基于HPLC-MS/MS法的咽炎片中麦冬掺伪检查

马昌豪 ，李洪芹，李怀伟

（1.山东省食品药品审评查验中心，山东 济南 250014 ；2.菏泽学院，山东 菏泽 274000；3.菏泽市食品药品检验检测研究院，山东 菏泽 274000）

咽炎片由玄参、百部（制）、天冬、牡丹皮、麦冬、款冬花（制）、木蝴蝶、地黄、板蓝根、青果、蝉蜕、薄荷油等十二味药材组成，具有养阴润肺，清热解毒，清利咽喉，镇咳止痒等作用，用于治疗慢性咽炎引起的咽干，咽痒，刺激性咳嗽，是治疗咽炎的常用药。麦冬为百合科植物麦冬Ophiopogon japonicus（L.f） Ker-Gawl.的干燥块根，主产于四川、浙江。山麦冬为百合科植物湖北麦冬Liriope spicata（Thunb.）Lour.var.prolifera Y.T.Ma或短葶山麦冬Liriope muscari（Decne.）Baily的干燥块根，根据产地不同习称湖北麦冬和福建麦冬[1]。麦冬具有养阴生津，润肺清心的功效，麦冬和山麦冬均收载于《中国药典》2020年版，两者功能主治相同，性状相近，易混用，日常抽检中发现有以山麦冬代替麦冬销售的情况。中医传统用药习惯中并不使用山麦冬，湖北麦冬仅作为地方用药[2-3]，同时研究[4]表明麦冬质量优于山麦冬，说明麦冬和山麦冬不能混用。

咽炎片制剂中存在麦冬掺伪投料的风险，应建立相关检验方法对山麦冬替代麦冬投料的情况进行检查。参考相关文献[5-7]本实验采用高效液相色谱-串联电喷雾三重四级杆质谱法（HPLC-MS/MS），分别以麦冬中的麦冬皂苷D、湖北麦冬中的山麦冬皂苷B、短葶山麦冬中的短葶山麦冬皂苷C为指标性成分，建立咽炎片中麦冬投料的检测方法，以判断咽炎片制剂中是否存在以山麦冬替代麦冬投料的情况。

1 仪器与试药

XS-105电子天平（梅特勒公司）、超声波清洗器（杭州超声波有限公司）、QTRAP6500高效液相色谱-串联电喷雾三重四级杆质谱（AB SCIEX公司）。

麦冬皂苷D（PS180725-04、Stanford Chemicals），麦冬对照药材（121013-201711）、湖北麦冬对照药材（121136-201803）、山麦冬皂苷B（111907-201103）和短葶山麦冬皂苷C（111908-201102）均来自中国食品药品检定研究院；甲醇、乙腈、甲酸均为色谱纯（Merk化工）；水为超纯水。

麦冬、湖北麦冬、短葶山麦冬分别购于安徽亳州中药材市场、菏泽鄄城舜王城药材市场，经菏泽市食品药品检验检测研究院马海春副主任中药师检定均为正品。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Innoval ODS-2（2.1 mm×100 mm，3 μm）色谱柱；流动相：乙腈-0.1 %甲酸：（75:25）；流速0.3 ml/min，柱温40 ℃，进样量2 μl。

2.2 质谱条件

扫描模式为质谱多反应监测（MRM），具体参数见表1。

表1 多反应监测条件

2.3 溶液的制备

2.3.1 对照品溶液 取麦冬皂苷D、山麦冬皂苷B、短葶山麦冬皂苷C对照品适量，分别加甲醇制成浓度为500，250，500 ng/ml对照品溶液。

2.3.2 药材溶液 取麦冬对照药材、湖北麦冬对照药材、短葶山麦冬药材适量，粉碎，分别称取0.5 g，加甲醇30 ml，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水25 ml使溶解，用水饱和的正丁醇提取2次，每次20 ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇5 ml使溶解，滤过，取续滤液，即得。

