杓唇石斛化学成分研究

杨宗玉张瑜杨进 罗婉丽 张茂生王刚 孙成新 董敏健 肖世基

（遵义医科大学药学院， 贵州 遵义563000）

石斛为“药食同源”的常用名贵中药材之一，始载于《神农本草经》，具有增强脾胃、活津止渴、清热等功能，在我国拥有2 000 多年的用药历史，民间广泛应用于治疗热病津伤、口干烦渴、病后虚热等多种病症。石斛所含化学成分复杂，石斛属植物富含糖类、生物碱类、联苄类、菲类、香豆素类、茐酮类、甾体皂苷、二萜类等化学成分［1］。杓唇石斛Dendrobium moschatum（Buch.⁃Ham.）Sw.通常被用作园艺观赏植物，主要分布于中国云南省南部到西部地区，并生长在海拔1 300 m 的树干上。杓唇石斛新鲜花序和叶片富含精油［2⁃3］。从杓唇石斛中分离出的联苄衍生物杓唇石斛素，具有抗肿瘤［4⁃7］、抑制血管新生［8］、抗炎［9］等功能，其结构简单，药理活性广，具有广阔的开发前景。但现今对该植物化学成分的研究报道很少，本文以杓唇石斛全株为研究对象，运用各种色谱分离技术对其甲醇提取部分的化学成分进行分离，利用波谱技术对化合物进行化学结构鉴定。

1 材料

LC⁃3000 型半制备型高效液相色谱仪（北京创新通恒科技有限公司）；分析型高效液相色谱仪（大连依利特分析仪器有限公司）；Sepacore 型中压制备系统（瑞士Buchi 公司）；RE⁃2000A 型旋转蒸发仪（上海亚荣仪器生化仪器厂）；ZF⁃7 型暗箱三用紫外线分析仪（上海嘉鹏科技有限公司）；KQ⁃500DE 数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；SHB⁃ⅢA 循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）；半制备C18柱（日本YMC 公司）；Finnigan LCQDECA型质谱仪（德国Bruker 公司）；分析C18柱、Agilent DD2400⁃MR 型核磁共振仪（美国Agilent 公司）；FA2004N 电子天平（上海菁海仪器有限公司）；硅胶（青岛鼎康硅胶有限公司）。甲醇、乙腈（色谱纯，成都市科龙化工试剂厂）。

杓唇石斛全草，采摘于云南保山，经由遵义医科大学吴发明教授鉴定为兰科植物杓唇石斛Dendrobium moschatum（Buch.⁃Ham.）Sw.，保 存于遵义医科大学药学院。

2 提取与分离

将22.0 kg 新鲜的杓唇石斛切段，阳光下曝晒后粉碎，干粉重4.5 kg，室温下用10 倍体积的90%甲醇超声提取30 min，共提3次，合并提取液，用滤纸过滤，滤液经MCI柱，甲醇⁃水（90∶10）洗脱，除掉叶绿素，减压浓缩得甲醇浸膏213.8 g；将甲醇浸膏转移至烧杯中，加入蒸馏水使其分散，分别用乙酸乙酯、正丁醇各萃取3次，减压浓缩，得到乙酸乙酯浸膏30.0 g、正丁醇浸膏50.0 g。

将正丁醇部分浸膏经硅胶柱色谱，石油醚⁃乙酸乙酯⁃甲醇（1∶1∶0～0∶1∶1）梯度洗脱，得3个组分，分别将这3 个组分减压浓缩，得到乙酸乙酯⁃石油醚（1∶1）浸膏2.1 g、乙酸乙酯浸膏1.9 g、乙酸乙酯⁃甲醇（1∶1）浸膏25.7 g；经分析型高效液相色谱仪分析由正丁醇部分得到的这3个部分的浸膏，与乙酸乙酯浸膏对比分析后发现乙酸乙酯浸膏（正丁醇部分）、石油醚⁃乙酸乙酯（1∶1）浸膏（正丁醇部分）与乙酸乙酯浸膏有较多相似的成分，将这3 部分合并，得到浸膏（34.0 g）。将浸膏（34.0 g）经中压硅胶柱色谱，石油醚⁃乙酸乙酯（20∶1～0∶1）梯度洗脱及TLC检测分析合并后，共得到Fr.1～Fr.11。

