BDNF及其受体TrkB在癌症合并创伤后应激障碍患者外周血中的表达及意义

王娜 余丙清 姜波 金涛 刘敏捷 颜文萍

近些年我国恶性肿瘤发病率及患病人数均呈明显升高的趋势[1]。多数患者被确诊为癌症后会出现较大的心理负担及压力，其中创伤后应激障碍（posttraumatic stress disorder，PTSD）在癌症患者的发生率为5%～19%，此外还有5%～13%的癌症患者表现为PTSD的亚临床症状[2-3]。有研究显示，癌症合并PTSD患者的疗效及生活质量更差，极易出现各种抑郁、焦虑等心理问题，故应及时发现并予以有效干预才可取得良好的治疗效果[4]。既往动物实验研究证实，脑源性神经营养因子（brain derived neurotrophic factor，BDNF）及其受体酪氨酸激酶 B（tyrosine kinase B，TrkB）在慢性应激抑郁发病机制中发挥着重要的作用，但其在癌症合并PTSD患者中是否发挥同样的作用目前尚未见相关报道[5-6]。因此，本研究拟观察BDNF及其受体TrkB在癌症合并PTSD患者外周血中的表达，分析其与抑郁、焦虑严重程度的相关性关系，从而探讨其临床意义，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2018年10月-2020年1月本院收治的57例癌症合并PTSD患者为观察组，选择同期55例癌症患者为对照组。纳入标准：（1）经病理组织学检查均确诊为癌症；（2）观察组患者均符合文献[7]中PTSD相关诊断标准；（3）年龄＞18岁。排除标准：（1）对照组患者既往有PTSD、精神障碍个人或家族史；（2）合并意识或智力障碍；（3）合并可能影响精神状态的疾病，如神经、免疫、内分泌、心脑血管系统疾病；（4）有长期饮酒或药物依赖史；（5）处于哺乳、妊娠或月经期。观察组男32例，女25例，平均年龄为（56.2±10.1）岁，平均病程为（8.0±1.7）个月，受教育年限为（10.5±2.6）年；肿瘤类型：消化系统肿瘤20例，呼吸系统肿瘤15例，血液系统肿瘤12例，其他10例。对照组男31例，女24例，平均年龄为（57.0±9.6）岁，平均病程为（7.8±1.6）个月，受教育年限为（10.3±2.5）年；肿瘤类型：消化系统肿瘤18例，呼吸系统肿瘤17例，血液系统肿瘤12例，其他8例。两组一般资料比较，差异均无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。本研究方案已通过医院伦理委员会审核和批准实施，所有患者均知晓本研究方案并签署同意书自愿参与。

1.2 方法

采用Western blot法检测BDNF及其受体TrkB在两组患者外周血中的表达水平，将血液组织标本置于冰上，然后加入200 μl三去污裂解液，予以蛋白裂解处理30 min后提取总蛋白，采用Bradford法检测提取获得的总蛋白浓度。将蛋白浓缩液经95 ℃变性处理后进行SDS-PAGE电泳、染色、转膜等一系列实验操作，在37 ℃，3%的温度湿度条件下予以小牛血清白蛋白封闭2 h处理，加入羊抗人BDNF或TrkB多克隆抗体及人抗鼠β-actin抗体，抗体稀释浓度均为1∶500，Santa-Cruz公司生产，随后在4 ℃温度条件下孵育过夜处理。然后加入相应二抗，抗体稀释浓度均为1∶200，置于室温条件下孵育处理60 min，最后显色处理后予以胶片曝光和洗片操作。采用配套的凝胶成像分析系统扫描实验检测获得的蛋白条带并予以统计学分析，结果为BDNF/β-actin 或 TrkB/β-actin 灰度值。

1.3 观察指标及评价标准

（1）比较两组外周血BDNF及其受体TrkB蛋白表达水平。（2）比较两组HAMD量表评分。采用HAMD量表评估患者抑郁程度，HAMD量表包含24个评估项目，其中绝望感因子0～12分，睡眠障碍因子0～6分，全身症状因子0～2分，阻滞因子0～15分，认识障碍因子0～22分，焦虑/躯体化因子0～16分，总评分＜8分为无抑郁症状，评分8～20分为可能有抑郁，评分＞20分为轻度或中度抑郁症状，评分＞35分为严重抑郁症状。（3）比较两组HAMA量表评分。采用HAMA量表评估患者焦虑程度，HAMA量表包含14个项目，精神性焦虑包括7个项目，躯体化焦虑包含7个项目，每个项目0～4分，评分≤7分为无焦虑症状，评分＞7分为可能有焦虑症状，评分＞14分为肯定有焦虑症状，评分＞21分为明显焦虑症状，评分＞29分为严重焦虑症状。（4）分析BDNF及其受体TrkB蛋白表达与HAMD、HAMA评分的相关性。

1.4 统计学处理

本研究数据采用SPSS 20.0统计学软件进行分析和处理，计量资料以（±s）表示，采用t检验，计数资料以率（%）表示，采用χ2检验，采用Pearson法分析BDNF及其受体TrkB蛋白表达与HAMD、HAMA量表评分的相关性，以P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组外周血BDNF及其受体TrkB蛋白表达水平比较

观察组外周血BDNF及其受体TrkB蛋白表达水平均低于对照组，差异均有统计学意义（P＜0.05），见图1、表1。

表1 两组外周血BDNF及其受体TrkB蛋白表达水平比较（±s）

表1 两组外周血BDNF及其受体TrkB蛋白表达水平比较（±s）

组别 BDNF/β-actin TrkB/β-actin对照组（n=55） 0.942±0.150 0.893±0.121观察组（n=57） 0.201±0.057 0.192±0.049 t值 22.398 21.053 P值 0.000 0.000

