。

表1 性病门诊女性患者及其男性性伴口腔、生殖器HPV感染情况

2.2 年龄、主动口交和男性性伴侣口/生殖器HPV的感染情况对性病门诊女性就诊者口腔HPV检出率的影响 性病门诊女性就诊者口腔HPV阳性组平均年龄为（36.25±7.48）岁，高于阴性组的（30.34±8.16）岁，（t=2.005，P=0.047）。性病门诊女性患者口腔HPV阳性组中有主动口交史为62.50%高于阴性组的54.72%（χ2=0.186，P=0.666）。性病门诊女性患者口腔HPV阳性组中性伴生殖器HPV感染为87.50%高于阴性组的56.60%（χ2=2.986，P=0.084）。性病门诊女性患者口腔HPV阳性组中性伴口腔HPV感染为62.50%高于对照组的5.66%（χ2=32.040，P＜0.001）。以上结果表明女性口腔HPV的感染情况与女性主动口交史和男性性伴侣生殖器HPV感染无明显关系，而与女性年龄和男性性伴口腔HPV感染有关。提示女性口腔的HPV感染情况可能通过男女双方的口—口直接接触途径传播，且随着年龄增大感染几率增加。详见表2。

表2 年龄、主动口交及性伴HPV感染情况对女性口腔HPV检出率的影响

2.3 年龄、被动口交和男性性伴侣口腔/生殖器HPV的感染对性病门诊女性就诊者生殖器HPV感染的影响 性病门诊女性就诊者生殖器HPV阳性组平均年龄为（30.93±8.49）岁，与性病门诊女性生殖器HPV阴性组的（30.22±7.84）岁无显著性差异（t=0.548，P=0.585）。性病门诊女性生殖器HPV阳性组中有被动口交史为69.47%高于阴性组的36.11%（χ2=18.426，P＜0.001）。性病门诊女性就诊者生殖器部位HPV阳性组中性伴生殖器HPV感染为68.42%高于阴性组的44.44%（χ2=9.671，P=0.002）。性病门诊女性生殖器HPV阳性组中性伴口腔HPV感染为13.68%高于对照组的1.38%（χ2=8.062，P=0.005）。以上结果表明性病门诊女性就诊者生殖器部位的HPV感染情况与年龄无关，而与被动口交史、性伴口腔/生殖器HPV感染有关。表明女性生殖器HPV感染可能通过男女双方的口-生殖器、口-口和生殖器-生殖器途径传播。详见表3。

表3 年龄、被动口交及性伴HPV感染情况对女性生殖器HPV检出率的影响

3 讨论

HPV是全球性病病原体中检出率最高的双链环状闭合DNA病毒，临床可分离出出200多种亚型［1］。可根据HPV致癌性的高低分为高危型和低危型［1］，其中HPV低危型与发生在肛门、生殖器、口腔等部位的良性病变相关，而HPV高危型可引起宿主细胞过度增殖，从而与肛门、生殖器、口腔等部位的潜在恶性或恶性肿瘤高度相关［2］。HPV可感染人体的肛门生殖器、咽喉、口腔、鼻腔等部位的皮肤和黏膜［6］。国外学者为明确男女双方口腔HPV感染情况对5579位参与者进行检测，结果发现年龄在（14～69）岁的男女双方口腔HPV的总检出率6.9%，其中女性HPV检出率为3.6%低于男性的10.1%［8］。该研究结果与我们本次研究发现的性病门诊就诊者中男女双方口腔HPV的总检出率6.6%结果接近，其中性病门诊女性就诊者口腔HPV检出率为4.79%，低于其男性性伴侣的8.38%，与上述研究发现基本相同。性伴侣HPV的交叉传播是造成HPV感染增加的重要原因之一［1、2］。Pickard等［9］对1000位年龄介于（18～30）岁的研究者进行长达3月的随访中发现，口腔HPV检出率的增加与是否有口交和舌吻高度相关。我们研究显示，在8例女性性病门诊就诊者口腔HPV的感染者中，其62.50%的男性性伴侣口腔检测出HPV，其结果明显高于阴性对照组；同时，在95例女性性病门诊就诊者生殖器HPV感染者中，69.47%有被动口交史，且其男性性伴侣口腔HPV检出率明显高于阴性组。通过我们的研究发现口腔HPV的感染或许增加性伴侣间口腔或生殖器HPV的检出率，结果显示HPV不仅可通过生殖器-生殖器的直接接触传播，或许还可以经由口腔和口腔或口腔和生殖器的直接接触传播。

综上所述，女性口腔HPV感染与主动口交史和男性性伴侣生殖器HPV的感染无关，与年龄和性伴口腔HPV感染有关；女性生殖器HPV感染与年龄无关，与被动口交史、性伴口腔/生殖器HPV感染有关。性伴侣之间或夫妻双方HPV的交叉传播是造成不同

部位HPV感染的原因之一，提示HPV可经由多种性行为途径传播。因此，成功预防HPV通过性行为交叉感染的关键，除了做到避免多性伴侣的同时，在多种性行为方式（包括口交等）的过程中全程使用安全套，这样才能更好的在HPV的性传播上进行预防，从而最大化的减少HPV的性传播。此外，随着HPV疫苗在我国的普及和推广，积极接种HPV疫苗，尤其尚未有性行为时接种，也有一种有效的预防和减少HPV感染的防治办法。