槐杞黄颗粒对肝癌患者的疗效观察及MMPs/TIMPs水平的影响

陈云清 王柯尹 邓敏 陆许贞 邹卓林

[摘要] 目的 探討槐杞黄颗粒治疗肝癌的临床疗效及对MMPs/TIMPs的影响。 方法 选取浙江省嘉兴市第一医院2018年11月至2020年11月肝癌患者90例，随机分为肝癌组、槐杞黄低剂量组、槐杞黄高剂量组，每组各30例，另选取15名健康者设为对照组。全自动生化仪检测研究对象ALT、AST、AFP水平，ELISA法检测血清MMP-2、MMP-9及TIMP-2和TIMP-1含量，观察各组症状改善、生活质量评分情况。 结果 肝癌组、槐杞黄低剂量组、高剂量组ALT、AST、AFP水平逐渐下降，但高于对照组，差异有统计学意义（P<0.001）。肝癌组、槐杞黄低、高剂量组血清MMP-2、MMP-9逐渐降低（P<0.05），但高于对照组（P<0.05），血清TIMP-2和TIMP-1含量逐渐升高（P<0.05），但低于对照组（P<0.05）。高剂量组临床症状改善率为80.00%，明显高于低剂量组和肝癌组（P<0.05）。槐杞黄高剂量组KPS评分较低剂量组和肝癌组升高，差异有统计学意义（P<0.05）。 结论 槐杞黄颗粒治疗肝癌能够有效改善肝功能，提高临床疗效，可能通过降低MMPs及TIMPs水平相关，值得临床广泛应用。

[关键词] 槐杞黄颗粒;肝癌;疗效;MMPs/TIMPs

[中图分类号] R735.7          [文献标识码] B          [文章编号] 1673-9701（2022）02-0112-04

Observation on the therapeutic efficacy of Huaiqihuang granules on patients with liver cancer and its impacts on MMPs/TIMPs level

CHEN Yunqing   WANG Keyin   DENG Min   LU Xuzhen   ZOU Zhuolin

Department of Infectious Disease， the First Hospital of Jiaxing in Zhejiang Province， Jiaxing   314000， China

[Abstract] Objective To investigate the clinical efficacy of Huaiqihuang granules on liver cancer and its impacts on matrix metalloproteinases （MMPs）/tissue inhibitors of metalloproteinases （TIMPs）. Methods A total of 90 patients with liver cancer admitted to the First Hospital of Jiaxing in Zhejiang Province from November 2018 to November 2020 were selected. They were randomly divided into the liver cancer group （n=30）， the low-dose Huaiqihuang group （n=30） and the high-dose Huaiqihuang group （n=30）， and another 15 healthy people were selected and set as the control group （n=15）. The levels of alanine transaminase （ALT）， aspartate transaminase （AST） and alpha-fetoprotein （AFP） of the subjects were detected by fully automatic biochemical analyzer， and the contents of MMP-2， MMP-9， TIMP-2 and TIMP-1 in serum were detected by the enzyme linked immunosorbent assay （ELISA） method. The improvement of symptoms and KPS score of quality of life in each group were observed. Results The levels of ALT， AST and AFP in the liver cancer group， the low-dose Huaiqihuang group and the high-dose Huaiqihuang group decreased gradually， which were relatively lower than those in the control group， with statistically significant differences （P<0.001）. Serum MMP-2 and MMP-9 in the liver cancer group， the low-dose Huaiqihuang group and the high-dose Huaiqihuang group decreased gradually （P<0.05）， but increased compared with the control group （P<0.05）. Contents of the serum TIMP-2 and TIMP-1 increased gradually （P<0.05）， but decreased compared with the control group （P<0.05）. The improvement rate of clinical symptoms in the high-dose group was 80.00%， which was significantly higher than that in the low-dose group and the liver cancer group （P<0.05）. The KPS score of the high-dose Huaiqihuang group was higher than those of the low-dose Huaiqihuang group and the liver cancer group， with statistically significant difference （P<0.05）. Conclusion Huaiqihuang granules can effectively improve liver function and clinical efficacy in the treatment of liver cancer， which may be related to decreasing the levels of MMPs and TIMPs. Therefore， it is worthy of wide clinical application.