Fr.7 经梯度洗脱，经TLC 检测后合并，减压浓缩后，加入甲醇溶解，加入MCI 填料拌样经反相制备HPLC，甲醇⁃水（30∶70～100∶0）进行梯度洗脱，减压浓缩，TLC 检测分析后合并得到Fr.7.1～Fr.7.21。Fr.7.10 经反相制备HPLC，甲醇⁃水（61∶39）洗脱得到化合物2（12.0 mg）；Fr.7.14 经反相制备HPLC，甲醇⁃水（74∶26）洗脱得到化合物4（11.0 mg）；Fr.7.19 经反相制备HPLC，甲醇⁃水（85∶15）洗脱得到化合物5（7.8 mg）。

Fr.5 梯度洗脱合并，减压浓缩，加入甲醇溶解，加入MCI 填料拌样经反相制备HPLC，甲醇⁃水（10∶90～100∶0）进行梯度洗脱，减压浓缩，TLC 检测分析后合并得到Fr.5.1～Fr.5.14，溶剂挥发后，Fr.5.3 呈白色结晶状，反复重结晶后得到化合物1（14.5 mg）。Fr.5.7 经反相制备HPLC，甲醇⁃水（86∶14）洗脱得到化合物6（2.0 mg）；取Fr.5.4 经反相制备HPLC，甲醇⁃水（86∶14）洗脱得到化合物9（18.6 mg）。

Fr.9 梯度洗脱合并，减压浓缩，加入甲醇溶解，加入MCI 填料拌样经经反相制备HPLC，甲醇⁃水（30∶70～100∶0）进行梯度洗脱，TLC 检测观察分析后合并得到Fr.9.1～Fr.9.15，溶剂挥发后，样品Fr.9.10 呈砖红色粉末状，加甲醇多次润洗后得到化合物3（35.6 mg）。Fr.9.7 经反相制备HPLC，乙腈⁃水（39∶61）洗脱得到化合物7（35.0 mg）、化合物8（5.0 mg）、化合物10（7.0 mg）。Fr.9.1 经反相制备HPLC，乙腈⁃水（39∶61）洗脱得到化合物11（16.4 mg）。

3 结构鉴定

化合物1：无色片晶体。1H⁃NMR（400 MHz，CDCl3）δ：7.65（1H，d，J＝9.5 Hz，H⁃3），7.51～7.39（2H，m，H⁃7，8），7.30～7.18（2H，m，H⁃5，6），6.35（1H，d，J＝7.1 Hz，H⁃4）。经波谱数据和文献［10］ 对照鉴定化合物1 为香豆素。

化合物2：无色针状结晶，分子式C15H14O3，ESI⁃MSm／z：241.1 ［M⁃H］－。1H⁃NMR（400 MHz，CD3OD）δ：7.05（1H，t，J＝7.7 Hz，H⁃7），6.81（2H，d，J＝7.7 Hz，H⁃6，8），6.54（1H，d，J＝2.1 Hz，H⁃3），6.49（1H，d，J＝2.1 Hz，H⁃1），3.93（3H，s，4⁃OCH3），2.62（4H，d，J＝6.2 Hz，H⁃9，10）；13C⁃NMR（100 MHz，CD3OD）δ：157.5（s，C⁃2），155.4（s，C⁃4），153.0（s，C⁃5），143.2（s，C⁃10a），140.4（s，C⁃8a），126.9（s，C⁃7），120.6（m，C⁃4b），119.2（s，C⁃8），116.8（s，C⁃6），113.6（s，C⁃4a），108.6（s，C⁃1），98.7（s，C⁃3），56.1（s，4⁃OCH3），30.9（s，C⁃9），30.6（s，C⁃10）。经波谱数据和文献［11］ 对照鉴定化合物2 为2，5⁃二羟基⁃4⁃甲氧基⁃9，10⁃二氢菲。

化合物3：无色针状结晶。1H⁃NMR（400 MHz，CD3COCD3）δ：9.51（1H，s，OH⁃5），8.96（1H，s，OH⁃2），7.61（1H，t，J＝9.1 Hz，H⁃9），7.50（1H，d，J＝8.8 Hz，H⁃10），7.43（1H，q，J＝3.7 Hz，H⁃7），7.40（1H，dd，J＝7.8，2.2 Hz，H⁃8），7.11（1H，dd，J＝7.0，2.2 Hz，H⁃6），7.07（1H，d，J＝2.5 Hz，H⁃1），6.99（1H，d，J＝2.5 Hz，H⁃3），4.14（3H，s，4⁃OCH3）；13C⁃NMR（100 MHz，CD3COCD3）δ：156.4（s，C⁃2），155.5（s，C⁃4），154.3（s，C⁃5），136.2（s，C⁃8a），134.1（s，C⁃10a），128.9（s，C⁃9），126.6（s，C⁃7），126.1（s，C⁃10），120.2（s，C⁃8），118.9（s，C⁃4b），116.1（s，C⁃6），113.0（s，C⁃4a），106.9（s，C⁃1），101.5（s，C⁃3），57.6（s，4⁃OCH3）。经波谱数据和文献［12］ 对照鉴定化合物3 为4⁃甲氧基菲⁃2，5⁃二醇。

