临床微生物检验和细菌耐药性监测的应用价值研究

2022-03-04李琳

中国现代医生 2022年2期

李琳

[摘要] 目的分析微生物檢验工作和细菌耐药性监测工作开展的临床意义。方法在盘锦辽油宝石花医院检验科2019年3月至2020年8月接收的送检微生物标本中选出2000份为对象，根据标本的来源临床科室分为ICU组（n=650）、儿科组（n=350）、内科组（n=450）、外科组（n=550），收集检验的病原微生物及对四组标本进行细菌耐药性监测。结果 2000份微生物标本共培养出1765株病原菌，其中革兰阴性菌占54.96%，高于革兰阳性菌的40.79%（P<0.05），真菌仅占4.25%;1765株病原菌中共有507株耐药菌株，耐药菌株检出率为28.73%;四组的耐药菌株检出率：ICU组为34.53%，儿科组为16.06%，内科组为22.97%，外科组为31.86%，组间比较差异有统计学意义（P<0.05）;在耐药性监测中：革兰阳性菌对常见的抗生素耐药率偏高，对万古霉素和利奈唑胺的耐药率较低;革兰阴性菌对多数抗生素的耐药率居中，其中铜绿假单胞菌对多数抗生素的耐药率偏低。结论临床微生物检验和细菌耐药性监测的开展有利于临床医师明确患者的病原菌，并对药物治疗提供指导，选择敏感抗生素治疗，从而提高治疗效果。

[关键词] 微生物检验;病原微生物;细菌耐药性监测;耐药率

[中图分类号] R446.5 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2022）02-0123-04

Research on the application value of clinical microbiological test and bacterial drug resistance monitoring

LI Lin

Department of Clinical Laboratory， Panjin Liaoyou Baoshihua Hospital， Panjin 124010， China

[Abstract] Objective To investigate the application value of bacterial drug resistance monitoring and clinical microbiological test. Methods A total of 2000 microbiological specimens admitted to the department of clinical laboratory in Panjin Liaoyou Baoshihua Hospital from March 2019 to August 2020 were selected as the research objects. According to the source of clinical departments， the specimens were divided into the intensive care unit （ICU） group（n=650）， the pediatrics group（n=350）， the internal medicine group（n=450） and the surgery group （n=550）. The pathogenic microorganisms were collected and the bacterial drug resistance of 4 groups of specimens was monitored. Results A total of 1765 strains of pathogenic bacteria were cultured from 2000 microbial specimens， of which Gram-negative bacteria accounted for 54.96%. It was higher than 40.79% of the probability of Gram-positive bacteria（P<0.05）. And fungi only accounted for 4.25%. There were 507 drug-resistant strains in 1765 pathogenic bacteria， and the detection rate of drug-resistant strains was 28.73%. The detection rates of drug-resistant strains in four groups were 34.53% in the ICU group， 16.06% in the pediatrics group，22.97% in the internal medicine group and 31.86% in the surgery group， with statistically significant differences（P<0.05）. The results of several main Gram-positive bacteria and Gram-negative bacteria showed that the drug resistance rates of Gram-positive bacteria （Staphylococcus aureus， Streptococcus pneumoniae and Enterococcus） were higher than those of most antibiotics， while the drug resistance rates of vancomycin and linezolid were relatively lower. Meanwhile，the resistance rates of Gram-positive bacteria （Escherichia coli， Pseudomonas aeruginosa and Klebsiella） to most antibiotics were in the middle， and the resistance rate of Pseudomonas aeruginosa to most antibiotics was relatively lower. Conclusion The development of clinical microbiological test and bacterial drug resistance monitoring is helpful for clinicians to identify the pathogenic bacteria of patients， provide guidance for drug treatment， and choose sensitive antibiotics to improve the therapeutic efficacy.

[Key words] Microbiological test; Pathogenic microorganisms; Bacterial drug resistance monitoring; Drug resistance rate

细菌耐药性问题是指抗生素与细菌接触后，细菌的代谢发生改变，避免被药物杀灭[1-3]。近年来细菌耐药性问题越来越多，抗菌药物的治疗效果明显下降，关于预防细菌耐药性及延缓细菌耐药性逐渐成为重点研究[4-5]。细菌作为主要的病原体之一，其可引起多种疾病，当机体免疫力降低时，细菌更容易侵袭感染，因此抗菌药物的合理应用有重要意义。耐药菌株的出现使得抗菌药物的疗效大大降低，影响患者的早日康复。为确保细菌感染性疾病患者治疗中药物使用的规范性、合理性，检验科的微生物检验工作中根据实际情况进行必要的细菌耐药性监测也成为重要的任务，以助于临床医师合理选择抗菌药物，提高治疗效果[6]。本研究选取2000份微生物标本为例，探究细菌耐药性监测的应用价值，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取盘锦辽油宝石花医院检验科2019年3月至2020年8月期间接收的送检微生物标本2000份为对象，根据标本来源科室分组：ICU组共有650份标本，其中血液标本222份，痰液标本275份，分泌物标本87份，尿液标本66份;儿科组共有350份标本，其中血液标本120份，痰液标本141份，分泌物标本52份，尿液标本37份;内科组共有450份标本，其中血液标本138份，痰液标本176份，分泌物标本75份，尿液标本61份;外科组共有550份标本，其中血液标本180份，痰液标本227份，分泌物标本80份，尿液标本63份。四组一般资料比较，差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 菌株鉴定本研究的2000份微生物标本均先进行细菌培养，依照常规工作流程将标本接种到血平板、巧克力平板、麦康凯培养基中，在35℃、5%～7% CO2环境下培养24～48 h，分离出可疑菌落后，最后用DL-96Ⅱ细菌测定系统进行细菌的鉴定。

