蒸汽温润法对化橘红中柚皮苷含量的影响*

梁文琳，吴彩霞，林泳仪，朱海燕，杨文康，桂 林

(广州大学生命科学学院，广东 广州 510006)

化橘红为芸香科植物化州柚Citrus grandis Tomentosa或柚Citrus grandis(L.)Osbeck的未成熟或近成熟的干燥外层果皮，其味苦、辛、温、归肺脾经，具有散寒、燥湿、利气、消痰的功效，用于风寒咳嗽、喉痒痰多、食积伤酒、呕恶痞闷等[1-2]。《本经逢原》：“橘红专主肺寒咳嗽多痰，虚损方多用之，然久嗽气泄，又非所宜”[3]。李时珍的《本草纲目》中有记载：“橘红佳品，其瓤内有红白之分，利气、化痰、止咳功倍于它药。其功愈陈愈良”[4]。柚皮苷的提取工艺主要为有机溶剂提取法、热水提取法、碱性稀醇或碱性水提取法、系统溶剂提取法、超声波提取法和微波提取法、超滤法等[5]。因为超声提取法提取柚皮苷更加方便、快捷，故本次实验采用超声波提取法对化橘红中的柚皮苷进行提取。本实验先将化橘红果实按照设置的软化条件进行操作，先进行不同的单因素实验，再进行两个因素的搭配，分别探究一下不同条件会对柚皮苷的含量造成什么影响。

1 实 验

1.1 材料与仪器

化橘红果实，购买于广东省化州市。

柚皮苷标准品(含量95%)；甲醇(分析纯)；水(超纯水)；石油醚(60～90 ℃)。

紫外分光光度计；电子分析天平；超声波细胞破碎仪；恒温水浴锅；电热鼓风干燥箱。

1.2 实验方法

1.2.1 样品溶液的制备

称取待测样品0.2 g ，加50 mL 石油醚浸泡于锥形瓶中，超声波提取30 min ，放凉过滤，弃去石油醚，挥发风干，接着加入50 mL 甲醇，继续超声波提取30 min ，放凉过滤，弃去滤渣，剩余滤液加甲醇定容至 50 mL 容量瓶。

1.2.2 标准品溶液的配制

用电子分析天平精密称取标准品 10 mg ，加适量甲醇溶解，定容至100 mL的容量瓶内，配置成0.10 mg/mL 的标准品溶液。

1.2.3 标准曲线的绘制

采用移液枪分别吸取 0 mL、0.5 mL、1.0 mL、1.5 mL、2.0 mL、2.5 mL、3.0 mL于 10 mL容量瓶内，再依次加入 1 mL的10%的硝酸铝溶液，最后加适量甲醇定容至刻度，混匀后静置15分钟，然后用紫外分光光度计在384 nm下测其吸光度。

以所测得的标准柚皮苷浓度为横坐标，所测得的吸光值为纵坐标，建立线性回归方程，并绘制标准曲线。

1.2.4 蒸汽温润法

(1)单因素实验

分别对蒸汽温润的温度和蒸汽温润的时间两个因素设置不同的梯度实验，各因素设置的梯度实验。温润的温度分别设置为45、50、55、60、65 ℃；温润的时间分别设置为5、6、7、8、9 h。

分别进行单因素实验，得到最佳软化条件。以上两个因素的影响实验均进行3次平行实验，最终数据取其平均值。

(2)两因素优化实验

在单因素优化实验的基础上，对蒸汽温润的温度和蒸汽温润的时间两个因素来进行三水平的实验，设置的实验因素水平表见表1。

表1 蒸汽温润法的实验因素水平表

1.2.5 方法学考察

(1)精密度实验

取一定量的0.01 mg/mL的标准溶液，分别连续在紫外分光光度计下测定6次，记录结果，计算RSD值并记录实验结果。

(2)稳定性实验

取同一份样品溶液，在紫外分光光度计下于15、30、45、60、75、90 min分别进行测定，计算RSD值并记录实验结果。

(3)加样回收率实验

取6份已知含量样品，分别加入一定量的标准品，记录实验结果，并计算回收率和RSD值。

2 结果与讨论

2.1 标准曲线的绘制

以吸光度384 nm为纵坐标、柚皮苷浓度为横坐标,绘制的标准曲线见图1，得到的线性回归方程为y = 7.8929x+0.0028，相关系数r为0.9997，线性关系良好。

