肿瘤抑制因子CYLD和NF-κB信号通路与溃疡性结肠炎的关系研究

雷 媛，杜 凌

（广西医科大学第四附属医院消化内科，广西 柳州 545000）

溃疡性结肠炎病变的主要特征为反复腹泻、腹痛，临床治愈难度非常大[1]。此疾病在各种人群中的发病率存在较大差异。北美及欧洲等地区的发病率较高，虽亚洲地区以往溃疡性结肠炎发病率较低，但近年受多种因素影响，其发病率也明显增高[2]。临床观察发现，相比于普通人群，溃疡性结肠炎患者发生癌变的几率明显更高，且病情癌变现已成为溃疡性结肠炎患者死亡的主要原因之一。溃疡性结肠炎具有病程长、易复发、患者需终身服药的特征[3]，且相关药物价格高、治愈概率非常小，患者家庭和社会均需承受较重的负担。因此，探索溃疡性结肠炎的发病机制和病因，为相关药物开发和临床治疗提供方向具有迫切性。目前有关CYLD 介导NF-kB mRNA 的研究报道多偏向于分析癌性病变方向，很少关注到其在溃疡性结肠炎病变中的介导作用。现本文纳入2020 年8 月至2022年8 月广西医科大学第四附属医院收治的58 例溃疡性结肠炎患者和同期在该院接受体检的55 例健康体检者，分析肿瘤抑制因子CYLD 和NF-κB 信号通路与溃疡性结肠炎的关系。具体报告如下：

1 资料及方法

1.1 一般资料

选取2020 年8 月至2022 年8 月广西医科大学第四附属医院收治的58 例溃疡性结肠炎患者和同期在该院接受体检的55 例健康体检者作为研究对象。将58 例溃疡性结肠炎患者作为观察组，将55 例健康体检者作为对照组。观察组：年龄23 ～79 岁，平均（45.32±1.02）岁；女性28 例，男性30 例；体质量指数（BMI）21.35 ～26.68 kg/m2，平均（23.21±1.02）kg/m2。对照组：年龄22 ～78 岁，平均（45.31±1.01）岁；女性22 例，男性33 例；BMI 21.45 ～26.78 kg/m2，平均（23.26±1.06）kg/m2。两组研究对象的基本资料相比，P＞0.05。本研究方案经医学伦理委员会批准后实施，研究对象均已签署知情同意书。研究对象的入选标准：1）观察组患者均满足《炎症性肠病诊断与治疗的共识意见(2018 年·北京)》[4]中关于溃疡性结肠炎的判定标准；2）有完整的病历记录。研究对象的排除标准：1）癌变患者，如直肠癌、乳腺癌、肺癌等；2）心脑血管病变者；3）血液疾病患者；4）精神/ 认知异常者。

1.2 方法

研究对象均接受结肠黏膜组织中CYLD 和NFkB mRNA 指标的检测。方法是：在肠镜协助下，钳取受检者的肠黏膜组织作为活检组织，取出后将其置于TrizoI 原液中，并保存在零下80℃环境中待测。用实时定量RT-PCR 法〔仪器：实时荧光定量PCR仪m2000rt RealTime PCR System，注册证号：国械注进20173401170 ；试剂为仪器配套试剂，购自雅培贸易（上海）有限公司〕检测结肠黏膜组织中CYLD和NF-kB mRNA 的表达状况，操作步骤依据试剂盒说明书进行。分析观察组患者的病历资料，记录其性别、年龄、病程、吸烟史、病变部位、病变分期、病变程度等指标。

1.3 指标判定

CYLD 检测：组织标本未显色为0 分，显淡黄色为1 分，显棕黄色为2 分，显棕褐色为3 分；各标本组织观察视野随机选取5 个，观察染色阳性细胞占比，0 分：＜5%，1 分：5% ～25%，2 分：26% ～50%，3 分：51% ～75%，4 分：＞75%。阳性细胞百分率评分× 染色强度评分=免疫组织化学评分，0 分为阴性（-），1 ～2 分为弱阳性（+）、3 ～4 分为中度阳性（++）、5 ～12 分为强阳性（+++）。对比观察组与对照组的CYLD 和NF-kB mRNA 指标。分析CYLD指标异常在溃疡性结肠炎临床表型中的分布状况。本研究所有数据的统计均由2 名专人负责，若发生分歧，根据所得资料和相应判定标准等商讨确定。

1.4 统计学方法

用统计学软件（SPSS 22.0 版本）分析数据，计量资料用均数± 标准差（±s）表示，采用t检验，计数资料用百分比（%）表示，采用χ² 检验。采用Log-Logistic 参数回归分析法分析CYLD 指标异常在溃疡性结肠炎临床表型中的分布状况；若P＜0.05，则有统计学意义。

2 结果

2.1 比较观察组与对照组的CYLD 和NF-kBmRNA指标

观察组CYLD mRNA 的水平低于对照组，NF-kB mRNA 的水平高于对照组（P＜0.05）。经Spearman相关分析后发现，CYLD mRNA 水平与溃疡性结肠炎病变之间为负性关系（r=-0.2511，P＜0.05），NFkB mRNA 水平与溃疡性结肠炎病变之间为正性关系（r=0.5165，P＜0.05）。见表1。