1.2.2 耐药性监测将分离出来的细菌采用MIC法分析，观察不同抗菌药物的最低抑菌浓度。并参照CLSI近两年的标准确定细菌的耐药性。最后借助DL-96Ⅱ细菌测定系统的药敏板条进行药敏试验，严格按照规范操作。

1.3 观察指标

①统计本组2000份微生物标本中培养分离出的病原菌占比及进行病原菌鉴定后的分布状况。②对ICU组、外科组、儿科组、内科组分离出的病原菌进行耐药性检测，统计四组的耐药菌株检出率。③对分离出的革兰阳性菌和革兰阴性菌中概率排名前3位的细菌进行耐药性检测，统计常見抗菌药物的耐药率。

1.4 统计学方法

采用SPSS 24.0统计学软件进行数据分析，计数资料采用[n（%）]表示，组间比较采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 菌株分布情况

本研究中，2000份微生物标本经培养分离鉴定，共分离出1765株病原菌，其中真菌较少，仅占4.25%，革兰阴性菌的占比率为54.96%，明显高于革兰阳性菌的40.79%（χ2=70.950，P=0.000<0.05）。金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、肺炎链球菌、肠球菌属、克雷伯属的占比较高。见表1。

2.2 耐药菌株检出率比较

1765株病原菌经耐药性检测，共检出507株耐药菌株，检出率为28.73%。ICU组患者的耐药菌株检出率最高，其次是外科组，明显高于儿科组和内科组检出率（P<0.05）。见表2。

2.3 主要菌株对抗生素的耐药性

①金黄色葡萄球菌对红霉素、青霉素G、克林霉素的耐药率均较高，超过50%，而利福平、利奈唑胺、万古霉素的耐药率较低。肺炎链球菌对红霉素、青霉素G的耐药率较高，对利奈唑胺、万古霉素、莫西沙星的耐药率较低。肠球菌属对红霉素、青霉素G、四环素、莫西沙星、苯唑西林的耐药率较高，对利奈唑胺、万古霉素的耐药率较低。见表3。②大肠埃希菌对氨苄西林、氨曲南、环丙沙星、哌拉西林、庆大霉素、头孢曲松、头孢唑林、左氧氟沙星等药的耐药率均较高，对厄他培南、呋喃妥因、亚胺培南、阿米卡星的耐药率较低。铜绿假单胞菌对阿米卡星、头孢吡肟的耐药率较低，均在10%以下，对氨曲南、环丙沙星、哌拉西林、庆大霉素、头孢他啶等药的耐药率居中，在10%～30%。克雷伯属多数抗生素的耐药率居中，其中对亚胺培南的耐药率在10%以下。见表4。

3 讨论

细菌有多种耐药基因，随着临床上抗菌药物的广泛使用，细菌耐药问题日益突出，多重耐药菌株也越来越多，对感染类疾病的治疗造成重大困扰，因此细菌耐药问题是临床研究的重点课题，是亟待解决的问题之一[7-8]。细菌的耐药性可分为两种：①天然耐药，又被称为固有耐药，其关键在于细菌的染色体基因，经过代代相传，自身无变化，如临床上常见的有链球菌对氨基糖苷类抗生素不敏感，肠道G-杆菌对青霉素类抗生素耐药等就属于天然耐药，是由细菌的染色体基因导致的耐药性。②获得性耐药，这种是临床上最为常见的耐药，是指细菌在与抗生素接触后，在质粒介导下使得细菌无法被抗生素杀灭，最常见的是金黄色葡萄球菌产生的β-内酰胺酶。另外，获得性耐药问题并不会因不再接触抗生素而消失，还可能经质粒将耐药基因转移到细菌的染色体上，代代相传，形成天然耐药。