图1 紫外分光光度384 nm下得到的柚皮苷标准曲线

2.2 蒸汽温润法

2.2.1 蒸汽温润法的温润温度与柚皮苷含量的关系

如图2所示，在相同的提取条件下，柚皮苷的含量随着蒸汽温润的温度的变化而变化。在45～60 ℃时，柚皮苷的含量随着温润温度的增加而增加，在60 ℃时达到最高；在60～65 ℃时，柚皮苷的含量随着温润温度的增加而开始下降。

图2 蒸汽温润法的温润温度对柚皮苷含量的影响

2.2.2 蒸汽温润法的温润温度与柚皮苷含量的关系

如图3所示，在相同的提取条件下，柚皮苷的含量随着蒸汽温润的时间的变化而变化。在实验设定时间5～9 h内，柚皮苷的含量一直随着温润时间的增加而增加。

图3 蒸汽温润法的温润时间对柚皮苷含量的影响

2.2.3 两因素优化实验

表2 蒸汽温润法的柚皮苷优化提取的两因素优化实验

表3 蒸汽温润法的两因素方差分析结果表

F检验结果表明，温度之间的F值大于F0.01，说明温润的温度之间达到极显著水平，说明不同的温度处理之间对柚皮苷含量有极显著的影响；而时间之间的F值小于F0.05，说明温润的时间之间对柚皮苷含量的影响未达到显著水平。

2.3 方法学考察

2.3.1 精密度实验结果

连续测定6次所得的OD值见表4，从实验结果中，可以计算得到实验中所测定的溶液的柚皮苷的吸光度(OD384)的RSD为0.192%；本次实验结果表明，该实验的精密度良好(n=6)。

表4 紫外分光光度计精密度实验(n=6)

2.3.2 稳定性实验结果

稳定性的实验结果见表5，从实验所得的OD值，我们通过计算该实验的待测样品溶液中柚皮苷的吸光度(384 nm)，得到其RSD为0.567%；实验结果表明本次实验的待测样品溶液的稳定性良好(n=6)，样品中的柚皮苷在90 min内是稳定的。

表5 稳定性实验结果(n=6)

2.3.3 加样回收率实验结果

加样回收重复测定6次，所得实验结果见表6，所得的平均回收率为97.90%，RSD为1.02%(n=6)，故加样回收效果良好。

表6 加样回收率实验结果(n=6)

3 结 论

本次实验采用超声波提取法对化橘红中的柚皮苷进行提取，蒸汽温润法设置了不同的温润时间和温润温度，结果显示在相同的提取条件下，柚皮苷的含量随着蒸汽温润时间的变化而变化；在实验设定时间5～9 h内，柚皮苷的含量一直随着温润时间的增加而增加的。而在相同的提取条件下，柚皮苷的含量随着蒸汽温润的温度的变化而变化的，在45～60 ℃时，柚皮苷的含量随着温润温度的增加而增加，在60 ℃时达到最高；在60～65 ℃时，柚皮苷的含量随着温润温度的增加而开始下降。各取两个因素最好的三个水平进行搭配，发现不同的温度之间对柚皮苷的含量是有显著影响的，但温润时间的对化橘红中柚皮苷含量的影响并不显著。根据所得的结果，笔者认为蒸汽温润法的优化可以主要选择在温度上，本实验所得到的最佳工艺是温润温度60 ℃，蒸汽温润的时间9 h。