景参麦颗粒成型工艺及薄层色谱鉴别研究

黄晓巍，王亚杰，王宇，徐岩，周佳，李瑞丽，辛国*

（1.长春中医药大学东北亚中医药研究院，长春130117；2.长春中医药大学药学院，长春130117；3.长春中医药大学附属医院，长春130021）

景参麦颗粒方源自于长春中医药大学附属医院的满医药临床经验方，临床上主要应用于血虚证的治疗，经过对提取物的药效实验已证实，该方对于血虚带来的免疫水平低下具有良好的恢复效果，在血虚证及辅助提高免疫力方面具有良好的应用前景。该方由红景天、人参、麦冬、白术等药食同源药材组成，原采用水煎的方式服用，在服用方式和保存的等方面存在诸多不便，为方便人群使用，拟开发颗粒剂以扩大应用市场。颗粒剂具有起效快，服用方便且剂量小，制备工艺简单，成本较低等特点。本研究以颗粒成型率、溶化性为指标，采用单因素分析法，分别对填充剂、润湿剂、药物浸膏粉与辅料比例（以下简称：药辅比）进行考察，通过正交试验优选最佳成型工艺，进行验证性试验；通过对景参麦颗粒性状、制剂项下检查，以及对红景天、人参、白术三味药材的薄层鉴别，制定景参麦颗粒的质量标准，为后续的开发提供试验依据。

1 实验材料

1.1 实验仪器

DHG-9240型电热恒温鼓风干燥箱，上海精宏实验设备有限公司；BJ-600A型多功能粉碎机，上海拜杰实业有限公司；BSA223S型分析天平，赛多利斯科学仪器有限公司；ZF-6型三用紫外分析仪，上海嘉鹏科技有限公司；HH-6型数显恒温水浴锅，常州市江南实验仪器厂；KQ3200B型超声波清洗仪，昆山市超声仪器有限公司；药典筛、硅胶G薄层板等。

1.2 材料与试剂

红景天（批号：180102）、人参（批号：191201）购自亳州市华云中药饮片有限公司；黄精（批号：C194191201）、麦冬（批号:C295200401）购自安国市荣华本草中药材有限公司；白术(批号：2001026）购自河北一达药业有限公司；麦芽糊精（食品级）、D-甘露醇（食品级），G-CLONE，批号：506O021、560A031；无水乳糖（分析级），阿拉丁，批号：D2101115；红景天对照药材，源叶生物，批号：Y21J11H119107；红景天苷对照品，成都曼斯特，货号：A0076；人参对照药材，源叶生物，批号：M06GB147643；人参皂苷Rf、Rb1、Rg1、Re对照品，成都曼斯特，货号：A0246、A0234、A0237、A0244；白术对照药材，源叶生物，批号：Y22O11H128343；香兰素，源叶生物，批号：Y02N11C129562；碘固体（含量≥99.8%），北京化工厂，批号：20190110；乙酸乙酯、石油醚（沸程60℃～90℃）、正己烷、无水乙醇、三氯甲烷、正丁醇、甲醇、氨试液、硫酸、丙酮等试剂均为分析纯。

2 试验方法与结果

2.1 颗粒剂的制备方法

以处方量称取药材进行提取，以药材总体积4倍量水，煎煮3次，每次2小时，将所得滤液合并，减压浓缩至相对密度1.20左右的稠浸膏，置于60℃烘箱中干燥，粉碎成细粉，过三号筛备用。将浸膏粉加适量辅料混匀，采用湿法制粒制软材，过一号筛，60℃烘干，整粒，即得景参麦颗粒。

2.2 评价指标的确定

2.2.1 溶化性

依据2020年版《中国药典》四部通则0104颗粒剂项下，采用可溶颗粒检查法考察溶化性。

2.2.2 颗粒成型率

依据2020年版《中国药典》四部通则0104颗粒剂粒度检查项下规定，采用双筛分法，能通过1号药典筛和不能通过5号药典筛的颗粒计合格颗粒，以合格颗粒占制颗粒总重百分比为颗粒成型率。计算公式为：颗粒成型率（%）=（合格颗粒/制颗粒总重）*100%。