表1 比较观察组与对照组CYLD 和NF-kB mRNA 的表达状况（± s）

表1 比较观察组与对照组CYLD 和NF-kB mRNA 的表达状况（± s）

组别 例数 CYLD mRNA NF-kB mRNA观察组 58 0.82±0.11 22.32±1.02对照组 55 1.76±0.13 10.25±1.06 t 值 49.3712 73.3877 P 值 0.0001 0.0001

2.2 分析CYLD 蛋白阳性率在溃疡性结肠炎临床表型中的分布状况

观察组中共检出CYLD 蛋白阳性55 例。经单因素分析后得知，年龄≥60 岁（100.00%）、病程时间≥1 年（98.21%）、病变分期为活动期（100.00%）、病变程度为重度（100.00%）和中度（100.00%）患者的CYLD 蛋白阳性率更高（P＜0.05）。Logistic 回归分析发现，CYLD 蛋白阳性率与溃疡性结肠炎患者的病程、病变程度、病变分期、年龄呈正性关系。见表2、表3。

表2 单因素分析CYLD 蛋白阳性率在溃疡性结肠炎临床表型中的分布状况[例(%)]

表3 Logistic 回归分析CYLD 蛋白阳性率与溃疡性结肠炎临床表型的相关性

3 讨论

溃疡性结肠炎属于临床较为常见的慢性肠道炎性病变[5]，且其具有非特异性特征。目前暂不完全明确其发病机制，认为与机体免疫因素、环境、遗传等因素有关。目前，有关溃疡性结肠炎的治疗存在治疗药物价格高、不良反应多等缺陷[6]，患者的治疗负担和社会压力均较大。因此，进一步深入分析溃疡性结肠炎的发病机制具有积极意义。

有报道称，NF-kB 在机体炎性反应调控中发挥了重要作用，若可通过分析NF-kB 信号通路而探寻治疗溃疡性结肠炎的新型药物，则有可能打破目前存在的治疗药物价格高、患者医疗负担重、药物不良反应多的局限性，提升相关临床治疗疗效和患者的生活质量[7-8]。目前已证实核因子Kappa-B 家族在肿瘤学、免疫学等领域有重要且广泛的参与作用[9]。此家族主要由cRe1、Re1B、Re1A/p65、NF-kB 等组成。其中，NF-kB 信号持续活化状态不仅会参与肿瘤发病，且与机体的慢性炎性反应有关[10]。非激活状态下，NF-kB可结合抑制蛋白IkB，在胞浆中主要表现为二聚体形式。而对应的IkB 激酶复合物（IKK）对复合物有关的IkB 磷酸化有诱导作用，可促进降解和泛素化IkB。当降解IkB 蛋白后，NF-kB 和相应结合则会消失，并迅速转至细胞核中结合DNA kB 区域，进而实现调控和转录相应特定基因[11]。NF-kB 信号活化中，泛素化也发挥了关键性作用，泛素化属于可逆过程，并可被DUBs 家族蛋白阻断，让NF-kB 通路活化受到抑制。而CYLD 为DUBs 的主要家族成员之一[12]，其属于目前公认的肿瘤抑制因子，可直接结合NF-kB 的调节亚单位、TNFR、TRAF2，进而组织NF-kB 活化。本研究发现溃疡性结肠炎患者体内CYLD mRNA 水平比健康者低，NF-kB mRNA 水平比健康者高（P＜0.05），发现CYLD mRNA 在正常对照组中呈高表达状态，NF-kB mRNA 在正常对照组中呈低表达状态，这也证实了CYLD 蛋白的去泛素化活性可以负性调节多种信号通路，包括NF-κB 相关通路。同时，本研究Logistic回归分析发现，CYLD 蛋白阳性率与溃疡性结肠炎患者的年龄、病程、病变程度呈负性关系。崔小鲁[13]的研究报告中有提到相似观点，即NF-kB 信号持续活化存在于炎性反应和肿瘤病变中。而大部分肿瘤病变的前期均会经历炎性反应，因此其病程越长、病变越严重，CYLD 蛋白阳性率也就越高。加之患者年龄越大，机体各项机能逐步退化，身体免疫功能降低，进而也为CYLD 降低并参与病变提供了条件。此外，本研究在分析溃疡性结肠炎病变分期时分为活动期、缓解期两种，出现CYLD 蛋白阳性率与病变分期之间有正性关系的原因可能与病变活动期各病灶细胞处于活跃状况有关。溃疡性结肠炎发生癌变概率较大，其预后通常不理想，而CYLD 蛋白在结直肠癌变中有重要参与作用，因此笔者认为这就是活动期CYLD 蛋白阳性率更高的原因之一，其他具体机制还需进一步深入分析。

综上，CYLD 受抑制可能活化NF-κB 信号通路，导致溃疡性结肠炎的发展，且CYLD 的表达与溃疡性结肠炎的临床表型具有相关性。上述结论可为溃疡性结肠炎发病机制的进一步探讨提供研究基础，有利于开发新的治疗靶点。CYLD 或能成为新的潜在治疗靶点，为治疗溃疡性结肠炎提供新的治疗策略，进一步提高溃疡性结肠炎临床诊疗的水平。