[Key words] Huaiqihuang granules; Liver cancer; Therapeutic efficacy; Matrix metalloproteinases/tissue inhibitors of metalloproteinases

原发性肝癌（primary liver cancer，PLC，简称肝癌）是常见的恶性肿瘤，其发病率呈逐年上升的趋势[1]，其发生是一个复杂的慢性病理过程，肝炎-肝硬化-肝癌被称为肝癌发展三部曲，细胞外基质（extracellular matrix，ECM）合成与降解失衡，纤维组织大量积聚是肝硬化发展为肝癌的必经阶段[2]。基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinases，MMPs）与其组织抑制剂（tissue inhibitors of matrix metalloproteinases，TIMPs）不仅介导ECM的降解，而且控制腫瘤新生血管形成，影响肿瘤细胞生长，是肿瘤侵袭转移中重要的调控分子之一[3-4]。槐杞黄颗粒的主要成分为槐耳菌质，具有抑制血管内皮细胞增殖、调节机体免疫平衡等功效，目前已被应用于肺癌、胃肠癌等多种肿瘤性疾病中[5-6]。本研究旨在通过观察不同剂量槐杞黄颗粒治疗肝癌患者的临床疗效及MMPS/TIMPS含量变化，探讨槐杞黄颗粒在对肝癌防治中发挥的作用及其相关机制，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择嘉兴市第一医院2018年11月至2020年11月90例肝癌患者，根据随机数字表法分为肝癌组、槐杞黄低剂量组、槐杞黄高剂量组，每组各30例，其中肝癌组男14例，女16例，年龄40～69岁，平均（53.9±6.9）岁，肝细胞肝癌24例，胆管细胞肝癌6例;槐杞黄低剂量组男12例，女18例，年龄39～69岁，平均（54.0±7.2）岁，肝细胞肝癌25例，胆管细胞肝癌5例;槐杞黄高剂量组，男14例，女16例，年龄40～71岁，平均（54.4±7.8）岁，肝细胞肝癌26例，胆管细胞肝癌4例，参照中国抗癌协会肝癌专业委员会2001年修订的分期标准[7]：Ⅰa期4例，Ⅰb期12例，Ⅱa期10例，Ⅱb期20例，Ⅲa期36例，Ⅲb期8例。另选取嘉兴市第一医院体检中心经体检合格的健康者（无心、肺、肾等主要脏器疾患，肝肾功能正常）15名，设为对照组。各组患者在年龄、性别、分型等方面比较，差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。所有患者签署知情同意书，本研究获得医院医学伦理委员会许可。纳入标准：①经临床两种以上影像学检查（上腹部B超、CT或MRI）或肝组织穿刺符合《原发性肝癌诊疗规范》[8]诊断标准者;②未接受手术、放化疗治疗者;③同意参加本研究者。排除标准：①合并心脏、肺、脑血管等重大脏器疾病者;②合并其他脏器肿瘤者;③应用激素、免疫抑制剂者。

1.2 方法

肝癌组：每天予还原型谷胱甘肽针（山东绿叶制药有限公司，国药准字H20030001，规格：0.3 g）1.2 g静滴护肝，疗程15 d;槐杞黄低剂量组：在对症治疗上加用槐杞黄颗粒（启东盖天力药业有限公司，国药准字B2002007），每日2次，每次1袋，口服15 d;槐杞黄高剂量组：对症治疗的基础上加用槐杞黄颗粒，每日2次，每次2袋，口服15 d。15 d为1个疗程，共2个疗程。

1.3 观察指标及评价标准

应用全自动生化仪（罗氏cobas8000）及其配套试剂检测研究对象ALT、AST、AFP水平。ELISA法检测血清MMP-2、MMP-9及TIMP-2和TIMP-1水平，按试剂盒说明书操作，ELISA试剂盒购自杭州联科生物公司。采用生活质量（KPS）评分法比较各组治疗前后体力状态，满分为100 分，分值越高，提示体力状态越好，增加>10分定为提高，减少>10分为降低，变化≤10 分稳定，研究者均通过一致性检验，结果符合要示者。总提高率=（提高+稳定例数）/总例数×100%[9]。15 d后观察临床症状改善情况：食欲显著好转，腹胀基本消失，恶心、呕吐消失为显效;食欲有所好转，腹胀好转，恶心呕吐改善为有效;食欲无好转或下降，腹胀无好转，恶心呕吐无改善为无效，总有效率=（显效+有效）例数/总例数×100%[10]。

1.4 统计学方法

采用SPSS 19.0 统计学软件对数据进行分析处理，计量资料以（x±s）表示，计数资料采用χ2检验，组间比较采用t检验或单因素方差分析，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组ALT、AST、AFP水平比较

肝癌组、槐杞黄低剂量组、高剂量组ALT、AST、AFP水平逐渐下降，但均高于对照组，差异有统计学意义（P<0.001）。见表1。

2.2 各组血清MMP-2、MMP-9、TIMP-2和TIMP-1水平比较

肝癌组、槐杞黄低、高剂量组血清MMP-2含量分别为（382.67±10.15）ng/ml，（376.17±8.05）ng/ml、（370.60±6.76）ng/ml，MMP-9含量分别为（277.30±8.61）ng/ml、（251.40±9.78）ng/ml、（244.30±7.63）ng/ml，两者均逐渐降低（P<0.05），但均高于对照组（P<0.05），肝癌组、槐杞黄低、高剂量组血清TIMP-2和TIMP-1含量逐渐升高（P<0.05），但低于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。见表2。

