宝鸡麟游县柴胡质量评价研究*

张笑颜 薛璇玑 张新新 杨美娟 李铁军 郭增军**

(1.西安交通大学医学部药学院，陕西 西安 710061；2.麟游县卫生健康局，陕西 宝鸡 721599)

柴胡为伞形科植物柴胡BupleurumchinenseDC.或狭叶柴胡BupleuramscorzonerifoliumWilld.的干燥根，分别习称为“北柴胡”和“南柴胡”，性辛、苦、微寒，归肝、胆、肺经，具有疏散退热、疏肝解郁的功效[1]。随着中医药事业的发展，加之药农乱采乱挖等现象，柴胡野生资源数量急剧减少，加之柴胡因其临床用量大导致其市售价格连年上涨，目前市场上流通的药材主要以栽培品北柴胡为主[2-3]。陕西省自古以来就是柴胡的道地产区[4-5]，宝鸡市由于特殊的地理环境和人文条件，成为陕西省发展柴胡种植产业的主要区域之一[6-7]，2018年陕西省中药协会选定的“十大秦药”中，宝鸡柴胡更是位列“十大秦药”第二名[8]，目前主要涉及陈仓区、麟游县等地[9-10]，但不同产区地形条件差异明显，种质来源不一，致使柴胡质量参差不齐，严重影响中医临床用药及“宝鸡柴胡”品牌推广[11-12]。因此，明确当前柴胡药材质量，选用优质种源开展规范化种植是发展宝鸡柴胡及“秦药”亟待解决的现实问题。

2020年版《中国药典》柴胡含量测定项下要求柴胡皂苷a、d的总含量不低于0.30%，此外，黄酮类成分是柴胡属植物中共有的有效部位[13-14]，因此本文通过测定柴胡皂苷和总黄酮的含量以评价麟游县柴胡质量，以期为麟游县柴胡种植业及“秦药”发展提供参考。

1 仪器与试药

1.1仪器 LC-2030C 3D高效液相色谱仪，配有四元泵、自动进样器、柱温箱及DAD检测器(岛津Shimadzu)；METTLER AE240分析天平(梅特勒);KQ3200B超声波清洗器(昆山);UV-1800紫外分光光度计(岛津Shimadzu);EYELAN N-1100旋转蒸发仪(东京理化)。

1.2试剂 柴胡皂苷a、d对照品均购自中国食品药品检定研究院(批号：110777201711);芦丁购自宝鸡辰光生物科技有限公司(批号:HQ105561198，纯度>98%);色谱乙腈(瑞士，Oceanpak);娃哈哈纯净水;其余试剂为分析纯,均购自天津大茂化学试剂厂。

1.3药材 7批柴胡药材均于2019年4月收集于宝鸡麟游县，由西安交通大学药学院郭增军教授鉴定为北柴胡BupleurumchinenseL.，具体信息见表1。

表1 样品来源信息表

2 方法

2.1各样品中柴胡皂苷a、d的含量测定

2.1.1对照品溶液的制备 取柴胡皂苷a、d对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含柴胡皂苷a 0.5 mg、柴胡皂苷d 0.5 mg的溶液，摇匀，即得。

2.1.2供试品溶液的制备 取本品粉末(过60目筛)约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入含5%浓氨试液的甲醇溶液25 mL，密塞，30 ℃水温超声处理(功率200 W，频率40 kHz)30 min，滤过，用甲醇30 mL分3次洗涤容器及药渣，洗液与滤液合并，回收溶剂至干。残渣加甲醇溶解，转移至10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得[1]。

2.1.3色谱条件 Sepax C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流动相乙腈(A)-水(B)，洗脱程序0～27 min，15%～48%A；27～37 min，48%～57%A；37～40 min，57%～71%A；40～55 min，71%～80%A；55～60 min，80%～90%A；60～65 min，90%～90%A；65～70 min，90%～15%A；柱温30 ℃；流速1.0 mL·min-1；检测波长210 nm；进样体积20 μL。

2.1.4方法学考察 对上述方法进行线性关系、精密度、重复性、稳定性、加样回收率考察。以峰面积/106为纵坐标(Y)，对照品溶液浓度为横坐标(mg·mL-1，X)计算回归方程，结果表明在0.025～0.1 mg·mL-1浓度范围内，柴胡皂苷a、d线性关系良好；配制0.25 mg·mL-1的混合对照品溶液连续进样6次，连续6 d各进样1次，考察仪器精密度；称取7号样品约0.5g，精密称定，按供试品方法处理样品，分别于0,2,4,8,12,24 h进样分析，考察样品稳定性；称取7号样品约0.5 g共6份，精密称定，按供试品方法处理样品，计算柴胡皂苷a、d含量，考察操作重复性；称取7号样品约0.5 g共6份，精密称定，分别加入0.5 mL的0.25 mg·mL-1混合对照品溶液，考察方法回收率。实验结果见表2，由表可见，该方法精密度、重复性、回收率高，样品室温下放置24 h稳定性良好，可用于样品的测定。

