一起猪流行性腹泻病毒与博卡病毒混合感染病例分析

朱小甫，吴旭锦，郑红青，尹宝英

(咸阳职业技术学院，咸阳市动物疫病分子生物学诊断技术研究重点实验室，陕西 咸阳 712000)

近几年来，陕西省猪场仔猪腹泻问题突出，造成的经济损失较大[1]。其临床表现以仔猪腹泻脱水为主，仔猪发病率和病死率高。研究显示，引起仔猪腹泻的病因复杂，病毒方面主要有猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪德尔塔冠状病毒(PDcoV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪轮状病毒(PoRV)和博卡病毒(PBoV)[2～4]。2006年初，我国PEDV毒株出现变异现象，引发免疫失败导致PED暴发流行，2010年PEDV毒株再次变异，疫情蔓延全国[5]。PBoV最早是在患有PMWS仔猪群中被发现并报道，但后来有研究发现PBoV在腹泻猪群中有很高的感染率，被认为是一种腹泻相关的新型病毒[6]。2021年2月份，陕西省渭南市某猪场出现仔猪腹泻症状，猪场采用抗生素治疗以及补水止泻等对症疗法，但收效甚微，仔猪死亡较多，损失较大，随后送检4头发病死亡仔猪到本重点实验室进行诊断，现总结分析以供同行参考。

1 临床症状

猪场母猪存栏530头，分娩仔猪连续发病，从病初至送检1月时间，已死淘224头仔猪。临床症状表现:仔猪出生1～3 d突然拉稀，精神迅速变差，不吮乳，初期排黄色稀粪，常见未消化的凝乳块，迅速演变为水样腹泻，可见脱落的肠道黏膜。个别仔猪有呕吐现象。体温无明显变化。

2 剖检病变

剖检4头送检死亡仔猪，病变基本一致。仔猪尸体严重脱水，眼窝深陷，肋骨突出。其主要病变集中在消化系统，胃底及幽门部散布数量不等的出血斑；部分小肠充盈，壁薄半透明状，部分小肠浆膜可见出血斑；剖开可见小肠黏膜出血，内有黄色带泡沫的液体。肠系膜淋巴结肿大、充血出血。个别仔猪肺脏充血，肾脏有小出血点，肝脏淤血。

3 实验室诊断

根据临床症状与病理变化，初步判断为仔猪腹泻性传染病。为确诊腹泻病原，采集小肠内容物，在营养琼脂平板、麦康凯平板上进行细菌划线分离。采集4份肠道组织，加适量灭菌生理盐水，剪碎后用组织研磨器研磨为混悬液，冻融3次后12 000 g离心5 min，收集上清液-80℃冻存，用于病毒检测。采用本实验室建立的RT-PCR方法，检测PEDV、TGEV、PDcoV、PoRV与PBoV，以上5种病毒阳性样品分别出现412 bp、264 bp、303 bp、621 bp与500 bp特异性条带。结果发现，从肠道内容物中未分离到细菌；病毒检测结果4份肠道组织样品中PEDV均为阳性，3份PBoV阳性(见图1)，TGEV、PDcoV、PoRV均为阴性，最终确诊仔猪腹泻为PEDV和PBoV混合感染引起。

图1 病毒RT-PCR检测结果

4 防治措施

由于仔猪病毒性腹泻发生后进行治疗效果不佳，对严重腹泻脱水的仔猪淘汰无害化处理。发生腹泻的圈舍采用干粉消毒剂进行消毒处理，可有效降低圈舍湿度和杀灭病原。对轻症仔猪及时隔离，人工哺乳或寄养，5%葡萄糖水和生理盐水按照1∶1比例混合腹腔注射50 mL，肌肉注射头孢噻呋钠预防继发性细菌感染，严格控制人员流动，派专人照护病仔猪。强化母猪产房管理，对进出产房人员工作服和胶鞋严格消毒，保持地面卫生，母猪产床勤清理、消毒。维持舒适温度对控制腹泻极为重要，要求产房温度保持在25℃以上，护仔箱温度保持在30℃以上。猪舍附近的通道和场地两天消毒一次。采集腹泻仔猪肠道组织制作本场组织灭活苗，给怀孕母猪临产前1个月免疫注射5 mL，间隔10 d再次注射5 mL，经过自家苗免疫后的母猪分娩的仔猪再没有发生腹泻，成功控制了仔猪腹泻的流行。

5 小结与体会

该猪场对母猪群采用了PEDV与TGEV二联灭活疫苗进行免疫，但还是发生了仔猪腹泻。分析发病原因，主要是PEDV流行毒株发生了较为显著的变异，其毒株与疫苗毒株同源性较低(内部资料)，导致疫苗免疫抗体不能完全保护仔猪抵御流行毒株的感染。其次是由于PBoV的混合感染，PBoV是一种新型的细小病毒，其感染猪主要引起腹泻，对产房哺乳仔猪致病性高，死亡率高达70%以上[7]。这两种致病性强的病毒性腹泻病原混感，更是加重了临床表现和病死率。在流行病学调查时发现，猪场在疫情发生后，兽医曾诊断为仔猪黄痢，反复使用多种抗生素治疗，延误了确诊时间，耽误了采取有效措施的时间，导致猪场损失扩大。由于仔猪腹泻病原多样，且临床表现和病理变化多有类似，临床诊断和病理诊断难度大，必须进行实验室检测分析才能确诊病原[8]。本课题组应用自行开发的RT-PCR技术，直接以病料组织中提取的总RNA为模板，检测4种腹泻相关病毒核酸片段，短时间内即可确定病原种类，针对病原及时采取有效应对措施，有助于迅速控制疫情，最大限度降低猪场损失。此外，需要指出的是，由于PEDV毒株变异导致商品苗预防效果不佳，而PBoV尚无商品化疫苗可用，制作自家组织灭活疫苗进行母猪群免疫，提高母源抗体水平，通过被动免疫保护仔猪不再感染腹泻病原，是控制仔猪腹泻的重要措施。