2.3 单因素考察试验

2.3.1 单一稀释剂的选择

根据预试验和相关文献[1]，依2.1项下颗粒剂制备方法，药物浸膏粉以药辅比1∶1.5的比例分别加入麦芽糊精、乳糖和甘露醇，95%乙醇润湿，制备颗粒，依2.2项下评价指标考察，结果见表1。甘露醇作为稀释剂，软材黏硬且不易制粒，有少量不溶物，颗粒成型率为94.06%，低于麦芽糊精与乳糖的颗粒成型率96.46%、98.67%；麦芽糊精与乳糖作为单一稀释剂，软材黏硬度较好，均易制粒，溶化性佳，其中乳糖的软材情况和颗粒成型率均优于麦芽糊精；考虑麦芽糊精和乳糖均具有较好的赋形作用和矫味作用，且乳糖成本较贵，将麦芽糊精和乳糖作为混合稀释剂进一步优选。

表1 单一稀释剂种类考察Table 1 Single diluent type investigation

2.3.2 混合稀释剂的选择

以不同比例的麦芽糊精：乳糖（1∶2、1∶1、2∶1）作为混合稀释剂。依2.1项下操作，药物浸膏粉以药辅比1∶1.5，95%乙醇润湿，制备颗粒，结果见表2。当麦芽糊精：乳糖=1∶2时，颗粒成型率为94.96%，溶化性考察时，颗粒有少量不溶物；当麦芽糊精：乳糖=1∶1或2∶1时，软材适中且易制粒，制成颗粒溶化性佳，颗粒成型率相近，分别为98.30%和98.21%，考虑到1∶1或2∶1时差异不大，且乳糖成本较高，优选麦芽糊精∶乳糖=2∶1作为混合稀释剂比例。

表2 混合稀释剂比例考察Table 2 The proportion of mixed diluent was investigated

2.3.3 润湿剂的选择

考虑药物浸膏粉本身黏性较大，吸湿性较强，选用含水量较大的润湿剂易造成软材及颗粒板结，影响软材和颗粒成型率，根据文献[2]和预试验，采用药辅比1∶1.5，喷以不同百分含量的乙醇（75%、85%、95%）制软材，依2.1项下制粒，依2.2项下指标选择最佳润湿剂浓度，结果见表3。软材黏性随着含水量的降低而降低，95%乙醇作为润湿剂时，软材黏硬度适中，易制粒，溶化性佳且颗粒成型率较高，为98.21%，故选择95%乙醇作为润湿剂。

表3 润湿剂浓度优选Table 3 Optimum wetting agent concentration

2.3.4 药辅比的选择

以药物浸膏粉与混合稀释剂比例1∶0.5、1∶1、1∶1.5混匀，喷以95%乙醇润湿，按2.1项下制粒，按2.2项下指标优选最佳药辅比，结果见表4。当药辅比为1∶0.5时，颗粒成型率为89.41%，软材黏度较大，结硬块，不易制粒且有少量不溶物；当药辅比为1∶1.5时，成型率为89.46%，大于药辅比1∶1时79.83%的颗粒成型率，软材黏度适宜，溶化性佳，考虑载药量及每日服用量，故选择药辅比为1∶1.5。

表4 药辅比优选Table 4 Drug supplement ratio optimization

2.4 正交试验优化制备工艺

在单因素考察试验的基础上，对以下三个因素：稀释剂比例（A）、药辅比（B）、润湿剂浓度（C）设立3个水平，以颗粒成型率作为评价指标，进行L9（34）正交试验。因素水平表见表5，正交试验结果见表6，方差分析结果见表7。

表5 因素水平表Table 5 Factor level table

表6 正交试验的设计及结果表Table 5 Orthogonal test design and result table

表7 方差分析结果Table 7 Analysis of variance

由R值直观分析可知，三因素影响顺序为：A＞B＞C，经方差分析可知，三因素对结果都具有显著性影响（P<0.05），结果与直观分析一致。综合分析，景参麦颗粒的最佳制备工艺为A3B3C3，即稀释剂比例为：麦芽糊精∶乳糖=2∶1，药辅比为1∶1.5，润湿剂浓度为95%乙醇。