化合物4：浅黄色固体。1H⁃NMR（400 MHz，CD3COCD3）δ：6.31（1H，s，H⁃12 ），6.29（1H，s，H⁃14），5.10（1H，td，J＝6.4，3.1 Hz，H⁃3），3.73（3H，s，13⁃OCH3），2.86（1H，s，H⁃10a），2.71～2.62（1H，m，H⁃10b），2.43（1H，dd，J＝6.4，3.1 Hz，H⁃4a），1.89（1H，dd，J＝9.1，6.4 Hz，H⁃5a），1.59（4H，d，J＝5.6 Hz，H⁃4b，5b，6a，9a），1.39（3H，s，H⁃17），1.25（4H，d，J＝6.4 Hz，H⁃7，8），1.21～1.13（2H，m，H⁃6b，9b）；13C⁃NMR（100 MHz，CD3COCD3）δ：168.7（s，C⁃1），160.0（s，C⁃15），158.9（s，C⁃13），143.3（s，C⁃11），118.1（s，C⁃16），108.8（s，C⁃12），97.4（s，C⁃14），72.0（s，C⁃3），56.1（s，13⁃OCH3），33.2（s，C⁃4），31.0（s，C⁃10），30.6（s，C⁃9），27.5（s，C⁃8），25.9（s，C⁃7），25.3（s，C⁃6），21.6（s，C⁃5），19.9（s，C⁃17）。经波谱数据和文献［13］ 对照化合物鉴定化合物4 为ozoroalide。

化合物5：浅黄色油状物，分子式C18H32O3，ESI⁃MSm／z：295.2 ［M⁃H］－。1H⁃NMR（400 MHz，CD3COCD3）δ：6.50（1H，dd，J＝15.0，11.3 Hz，H⁃11），5.96（1H，t，J＝11.0 Hz，H⁃10），5.65（1H，dd，J＝15.1，6.3 Hz，H⁃12），5.36（1H，dd，J＝18.4，7.9 Hz，H⁃9），4.12～4.05（1H，m，H⁃13），2.25（2H，t，J＝7.2 Hz，H⁃2），2.16（2H，dd，J＝13.7，6.8 Hz，H⁃8），1.63～1.15（18H，m，H⁃3，7，14～17），0.85（3H，t，J＝6.4 Hz，H⁃18）；13C⁃NMR（100 MHz，CD3COCD3）δ：174.9（s，C⁃1），138.6（s，C⁃12），132.0（s，C⁃9），129.4（s，C⁃11），125.2（s，C⁃10），72.4（s，C⁃13），38.5（s，C⁃14），34.3（s，C⁃2），32.7（s，C⁃16），30.4（s，C⁃7），29.9（s，C⁃6），29.8（s，C⁃5），28.3（s，C⁃4），28.1（s，C⁃8），26.0（s，C⁃15），25.7（s，C⁃3），23.4（s，C⁃17），14.4（s，C⁃18）。经波谱数据和文献［14］ 对照鉴定化合物5 为（9Z，11E）⁃13⁃羟基⁃9，11⁃十八碳二烯酸。

化合物6：白色块状结晶。1H⁃NMR（400 MHz，CD3COCD3）δ：7.26（4H，ddd，J＝16.2，7.9，4.1 Hz，H⁃11，12，13，14），7.19～7.15（1H，m，H⁃10），6.33（1H，d，J＝1.6 Hz，H⁃6），6.31（1H，d，J＝1.9 Hz，H⁃2），6.24（1H，t，J＝2.2 Hz，H⁃4），3.71（3H，s，3⁃OCH3），2.89（2H，dd，J＝9.8，6.1 Hz，H⁃8），2.80（2H，dd，J＝9.8，6.1 Hz，H⁃7）。经波谱数据和文献［15］ 对照鉴定化合物6 为5⁃羟基3⁃甲氧基联苄。

