准噶尔山楂果实、叶和核的化学成分分析

2022-02-20范馨予刘慧高红艳

伊犁师范大学学报(自然科学版) 2022年4期

范馨予，刘慧，高红艳

（伊犁师范大学化学与环境科学学院，新疆普通高等学校天然产物化学与应用重点实验室，新疆伊宁 835000）

0 引言

准噶尔山楂（Crataegus songarica）属于蔷薇科的山楂属的一种植物，主要分布于中国新疆维吾尔自治区的伊犁州境内，是我国新疆伊犁州特有的一种野生植物资源［1，2］.准噶尔山楂是国家重点保护的野生植物之一，已录入中国优先保护物种名录［3］.

在现代研究中发现，山楂具有降低血压、调节血脂的功效［4］.Abeer M.Rababa'h等［5］研究人员发现山楂花和叶的提取物具有很好的抗氧化作用和补血作用.Lei Ma等［6］通过研究发现山楂除具有抗癌功效外，其核也具有多种化学成分和药理作用［7］.研究表明准噶尔山楂作为山楂的一种也具有降血压血糖、抗氧化等作用［8］.研究学者们通过响应面法确定了准噶尔山楂残渣中多糖的最佳纯化条件及其与加速衰老D-半乳糖的构效关系［9，10］.此外，研究人员还针对准噶尔山楂中的黄酮和熊果酸两种化学成分进行了药理活性测定，结果显示这两种化学成分具有抗氧化活性［11，12］.

本实验采用系统预实验法，对准噶尔山楂的果实、叶和核的化学成分进行鉴别分析，系统全面地考察了其所含的化学成分，发现其潜藏价值的同时也为寻找其利用价值新途径提供理论基础.

1 实验材料与仪器

1.1 实验材料

准噶尔山楂的果实和叶均采摘于新疆维吾尔自治区伊犁州霍城县大、小西沟.

1.2 实验试剂

冰乙酸（天津市福晨化学试剂厂）；石油醚（天津市致远化学试剂有限公司）；正丁醇（天津市光复科技发展有限公司）；无水乙醇（天津市北联精细化学品开发有限公司）；浓硫酸（乌鲁木齐迪城化工有限公司）；镁粉（天津市福晨化学试剂厂）；浓盐酸（西陇科学股份有限公司）；乙酸镁（北京化工厂）；乙酸酐（西陇科学股份有限公司）；氢氧化钾（天津市福晨化学试剂厂）；甲醛（成都市科龙化工试剂厂）；氢氧化钠（天津市大茂化学试剂厂）；吡啶（天津市光复精细化工研究所），均为分析纯.α-萘酚试剂；1%三氯化铁乙醇试剂；三氯化铁-铁氰化钾试剂；1%三氯化铝乙醇试剂；氯化钠-明胶试剂；碘化铋钾试剂；碘化汞钾试剂；硅钨酸试剂；香草醛-浓硫酸试剂；0.2%茚三酮乙醇溶液；双缩脲试剂；斐林试剂；碱性亚硝酰铁氰化钠试剂；7%盐酸羟胺乙醇试剂；碘-碘化钾试剂；磷钼酸试剂；0.04%溴甲酚绿乙醇溶液；1%的溴酚蓝试剂，均自配.

1.3 实验仪器

FA2104N型电子天平（上海舜宇恒平科学仪器有限公司）；BAO-150AG型电热恒温干燥箱（施都凯仪器设备上海有限公司）；KQ-250DB型超声波清洗仪（昆山市超声仪器有限公司）；SY-2000型旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；YLN-II型三用紫外分析仪（北京市亚力恩科学器材公司）.

2 实验方法及结果分析

实验样品处理：将准噶尔山楂果实去核、去皮之后，置于通风阴凉处自然风干，把准噶尔山楂果实、叶及核放入电热恒温干燥箱中，调到温度为50℃烘干，粉碎过60目筛.用密封袋将准噶尔山楂处理好的不同部位样品密封后置于通风、干燥处保存.

2.1 水提取液化学成分试管预实验法

2.1.1 水提取液的制备

冷水提取液：称取准噶尔山楂果实、叶和核样品粉末各5.0000 g，置于150 mL的锥形瓶中，加入100 mL的蒸馏水，玻璃棒搅拌，于室温下浸泡一夜，将3种样品提取液分别进行抽滤，滤饼抽滤2次，合并相对应滤液，定容到100 mL，用来检测氨基酸、多肽和蛋白质［13］.

此外，相比较于《EPO专利审查指南》的大幅度修改，美国、日本和韩国近期并没有对涉及计算机程序的专利审查相关规定进行修改和说明，从审查和司法实践来看，计算机程序相关发明的专利保护政策似乎仍然延续以往标准，并没有明确体现出对人工智能浪潮的特别关注和响应。

热水提取液：称取准噶尔山楂果实、叶和核样品粉末各5.0000 g，置于150 mL的锥形瓶中，再加入100 mL的蒸馏水，玻璃棒搅拌，在数显恒温水浴锅中持续加热60 min，将3种样品提取液分别进行抽滤，滤饼抽滤2次，合并相对应滤液，定容到100 mL，用来检测糖类、还原糖类、有机酸类、鞣质等化学成分［14-15］.