2.5 工艺验证性试验

依2.4项下最佳成型工艺制备3批样品，以颗粒成型率及溶化性做为考察指标，观察软材情况及制粒情况，观察成品颗粒外观，结果见表8，可知软材黏硬度适中，制成颗粒外观棕褐色，均匀，硬度适中，溶化性合格，三批颗粒的平均颗粒成型率为91.54%，与正交试验结果一致，表明本试验成型工艺稳定可靠，可用于景参麦颗粒的制备。

表8 验证性试验结果Table 8 Validation test results

2.6 薄层色谱鉴别研究

对景参麦颗粒进行薄层定性鉴别研究，最终建立了红景天、人参、白术三味药的薄层鉴别项，初步建立景参麦颗粒质量标准。

2.6.1 红景天的薄层鉴别

红景天含有多种黄酮苷[3]，《中国药典》2020年版一部红景天项下收载了以红景天苷为对照的鉴别项，参考药典方法设计薄层色谱试验，并对方法进行改进。取红景天苷对照品，依药典方法配置对照品溶液；取3个批次的景参麦颗粒1.5g、对照药材0.5g及1.5g按处方制成的阴性对照品，依照药典方法，配置供试品溶液；照薄层色谱法（通则0502）试验，分别吸取对照品溶液、对照药材溶液、3个批次供试品溶液、阴性对照溶液各7μL，点于硅胶G薄层板，以三氯甲烷∶甲醇∶丙酮∶水=6∶3∶1∶1的下层溶液为展开剂展开，展距为8cm，取出晾干，置碘蒸气中熏至显色明显棕褐色斑点，日光下检视。供试品色谱中，在与对照品及对照药材色谱相应位置显相同颜色的斑点，阴性对照未见明显干扰。结果表明，本法具有良好的专属性，取3批供试品采用本法鉴别重现性良好，可列入景参麦颗粒质量标准正文，详见图1。

2.6.2 人参的薄层鉴别

人参含有多种人参皂苷、多糖、氨基酸、多肽等多种成分[4]，《中国药典》2020年版一部人参项下收载了以人参皂苷Rb1、Rg1、Rf、Re为对照的鉴别项，参考药典方法设计薄层色谱试验，并对实验条件进行探索。取4种人参皂苷对照品，依药典方法配置混合对照品溶液；取3个批次的景参麦颗粒2.5g、对照药材1g及按处方制成的阴性对照品2.5g，依药典方法配置供试品溶液；照薄层色谱法（通则0502）吸取对照品溶液及对照药材溶液1-2μL、3个批次的供试品溶液3μL、阴性对照溶液1μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷∶乙酸乙酯∶甲醇∶水=15∶40∶22∶10的10℃以下放置分层的下层溶液为展开剂，展开8cm，取出晾干，浸渍于10%硫酸乙醇溶液中，快速取出，吹风机加热至斑点显粉紫色，分别置于日光和紫外灯（365nm）下检视。结果显示，在对照品色谱中，各人参皂苷的斑点显色明显，四个斑点分离清晰，未见重叠，在供试品色谱中，在与对照品及对照药材色谱相应位置上，分别显相同颜色的斑点或荧光斑点，阴性对照未见明显干扰，结果表明，本法具有良好的专属性，取3批供试品采用本法鉴别重现性良好，可列入景参麦颗粒质量标准正文见图2、3。

2.6.3 白术的薄层鉴别

白术含有大量挥发油，其主要成分为苍术酮、苍术醇、白术内酯等[5]，《中国药典》2020年版一部白术项下收载了以苍术酮为对照的鉴别项，参考药典方法设计薄层色谱试验，并对实验条件进行探索。取3个批次的景参麦颗粒1.5g、白术对照药材0.5g及按处方制成的阴性对照品1.5g，依药典方法配置溶液备用；照薄层色谱法（通则0502）吸取各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（60～90℃）∶乙酸乙酯=50∶1为展开剂展开8cm，取出晾干，浸渍于5%香草醛硫酸溶液，快速取出，吹风机加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，分别显相同颜色的斑点，并有显著桃红色主斑点，即为显色的苍术酮斑点，阴性对照未见明显干扰，结果表明，本法具有良好的专属性，取3批供试品采用本法鉴别重现性良好，可列入景参麦颗粒质量标准正文，详见图4。