2.2各样品中柴胡总黄酮的含量测定

2.2.1对照品溶液的制备 取芦丁对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含芦丁0.5 mg的溶液，摇匀，即得。

表2 柴胡皂苷a、d含量测定实验方法学结果(n=6)

2.2.2供试品溶液的制备 取样品约0.2 g，精密称定，加入25 mL甲醇超声提取15 min后，滤过，回收溶剂至干，残渣用甲醇溶解至10 mL量瓶中，定容，滤过，取续滤液，即得。

2.2.3显色方法 精密量取供试品溶液5 mL置于25 mL量瓶中，用水补足至6 mL，加5%亚硝酸钠溶液1 mL，混匀，放置6 min，加10%硝酸铝溶液l mL，摇匀，放置6 min，加4%氢氧化钠试液10 mL，再加水至刻度，摇匀，放置15 min，以随行试剂作空白对照，在510 nm波长处测定吸光度[15-17]。

2.2.4方法学考察 对上述方法进行线性关系、精密度、重复性、稳定性、加样回收率考察，结果见表3。将芦丁对照品溶液依次稀释成0.02、0.05、0.1、0.2、0.5 mg·mL-1的对照品溶液，分别精密量取5 mL置于25 mL量瓶中，自“2.2.3 显色方法 用水补足至6 mL”后操作，以吸光度为纵坐标(Y)，浓度为横坐标(mg·mL-1,X)，绘制标准曲线，结果表明总黄酮测定浓度在0.02～0.5 mg·mL-1浓度范围内，线性关系良好；取0.1 mg·mL-1的芦丁对照品溶液，按上述显色方法连续测定6次，计算日内精密度；称取7号样品约0.2 g，精密称定，按上述供试品制备及显色方法处理样品，分别于0，1，2，3，4 h测定吸光度，考察样品稳定性；称取7号样品约0.2 g共6份，精密称定，按上述供试品制备及显色方法处理样品，考察方法重复性；称取7号样品约0.5 g共6份，精密称定，分别加入0.5 mL的0.1 mg·mL-1芦丁对照品溶液，计算加样回收率。实验结果见表3，由表可见，该方法精密度、重复性、回收率高，样品室温放置4h内稳定性良好，可用于柴胡样品总黄酮的含量测定。

表3 总黄酮测定实验方法学结果(n=6)

3 结果

3.1各样品柴胡皂苷a、d的含量测定 称取充分干燥的7批柴胡根部粉末约0.5 g，平行三份，精密称定后，按“2.1.2”方法制备供试品溶液后进样分析，记录峰面积，计算柴胡皂苷a、d的含量。结果见表4及图1。

图1 各柴胡样品中柴胡皂苷含量差异(虚线为药典限量0.3%)

表4 各柴胡样品中柴胡皂苷含量结果

上述结果显示：麟游县域内采购的7批柴胡样品均高于药典标准，其中样品1～3号均为野生样品，其柴胡皂苷含量分别高于药典3.2、2.2、3.0倍，提示我们麟游县的生态环境可能适宜于柴胡药材有效成分的累积。样品4～7号为不同种源、不同生长年限的栽培柴胡样品，其含量存在明显差异，其中7号样品(河北安国种源)柴胡皂苷含量达药典限量的7.9倍。

3.2柴胡总黄酮的含量测定 称取充分干燥的7批柴胡粉末约0.2 g，平行三份，精密称定后，按“2.2.2”方法制备供试品溶液后显色，测定吸光度，计算柴胡总黄酮的含量。结果见表5及图2。

表5 各柴胡样品中柴胡总黄酮含量结果

图2 各柴胡样品中柴胡总黄酮含量差异

上述结果表明：1～3号柴胡均为野生样品，其总黄酮含量接近，5号(桑树塬基地)黄酮含量最高，7号(河北安国种源)含量次之。

4 讨论

柴胡为我国大宗中药品种，但由于其悠久的种植历史悠久，各各市区生态条件存在明显差异、加之各产区种质来源复杂，导致药材质量不均的问题日趋严重[18-20]，本文从柴胡皂苷和总黄酮含量两方面综合评价宝鸡麟游县野生及栽培柴胡质量，为进一步优选种源，确保柴胡质量的一致性及可控性，充分发挥当地生境优势，进一步保障药材质量和形成柴胡品牌提供数据参考。