细菌耐药性的产生的原因：①细菌生存过程中产生灭活酶，这是细菌耐药性产生的主要机制之一，使得抗生素在杀灭细菌作用发挥前就被细菌的灭活酶破坏失去活性，无法起到预期的抗菌效果。常见的灭活酶有β-内酰胺酶、氯霉素乙酰转移酶、氨基糖胺类钝化酶等[9-10];②抗菌药物作用的靶位变化，抗生素对细菌的作用靶位被细菌所产生的酶等修饰或是发生突变，使得作用靶位发生一定变化，无法发挥抗菌效果;或抗菌靶位的结构等的变化，使得药物与细菌的亲和力降低，使得药物与细菌无法结合，从而丧失抗菌活性。例如：链霉素是常用的抗生素，其作用靶位是30S亚基上的S12蛋白，一旦S12蛋白的结构等发生一定变化，就会导致链霉素无法顺利与其结合，从而产生耐药性;③当细菌的细胞壁通透性改变，使得抗菌药物无法顺利进入细菌体内[11]。当细菌接触到抗生素后，自主改变通道蛋白的性质、数量等，从而使得细胞的膜通透性改变，导致获得性耐药问题的发生。如革兰阳性菌多数对多黏菌素类抗生素的耐药性较高，主要是因为抗生素难以通透细菌的厚细胞壁导致的。也有细菌的细胞膜具有能量依赖性泵出系统，使得进入的抗生素能向外泵出，从而达到预期的抗菌效果。

本研究中，对2000份微生物标本共分离培养出1765株病原菌，其中革兰阴性菌的占比为54.96%，高于革兰阳性菌的40.79%（P<0.05），而真菌则较少，仅占4.25%，常见的病原菌有金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、肠球菌属、克雷伯属、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌。对这几种概率较高的革兰阳性菌、革兰阴性菌分别进行细菌耐药性监测，结果发现革兰阳性菌对多数抗生素耐药率较高，其中万古霉素、利奈唑胺的耐药率较低，可有效杀灭细菌，因此在临床用药时可结合患者的具体情况用药，选择万古霉素等抗生素，提高抗菌效果。大肠埃希菌、克雷伯属对喹诺酮类、β-内酰胺类药物的耐药率较高，增加了临床治疗的难度，这主要是因为大肠埃希菌等细菌能产生超广谱的β-内酰胺酶，β-内酰胺酶能水解灭活青霉素、头孢菌素，而且质粒介导在菌株之间传递，最终导致细菌对青霉素、头孢菌素的耐药性偏高。但是对亚胺培南则较为敏感，故而可将亚胺培南用于革兰阴性菌引起的感染治疗中[12-13]。

本研究进行细菌耐药性监测，结果发现ICU组患者的耐药菌株检出率最高，其次是外科组，明显高于内科组和儿科组的耐药菌株检出率（P<0.05）。笔者认为，ICU收治的患者病情危重，且治疗周期长，侵入性治疗操作多，更易发生感染，使得耐药菌数也相应较多。外科患者则有暴露的伤口，且多数患者伴有不同程度的炎症反应，也更容易引起耐药问题。因此临床上需加强对ICU、外科患者的监测，重视细菌耐药性问题的监测观察，为患者选择敏感抗生素治疗，促进患者早日康复[14-15]。

综上所述，细菌耐药性已成为感染类疾病治疗中的难点，在微生物检验工作中，临床上也需结合实际情况进行定期、不定期的耐药性监测，观察细菌耐药性问题的现状、发展趋势等，同时也指导临床医师根据患者的耐药状况合理选用抗生素，为合理使用抗菌药物提供指导，提高用药的有效性和安全性，避免耐药菌株、多重耐药菌株的出现，规范用药，值得推广。

[参考文献]

[1] 王新.细菌耐药性监测在临床微生物检验中的作用分析[J].国际医药卫生导报，2019，25（23）：3913-3914.

[2] 李瑞鋒.某院临床微生物检验及其耐药性监测结果对合理用药的影响[J].抗感染药学，2020，17（3）：360-362.

[3] 冯丽娜，李从荣，蔡璇，等.武汉市某医院临床病原微生物的分布及耐药性监测[J].国际检验医学杂志，2018， 39（19）：2360-2365.

[4] 李翠翠，胡同平，张利霞.2018年内蒙古包头市细菌耐药性监测[J].中国抗生素杂志，2020，45（6）：602-609.

[5] 孙毅麟.2015年至2017年某三甲医院耐碳青霉烯铜绿假单胞菌的临床分布及耐药性监测[J].当代医学，2020，26（6）：164-165.

[6] 钟佳伶，黄湘宁，喻华.四川省2016-2017年肿瘤患者感染细菌分布及药物耐药性监测分析[J].实用医院临床杂志，2018，15（5）：196-201.

[7] 邹秀珍，茆海丰，史家欣，等.一所综合医院连续三年医院感染发病率及病原菌耐药性监测报告[J].中国感染控制杂志，2018，17（2）：97-102.

[8] 李艳明，简子娟，邹明祥，等.中南大学湘雅医院2013-2017年细菌耐药性监测[J].中国感染控制杂志，2020， 19（7）：620-629.

[9] 陈凤琴，陈宇锋，杨伟业.医院感染革兰阴性杆菌的临床分布及耐药性监测[J].深圳中西医结合杂志，2018， 28（23）：181-183.

[10] 张慧，沈芳，周聪，等.2016-2018年上海市第五人民医院细菌耐药性监测[J].中国感染与化疗杂志，2020，20（2）：187-194.

[11] 宋晓超，乔美珍，赵丽娜，等.神经外科碳青霉烯耐药革兰阴性菌医院感染与社区感染分布及耐药性分析[J].中华医院感染学杂志，2020，30（19）：2979-2985.