2.7 检查

2.7.1 外观性状检查

3批颗粒的软材黏硬度适中，易成型易制粒，颗粒均匀，符合规定；本品为棕褐色颗粒，气微，味微甜。

2.7.2 颗粒含水量

对成型颗粒含水量测定，依照2020年版《中国药典》四部通则0104颗粒剂项要求测定颗粒水分，采用通则0832项下烘干法，平均颗粒含水量为4.70%，符合药典中药颗粒剂不超过8%的规定，结果见表9。

表9 颗粒含水量结果Table 9 Particle moisture content result

2.7.3 休止角α的测定

休止角α反映颗粒流动性[6]。采用固定漏斗法[1]，对景参麦颗粒休止角α进行测定，将漏斗固定于铁架台，使漏斗最底部距离水平桌面垂直距离为3cm，即锥高H=3cm，水平桌面固定坐标纸，使颗粒通过漏斗壁缘形成均匀圆锥，直至圆锥体尖端接触漏斗最下方，测量圆锥底部半径R，每个批次颗粒测量三次求平均值，测量3个批次，结果见表10。景参麦颗粒平均休止角α为35.03°，表明颗粒流动性良好，易于分装。休止角α计算公式为：α=artan（H/R）。

表10 休止角测定结果Table 10 Measurement results of Angle of repose

2.7.4 颗粒吸湿率

在温度25℃、湿度75%的恒温恒湿密闭条件下测定颗粒吸湿率，采用饱和盐溶液法[7]，即NaCl饱和盐溶液在25℃密闭条件下平衡48h，即为75%湿度，随后放入颗粒，计0时，通过分析天平精密称量颗粒总重量，结果见表11。

表11 颗粒吸湿率结果Table 11 Results of particle hygroscopicity

3 小结及讨论

本研究开发了一种辅助提高免疫力的产品，采用单因素试验和正交试验法,以颗粒成型率和溶化性为考察指标，优选其制备工艺为浸膏粉∶麦芽糊精∶乳糖=2∶2∶1，以95%乙醇润湿，制粒后60℃烘干即得；经质量标准初步研究，薄层色谱可鉴定方中的红景天、人参、白术，可列入质量标准正文；并对景参麦颗粒的外观性状、休止角、颗粒吸湿率及颗粒含水量进行检查，皆符合相关要求。本实验对该产品的开发及其质量标准进行了初步探索，实验所优选的工艺参数可为景参麦颗粒的生产开发提供参考，该工艺稳定合理，质量可控，可进行进一步的开发和生产。

在薄层色谱鉴别试验中，本文参照2020年版《中国药典》一部红景天、人参及白术的薄层鉴别方法，查阅大量相关文献，在此基础上探索景参麦颗粒鉴定的成熟条件，药典中红景天薄层鉴别部分进行优化改进，药典规定薄层板需展开需18cm，在实验过程中发现，展开时间过慢、不易出现斑点以及比移值Rf过小无法分离鉴定等问题，经试验，将10μL上样量缩减至7μL，展开距离调整为8cm，呈现出良好的效果，另外，对于人参及白术的薄层鉴别，经过摸索和微调实验条件，确定了适宜本产品的TLC条件。本方法简便快捷、重现性好，可作为景参麦颗粒的质量控制标准之一。

由于方中含皂苷等成分，导致浸膏粉易吸湿变软、结块[8]。稀释剂麦芽糊精、乳糖可改善浸膏的吸湿性，并且具有较好的矫味作用，不需另添加矫味剂。麦芽糊精溶解性良好，抗吸湿且成本低，乳糖化学性质稳定，流动性和成型性好，但成本较高[9]。试验考虑生产成本，最终选乳糖、麦芽糊精按一定比例混合作为稀释剂，结果呈现良好的颗粒成型率和溶化性；浸膏粉具有一定黏性，较高含水量的润湿剂和较低比例的稀释剂易吸湿结块[10]，在药辅比和润湿剂的筛选中，发现药辅比1∶1.5且润湿剂含水量低时，颗粒成型率和溶化性最佳；通过正交试验验证及检查，最终确定了景参麦颗粒的最佳成型工艺，该工艺制得颗粒外观均匀，成型率高，溶化性、休止角、颗粒含水量等均符合要求，具有简单方便，操作稳定，能较好的应用于实际生产，也为其它相似颗粒成型工艺的制备研究提供参考。