2.3.3 供试品溶液 取咽炎片6片，去除糖衣，研细，加甲醇30 ml，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水25 ml使溶解，用水饱和的正丁醇提取3次，每次25 ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇5 ml使溶解，滤过，取续滤液，即得。

2.3.4 标准样品及阴性样品溶液 按照咽炎片处方配料比，制备标准样品及缺少麦冬的阴性对照，按照2.3.3项供试品溶液制备方法制成标样溶液及阴性对照溶液。

2.4 对照品质谱确认结果

取3种对照品溶液，参照2.1项和2.2项下条件，进行HPLC-MS/MS分析。色谱图见图1～图3。

图1 麦冬皂苷D MRM总离子流图

图2 短葶山麦冬皂苷C MRM总离子流图

图3 山麦冬皂苷B MRM总离子流图

2.5 专属性试验

将2.3.2项和2.3.4项下药材溶液、标准样品溶液、阴性样品溶液在2.1项和2.2项条件下进样，结果见图4～图8。

图4 麦冬对照药材MRM总离子流图

图5 湖北麦冬对照药材MRM总离子流图

图6 短葶山麦冬药材MRM总离子流图

图7 标样溶液MRM总离子流图

图8 阴性样品溶液MRM总离子流图

由图可见，麦冬、湖北麦冬对照药材及短葶山麦冬药材分别只检出与麦冬皂苷D、山麦冬皂苷B、短葶山麦冬皂苷C对照品保留时间一致的离子峰，母离子及子离子峰均与对照品一致。标准样品溶液仅检出与麦冬皂苷D对照品保留时间一致的离子峰，阴性样品溶液未检出与各对照品相应的离子峰。由此判定，制剂中其他组分及辅料对目标成分无干扰，该方法可准确判定咽炎片是否存在麦冬掺伪投料。

2.6 检测限

分别取麦冬皂苷D、山麦冬皂苷B、短葶山麦冬皂苷C对照品溶液逐级稀释，以3倍信噪比为检测限，测定3种对照品，结果见表2。

表2 对照品检测限

2.7 结果测定

依照上述色谱及质谱条件，测定31批次样品，结果见表3。

表3 样品测定结果

由表3可见，有23批次样品仅检出麦冬皂苷D，未发现替代投料；有7批次样品检出短葶山麦冬皂苷C，表明混有短葶山麦冬投料；有1批次样品检出山麦冬皂苷B，表明混有湖北麦冬投料；有1批次样品检出山麦冬皂苷B和短葶山麦冬皂苷C，表明同时混有湖北麦冬和短葶山麦冬投料。

3 讨论

3.1 检测方法优化

前期研究中采用薄层色谱和液相色谱法检查，干扰较多，灵敏度难以满足要求。液质联用技术具有灵敏度高，专属性强的特点，在中药研究中广泛应用[8-12]。根据3种指标性成分化学结构，选用不同的采集模式，其中山麦冬皂苷B在正离子模式下的母离子信号响应较强，短葶山麦冬皂苷C和麦冬皂苷D在负离子模式下的母离子信号响应较强。为提高检验灵敏度，分别采用正负离子模式对3种指标性成分进行监测。

3.2 结果分析

现行药典收录的麦冬和山麦冬来源不同，在常规的性状鉴别上常难以区分。在前期调研中发现，部分农户种植的麦冬种质资源存在问题，采收后经鉴别为山麦冬，相关生产企业的药材验收人员对麦冬的鉴别要点认识不足，导致制剂企业可能存在混用的风险。本试验建立的液质联用的检查方法能够准确鉴别麦冬、湖北麦冬和短葶山麦冬，可为咽炎片质量标准的完善提供参考。该制剂中麦冬为提取后投料，后续的研究中将对麦冬原粉投料的制剂进行研究，为含麦冬类制剂的通用检查方法的建立提供依据。