2.2 两组HAMD量表评分比较

与对照组比较，观察组绝望感、睡眠障碍、全身症状、阻滞、认识障碍、焦虑/躯体化及HAMD总分均较高，差异均有统计学意义（P＜0.05），见表2。

表2 两组HAMD量表评分比较[分，（±s）]

表2 两组HAMD量表评分比较[分，（±s）]

组别 绝望感 睡眠障碍 全身症状 阻滞 认识障碍 焦虑/躯体化 总分对照组（n=55） 1.32±0.41 1.22±0.46 0.64±0.23 1.61±0.57 1.06±0.30 2.61±1.04 7.23±0.89观察组（n=57） 4.12±1.17 4.07±1.22 1.27±0.28 7.08±2.33 5.83±1.72 5.69±2.48 28.05±7.74 t值 12.115 12.078 7.221 14.608 13.375 6.632 8.138 P值 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000

2.3 两组HAMA量表评分比较

观察组精神性焦虑、躯体性焦虑及HAMA总分均高于对照组，差异均有统计学意义（P＜0.05），见表3。

表3 两组HAMA量表评分比较[分，（±s）]

表3 两组HAMA量表评分比较[分，（±s）]

组别 精神性焦虑 躯体性焦虑 总分对照组（n=55） 5.12±1.65 1.61±0.35 6.77±1.54观察组（n=57） 13.23±3.42 11.05±4.97 24.31±6.49 t值 8.357 9.094 7.325 P值 0.000 0.000 0.000

2.4 BDNF及其受体TrkB蛋白表达与HAMD、HAMA量表评分的相关性分析

BDNF及其受体TrkB蛋白表达与HAMD、HAMA量表评分均呈负相关（P＜0.05），见表4。

表4 BDNF及其受体TrkB蛋白表达与HAMD、HAMA量表评分的相关性分析

3 讨论

人类日常生活中存在各种各样的急性应激反应，是机体适应社会、心理及内外环境等因素刺激时而表现出的重要生物学特性[8]。有研究发现，应激反应可导致海马组织内的神经突触出现明显萎缩，而神经突触棘数量则显著减少，通过上述病理改变进而破坏海马组织内神经系统的组织结构，最终对人类学习、记忆等生理功能产生影响[9-10]。PTSD则是较为常见的应激反应，其是指机体在遇到异常威胁或灾难所致的延迟性发生，并且呈长时间持续存在的精神障碍[11]。作为一种严重的应激反应刺激因素，癌症可诱发较为明显的PTSD症状，患者不但要面临放化疗及手术治疗所引起的不良反应，还要面临PTSD引起的其他问题，如抑郁、焦虑等，严重者甚至存在自杀的倾向[12]。积极探讨癌症合并PTSD的发生机制，分析其与抑郁、焦虑的相关性关系均是有效防治癌症患者PTSD的关键。

BDNF是一种重要的神经系统细胞因子，其不但在发育期对人类胚胎组织的神经系统分化、发育、成熟及神经突触形成等生理过程中发挥关键性的作用，而且在成年期还可起到调节神经系统生理功能的重要作用[13]。此外，BDNF也是人类遗传基因与外界环境、神经突触可塑性及神经细胞凋亡等之间必需的信息传递环节，在各种精神系统异常疾病的发生发展过程中发挥着极为重要的作用[14]。TrkB则是一种广泛存在于神经细胞膜上的跨膜蛋白，主要由原癌基因家族编码产生，在神经细胞分化、增殖、发育成熟及细胞信号传递等生理过程中均发挥重要作用[15]。TrkB是BDNF的特异性受体，两者均广泛存在于人体大脑尤其是海马组织中[16]。BDNF与TrkB特异性结合后可导致后者磷酸化，从而激活PI3K/AKT、MAPK等一系列下游信号传导通路，进而激活环磷酸腺苷（cAMP）反应元件结合蛋白，导致海马组织内的BDNF及抗凋亡反应蛋白（Bcl-2）的表达水平显著性升高，最终明显增加神经突触的可塑性，确保神经细胞的生存及神经突触的形成[17]。BDNF/TrkB信号通路调控人类神经系统生理功能具有重要的意义，也是目前治疗抑郁症的作用靶点之一[18]。有研究发现，BDNF与PTSD的发生发展可能存在一定的联系，但仍有不同意见，且尚未见BDNF/TrkB信号通路与癌症合并PTSD的文献报道，也无BDNF及其受体TrkB蛋白表达与抑郁、焦虑严重程度的相关性研究[19]。本研究显示，观察组外周血BDNF及其受体TrkB蛋白表达水平均低于对照组，差异均有统计学意义（P＜0.05），提示癌症合并PTSD患者的BDNF、TrkB表达受到明显抑制，使得神经系统功能较未合并PTSD的癌症患者低下。观察组HAMD及HAMA量表评分均高于对照组，提示癌症合并PTSD患者的抑郁、焦虑症状明显重于对照组。进一步分析BDNF及其受体TrkB蛋白表达与HAMD、HAMA量表评分的相关性关系，结果显示，BDNF及其受体TrkB蛋白表达与HAMD、HAMA量表评分均呈负相关（P＜0.05），提示外周血BDNF及其受体TrkB蛋白表达可反映癌症合并PTSD患者的抑郁、焦虑症状的严重程度。

综上所述，癌症合并PTSD患者外周血BDNF及其受体TrkB蛋白表达水平明显下降，在诊断癌症患者是否合并PTSD和评估抑郁、焦虑症状严重程度方面均具有一定价值。