化合物7：红色胶状物，分子式C17H20O5，ESI⁃MSm／z：303.1 ［M⁃H］－。1H⁃NMR（400 MHz，CDCl3）δ：6.83（1H，d，J＝8.0 Hz，H⁃5′），6.67（1H，dd，J＝8.0，1.9 Hz，H⁃6′），6.60（1H，d，J＝1.8 Hz，H⁃2′），6.35（2H，s，H⁃2，6），3.82（6H，s，3，5⁃OCH3），3.82（3H，s，3′⁃OCH3），2.80（4H，s，H⁃α，α′）。经波谱数据和文献［16］ 对照鉴定化合物7 为4，4′⁃二羟基⁃3，3′，5⁃三甲氧基联苄。

化合物8：白色粉末。1H⁃NMR（400 MHz，CDCl3）δ：7.12（1H，t，J＝7.7 Hz，H⁃5′），6.73（1H，d，J＝7.5 Hz，H⁃6′），6.66（1H，d，J＝2.4 Hz，H⁃4′），6.63（1H，d，J＝3.3 Hz，H⁃2′），6.30（1H，s，H⁃6），6.24（2H，d，J＝1.5 Hz，H⁃2，4），3.72（3H，s，5⁃OCH3），2.83～2.75（4H，m，⁃CH2CH2⁃）。经波谱数据和文献［17］ 对照鉴定化合物8 为山药素Ⅲ。

化合物9：白色粉末。1H⁃NMR（400 MHz，CD3COCD3）δ：8.32（1H，s，OH⁃2），7.09（1H，d，J＝7.4 Hz，H⁃5），7.04～6.98（1H，m，H⁃3），6.81（1H，d，J＝8.0 Hz，H⁃6），6.73（1H，t，J＝7.4 Hz，H⁃4），3.59（3H，s，3′⁃OCH3），2.88（2H，t，J＝7.7 Hz，H⁃1′），2.58（2H，t，J＝7.7 Hz，H⁃2′）；13C⁃NMR（100 MHz，CD3COCD3）δ：173.0（s，C⁃3′），155.0（s，C⁃2），130.0（s，C⁃1），127.3（s，C⁃5），126.9（s，C⁃3），119.5（s，C⁃6），115.0（s，C⁃4），50.6（s，3′⁃OCH3′），33.5（s，C⁃1′），25.7（s，C⁃2′）。经波谱数据和文献［18］ 对照鉴定化合物9 为邻羟基苯丙酸甲酯。

化合物10：黄褐色固体。1H⁃NMR（400 MHz，CD3OD）δ：7.10（1H，d，J＝7.5 Hz，H⁃5），7.01（1H，tt，J＝6.8，3.4 Hz，H⁃3），6.81（1H，d，J＝8.0 Hz，H⁃6），6.74（1H，t，J＝7.4 Hz，H⁃4），4.06（2H，q，J＝7.1 Hz，H⁃4′），2.90～2.84（2H，m，H⁃1′），2.58（2H，dd，J＝9.3，6.1 Hz，H⁃2′），1.17（3H，t，J＝7.1 Hz，H⁃5′）。经波谱数据和文献［19］ 对照鉴定化合物10 为邻羟基苯丙酸乙酯。

化合物11：黄色油状。1H⁃NMR（400 MHz，CDCl3）δ：7.10～ 7.00（2H，m，H⁃3，4），6.87～6.76（2H，m，H⁃5，6），3.65（3H，s，3′⁃OCH3），2.89（2H，t，J＝7.0 Hz，H⁃1′），2.67（2H，t，J＝7.0 Hz，H⁃2′），1.98（3H，s，2⁃OCOCH3）；13C⁃NMR（100 MHz，CDCl3）δ：175.6（s，C⁃3′），173.4（s，2⁃OCOCH3），154.8（s，C⁃2），130.5（s，C⁃6），128.0（s，C⁃4），127.3（s，C⁃5），120.5（s，C⁃1），116.6（s，C⁃3），52.2（s，3′⁃OCH3），34.8（s，C⁃2′），25.4（s，C⁃1′），22.8（s，2⁃OCOCH3）。经波谱数据和文献［20］ 对照鉴定化合物11 为2⁃乙酰氧基苯丙酸甲酯。

4 结论

从兰科石斛属植物杓唇石斛中分离鉴定出11个化合物，化合物类型包括联苄、大环内酯、苯丙素、脂肪酸、菲、香豆素类等，其中联苄类、菲类、香豆素类为石斛属植物的主要化学成分。此次分离得到的化合物2～11 为首次从杓唇石斛中分离得到，其中化合物4、5、9、10 为首次从兰科植物中分离得到，化合物11 为新的天然产物。本实验提供该植物丰富的化学信息，揭示杓唇石斛与其它种石斛药效物质基础上存在一定的区别，为更好的开发利用该植物提供一定的理论数据。