2.3 各组临床疗效比较

槐杞黄高剂量组临床症状改善总有效率为80.00%，明显高于低剂量组的53.33%（χ2=4.800，P<0.05），且高于肝癌组，差异有统计学意义（χ2=24.267，P<0.05）。见表3。

2.4 各组生活质量（KPS）评分比较

槐杞黄高剂量组用药前后KPS评分总提高率76.67%，低剂量组总提高率50.00%，肝癌组总提高率为16.67%，槐杞黄高剂量组较低剂量组升高（χ2=4.593，P<0.05），均较肝癌组升高，差异有统计学意义（χ2=13.157，P<0.05）。见表4。

3 讨论

肝癌在生物学特征上具备肿瘤局部浸润和远处转移的能力，一方面，在肿瘤生长的过程中，肿瘤细胞能够分泌大量血管内皮细胞生长因子（VEGF）刺激内皮细胞增殖、迁移，增加毛细血管数量，为肿瘤生长提供丰富的营养和血供，促进肿瘤细胞向周围组织浸润，另一方面，肿瘤微环境中ECM被降解，组织屏障破坏，形成肿瘤细胞运行通道，肿瘤细胞有效逃避机体的免疫监视，形成转移灶。MMPs是一类依赖Ca2+、Zn2+等离子作为辅助因子的内肽酶，包括胶原酶（collagenases）、明胶酶（gelatinases）、基質溶解酶（matrilysins）等6类酶蛋白分子，不仅能降解ECM中的多种胶原蛋白、纤维连接蛋白、弹性蛋白和蛋白聚糖等各种重要组成成分，影响胶原的正常沉积和结构的重塑，促进纤维化进程，导致肿瘤细胞沿基底膜缺损向周围浸润[11]，还能通过调节VEGF受体等影响内皮细胞，刺激肿瘤血管迅速生成，是肝纤维化和各种肿瘤发生发展中重要的调控分子之一[12]。Antonio等[13]的研究显示，MMP-9的表达水平在结直肠癌患者中显著升高，也有研究提示MMP-2的表达与胰腺癌、胃癌的侵袭浸润有密切关系[14-16]。TIMPs是可抑制MMPs的天然活性制剂，其中TIMP-2和TIMP-1主要对MMP-2、MMP-9进行严格调控，正常情况下，两者相互作用共同维持机体内ECM稳态，一旦这种平衡被打破，则会影响肿瘤的发生、转移。

槐杞黄颗粒是由槐耳菌质、枸杞子、黄精为主制成的颗粒剂，其中作为主要成分的槐耳菌质具有抑制肿瘤细胞生长和新生血管形成、调节机体免疫功能等功效[17]。在通过槐杞黄清膏低、中、高剂量对抑制大鼠肾间质纤维化的研究中显示槐杞黄清膏可通过抑制间质肌成纤维细胞增殖和迁移减少肌成纤维细胞聚集发挥抗纤维化作用，且高剂量槐杞黄组对纤维化进程影响更为显著[18]。Li等[19]指出槐杞黄能通过调节p-ERK/CHOP信号通路促进足细胞增殖，抑制细胞凋亡，保护足细胞免受损伤，在肾纤维化中发挥重要作用。也有学者发现，槐耳能通过抑制MMP-9使乳腺癌患者MCF-7细胞的迁移和侵袭力明显下降，将槐耳颗粒辅助化疗联合治疗，患者总生存率明显提高，预后显著改善[20-21]。另枸杞子含多糖，能促进脾脏T细胞增殖，调节免疫功能，补肝明目，可促进肝损伤的修复和肝细胞再生[22-23];黄精补气而兼润养，抗疲劳抗氧化，发挥益气滋阴之功效。

本研究分剂量对临床上治疗肝癌需要多大剂量才能达到最佳治疗效果进行探讨，结果显示，槐杞黄低、高剂量组患者肝功能指标、AFP逐渐下降，槐杞黄高剂量组临床症状改善率明显高于低剂量组，KPS评分槐杞黄高剂量组较低剂量组及肝癌组均有所升高，提示槐杞黄颗粒可在一定程度上减少肝损伤，改善肝功能，减轻临床症状，肝癌组、槐杞黄低、高剂量组血清中MMP-2、MMP-9逐渐下降，但较对照组均有所升高，血清TIMP-2和TIMP-1含量逐渐升高，但较对照组均降低，提示肝癌患者体内存在MMPS/TIMPs失衡，槐杞黄颗粒可能通过调控MMPS/TIMPs影响细胞外基质降解延缓肝纤维化发展以及阻断肿瘤细胞增殖和迁移，成为控制肝癌浸润、转移的一个理想途径。

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（收稿日期：2021-06-02）