2.1.2 水提取液化学成分预实验方法

通过加酸沉淀法［13］、茚三酮显色实验［13］、双缩脲实验［13］检测待测溶液中的氨基酸、蛋白质及多肽；通过斐林反应［16］、Molish反应［16］检测待测溶液中的糖类、还原糖；通过Liebermann-Burchard反应［17］、泡沫实验［18］检测待测溶液中的皂苷；通过三氯化铁显色反应［19］检测待测溶液中的酚类；通过明胶反应［20］检测待测溶液中的鞣质，实验结果见表1.

由表1结果表明：准噶尔山楂果实、叶和核中均含有氨基酸、蛋白质、多肽、糖类、还原糖、皂苷、酚类和鞣质.

表1 准噶尔山楂果实、叶和核水提取液化学成分预实验结果

注：“+”表示有实验现象，“+”越多表明实验现象越明显；“-”表示无实验现象；“-+”表示有实验现象但与标准参考实验现象不符.

2.2 乙醇提取液化学成分试管预实验法

2.2.1 乙醇提取液的制备

乙醇提取液：称取准噶尔山楂果实、叶和核样品粉末各5.0000 g，放入150 mL的圆底烧瓶中，分别加入100 mL 95%的乙醇溶液，微晃，搭好回流装置，将温度调至75℃进行水浴回流1 h［21］.待提取液温度冷却至室温后，将3种样品提取液分别进行抽滤，滤饼抽滤2次，合并相对应滤液，定容到100 mL，旋转蒸发为原体积的2/3.分别移取少量相对应的滤液，用来检测有机酸、甾体及三萜类化合物、黄酮类等［22］.

2.2.2 乙醇提取液化学成分预实验方法

通过pH试纸［13］、溴酚蓝实验［17］、溴甲酚绿实验［17］检测待测溶液中的有机酸；通过Liebermann-Burchard反应［17］、CHCl3-98%H2SO4反应［13］、三氯乙酸显色反应检测待测溶液中的甾体及三萜类化合物；通过盐酸-镁粉反应［26］、三氯化铝反应［26］检测待测溶液中的黄酮类；通过异羟肟酸铁反应［13］、开环闭环反应［27］检测待测溶液中的香豆素类；通过Keller-Kiliani（K-K）反应［16］检测待测溶液中的强心苷；通过碱液实验［28］、乙酸镁显色反应［28］检测待测溶液中的蒽醌类；通过碘化铋钾实验［13］、碘化汞钾实验［13］、硅钨酸实验［13］、甲醛-浓硫酸显色反应［29］、碘-碘化钾反应［16］、磷钼酸实验［16］检测待测溶液中的生物碱类，实验结果见表2和表3.

表3 准噶尔山楂果实、叶和核酸性乙醇提取液化学成分预实验结果

由表2和3结果表明：准噶尔山楂果实、叶和核中均含有有机酸、甾体及三萜类化合物、黄酮类、香豆素类、强心苷、蒽醌类、生物碱类.

表2 准噶尔山楂果实、叶和核乙醇提取液化学成分预实验结果

2.3 石油醚提取液化学成分试管预实验法

2.3.1 石油醚提取液的制备

分别精确称取准噶尔山楂果实、叶和核样品粉末各5.0000 g，放入150 mL的圆底烧瓶中，再加入石油醚（60~90℃）100 mL［30］，70℃水浴回流提取3次.待提取液温度冷却至室温后，将3种样品提取液分别进行抽滤，滤饼抽滤2次，合并相对应滤液，定容到100 mL，旋转蒸发为原体积的1/2.分别移取相对应的滤液，用来检测挥发油和油脂.

2.3.2 石油醚提取液化学成分预实验方法

通过油斑实验［31］、香草醛-浓硫酸实验［31］、磷钼酸实验［31］检测待测溶液中的挥发油和油脂类，实验结果见表4.

由表4结果表明：准噶尔山楂果实、叶和核中均含有挥发油和油脂类.

表4 准噶尔山楂果实、叶和核石油醚提取液化学成分预实验结果

2.4 纸色谱法

展开剂为正丁醇-冰乙酸-水（7∶1∶2），分别用来检测水提取液中的氨基酸、有机酸和乙醇提取液中的酚类、黄酮类、蒽醌类、香豆素类，实验结果见表5.

由表5结果表明：准噶尔山楂果实、叶和核中均含有氨基酸、有机酸、酚类、黄酮类、蒽醌类和香豆素类.

表5 准噶尔山楂果实、叶和核纸色谱化学成分预实验结果

2.5 薄层色谱法

展开剂为正丁醇-冰乙酸-水（4∶1∶5），用来检测氨基酸、黄酮类；正己烷-乙酸乙酯（8.5∶1.5），用来检测挥发油；乙酸乙酯-甲醇-水（8∶5∶5），用来检测强心苷；正丁醇-乙酸乙酯-异丙醇-冰乙酸-吡啶-水（7∶20∶12∶7∶6∶5），用来检测糖类；三氯甲烷-甲醇-水（65∶35∶10），用来检测皂苷类［31-33］，实验结果见表6.

由表6结果表明：准噶尔山楂果实、叶和核中均含有氨基酸、黄酮类、挥发油、强心苷、糖类和皂苷类.