日照麻鸡禽白血病的流行病学调查

韩勇 王春平 刘玉洁 吕桂霞 范承祥

（1，山东省日照市动物疫病预防控制中心 276800；2，山东省东营市现代畜牧业发展中心 257000）

禽白血病 （Avian leukosis，AL）又称禽白细胞增生症，是由禽白血病病毒 （ALV）引起的禽类多种肿瘤性疫病的总称，主要是淋巴细胞性白血病，其次是成红细胞性白血病、成髓细胞性白血病及骨髓细胞瘤、血管瘤、内皮瘤等疫病[1]。禽白血病病毒可分为A-Kl1个亚群，其中A/B和J亚群对养鸡业危害最大，在中国鸡群中普遍存在单独或共感染现象[2]。

日照麻鸡原产于日照市东北部两城镇一带，山东省胶南市琅琊镇一带也有分布，也称 “琅琊鸡”。日照麻鸡抗病力强、耐粗饲、肉质风味好、产蛋多，属肉蛋兼用型品种，深受广大消费者的欢迎。1978年被列为山东地方家禽良种，2009年被山东省畜牧兽医局列入 《山东省畜禽遗传资源保护名录》[3]。经过多年的保种和推广，日照麻鸡现存原种4万余只，祖代鸡20万套，年产父母代鸡苗720万套，品种接近30个。日照麻鸡凭借其独特的表现性状和优异的生产性能，产品销往山东、河南、陕西、山西、江苏、云南、贵州和四川等地，受到市场的广泛认可。近年来，我国大部分地区的地方品种鸡禽白血病发病率呈上升趋势，并且感染情况越来越复杂，造成一些鸡场经济损失惨重。为了解日照麻鸡禽白血病感染状况，本试验抽检了19个鸡场，检测禽白血病J抗体、A/B抗体和p27抗原阳性情况，为日照麻鸡禽白血病净化提供技术支撑。

1 材料与方法

1.1 样品及抽检方法

2019年6月至2020年12月，在日照4个区县分别采集19个鸡场样品进行试验。由于采用实验室检测要考虑检测方法的敏感性，即检测到阳性动物，采用当前大多数兽医流行病学抽样软件发现疫病的抽样样本量计算公式[4]为：

其中n为抽样个数，CL为置信水平，D为群中的阳性动物数 （等于群内个体数与预定流行率的乘积），N为群内个体数，Se为检测方法的敏感性。

每个场点按照群内阳性率10%，置信水平95%，预计每个场点随机抽样30份。由于原种场阳性率较低，试验扩大了抽样数量，每个场随机抽样100份。采样从翅静脉或心脏采血，分离血清4℃保存备用。无菌棉签采集鸡泄殖腔棉拭子，置于灭菌的0.01mol/L磷酸盐缓冲液 （pH=7.4），与稀释液混匀后冷冻。样品采集情况详见表1。

表1 日照麻鸡禽白血病检测采样情况 （单位：个、份）

1.2 检测试剂与仪器

1.2.1 检测试剂

禽白血病病毒抗体J抗体、A/B抗体试剂盒和p27抗原试剂盒均购自IDEXX公司。

1.2.2 仪器

美国赛默飞生产酶标仪 （MultIIskan GO）；美国PALL生产超纯水纯化系统 （Cascada）；上海南荣生产恒温培养箱（DGX-9143BC）； Eppendorf移液器等。

1.3 实验室检测方法

1.3.1 样品处理

血清样品在检测前12000r/min离心1min。泄殖腔棉拭子-20℃冻融1次，恢复至室温后剧烈振荡1min，挤出棉签中的液体，弃掉棉签。液体在2～8℃ 12000r/min离心1min，吸取上清，加到反应板中。

1.3.2 检测方法

参照IDEXX公司检测试剂盒说明书，用酶联免疫法（ELISA）进行检测。

2 结果

在日照全市19个鸡场共检测血清样品710份，泄殖腔棉拭子710份。调查结果显示，2个原种场有1个检测出禽白血病p27抗原阳性，未检测出禽白血病J抗体、A/B抗体阳性场。祖代禽白血病J抗体、A/B抗体和p27抗原检测阳性场均为1个，父母/商品代禽白血病J抗体、AB抗体和p27抗原检测阳性场分别为4、1和5个。禽白血病J抗体、A/B抗体和p27抗原总体阳性率分别为8.0%、3.7%和11.0%。结果详见表2。

表2 日照麻鸡禽白血病检测结果

3 讨论

（1）由于目前没有禽白血病疫苗可供使用，所以鸡群中的抗原和抗体水平可以反映出日照麻鸡禽白血病感染范围依然较为广泛，需要进一步加强各代次鸡场的禽白血病净化工作。禽白血病既可水平传播也可垂直传播，其中垂直传播方式随着种群繁育会造成病毒扩散、危害扩大的继代效应[5，6]。因此，从原种、祖代场尤其是原种代开展净化势在必行。

调查结果显示，2个原种场均未检测出禽白血病J抗体、A/B抗体，但有1个检测出p27抗原阳性。4个祖代中有1个检测出禽白血病J抗体、A/B抗体和P27抗原阳性。父母/商品代禽白血病J抗体、A/B抗体和P27抗原阳性场数分别为4、1和5个。结果表明，日照市原种和祖代场仍可能有禽白血病感染，父母/商品代感染率较高，主要流行亚群以ALV-J为主，净化任务依然艰巨。

（2）本试验采用抽样软件发现疫病进行抽样，仅对群内进行科学抽样，对场群采样由于时间物力等原因，仅采集19个场，数量相对较少，所以，日照麻鸡场群阳性感染率有待进一步研究。另外，由于原种场阳性率较低，仅采样100份，数量相对较少，不能最大限度地反应祖代场感染情况。

（3）我国地方品种由于禽白血病的净化启动比较晚，加上有些场引种等原因导致其阳性率较高。禽白血病净化需要长期、持续的坚持和努力，净化是一个系统工程[7]。因此，面对禽白血病应做好种群净化工作，加强饲养管理，进一步研究净化路线和方法，制定适合的净化方案，尽早解决禽白血病对日照麻鸡这一优良地方品种的威胁，达到国家中长期动物疫病防治规划要求。