40岁以上HBeAg阴性慢性乙肝患者血清HBV DNA水平与肝纤维化的关系探讨

凌淳 李媛媛

(1.贵州省疾病预防控制中心预科所，贵州 贵阳 550004；2.贵州医科大学附属医院肝炎实验室，贵州 贵阳 550004)

人感染乙型肝炎病毒(HBV)之后，病毒持续6个月以上仍没有被清除的称为慢性HBV感染。感染的年龄是影响慢性化的最主要因素。在围产期和婴幼儿时期感染HBV中，分别有90%和25%～30%将发展成慢性感染[1]。HBV感染的自然史可以分为3个时期：免疫耐受时期、免疫清除时期、非活动或低复制时期。婴幼儿时期感染，因为免疫耐受，丙氨酸转移酶(ALT)正常，肝组织正常，随着年龄的增长，进入免疫清除期，由于基因变异，免疫不完全耐受及免疫低下，相当一部分病人不能完全清除病毒，eAg转化为eAb，ALT升高，HBV DNA水平下降进入静止期，随后免疫再活跃，出现反复的静止、活跃引起持续性慢性肝损伤，此期一般30～50年，发展成为肝硬化和肝癌。本文主要探讨HBeAg阴性慢性乙肝患者不同血清HBV DNA水平与肝纤维化四项指标的关系。

1 材料与方法

1.1研究对象 选自贵州医科大学附属医院2019年1—12月门诊及住院的病人。所有选择按照2010年制定的《慢性乙型肝炎防治指南》[1]临床诊断为HBeAg阴性慢性乙肝患者。共有283例，其中男性192例，女性91例，年龄≥40岁，平均年龄51.97岁。所有的病例将按HBV DNA水平分成<103IU/mL、103～105IU/mL、>105IU/mL三组，分别为166例，105例，12例。所有的患者均已排除自身免疫性肝病，丙肝，丁肝及脂肪肝和糖尿病。

1.2方法 清晨空腹静脉采血，分离血清10 mL于-20℃保存待检，HBV DNA采用荧光定量PCR法定量检测其病毒载量，仪器是美国ABI公司提供的7500PCR荧光分析仪，试剂是由中山大学达安基因股份有限公司提供。采用化学发光法检测HA、LN、PCⅢNP、Ⅳ-C四项肝纤维化指标。仪器为安图实验仪器有限公司提供的化学发光免疫分析仪，试剂由郑州安图生物股份公司提供。操作流程严格按照仪器操作规程和试剂说明书进行。

2 结 果

283例HBeAg阴性慢性乙肝患者不同血清HBV DNA水平与肝纤维四项指标的比较分析显示，慢性乙肝患者HBV DNA水平<103组与103～105组肝纤四项比较，血清肝纤维化四项标志物均无显著差异(P>0.05)，<103组与>105组肝纤四项比较，血清肝纤维标志物HA、LN、Ⅳ-C升高(P<0.05),PCⅢNP无明显差异(P>0.05)；103～105组与>105组比较，血清肝纤维化标志物HA(P<0.05),其他三项(HA、PCⅢNP、Ⅳ-C)均无明显差异(P>0.05)，HBV DNA与HA、LN、PCⅢNP、Ⅳ-C间的相关系数分别为r=0.872、r=0.901、r=0.914、r=0.908，均存在着正相关关系。肝纤四个指标随着HBV DNA复制水平的增高HA、LN、Ⅳ-C增高，HA在HBV DNA复制水平每一个阶段均增高，尤其以HBV DNA高复制水平阶段增高为主。见表1。

表1 不同HBV DNA水平组与肝纤四项指标之间的关系

3 讨 论

乙型肝炎病毒(HBV)的持续感染是导致肝纤维化和肝硬化的主要因素，高载量的HBV DNA是发生肝硬化、肝癌独立的风险因素。有报道[2]约有23%和4.4%的HBV感染者将发展为肝硬化和原发性肝癌。有学者[3]认为，病毒在肝脏内大量的复制，不仅可导致机体正常的免疫清除，还造成了机体免疫病理反应，出现肝细胞损害，肝功能异常。目前对肝硬化的诊断，以肝脏穿刺病理学检测为标准[4]。但穿刺病理学方法创伤性较大，病人往往也很难接受，限制了其应用。目前为止有越来越多的学者提出了利用HBV DNA和肝纤维化指标，在一定程度上能达到无创诊断的目的。

本研究结果显示，40岁以上HBeAg阴性慢性乙肝患者的血清HBV DNA水平与其肝纤四项指标之间存在一定关系，肝纤维化四项标志物随着HBV DNA水平的增高而增高，HBV DNA水平与肝纤维化四项HA、LN、PⅢNP、Ⅳ-C间呈正相关。这反映了肝纤维化的持续性，提示了肝纤维化的发生与病毒的连续性感染有关。慢性乙肝患者的血清 HBV DNA病毒载量主要是反映病毒在肝脏内的复制程度，在复制过程当中会激发机体的免疫系统对病毒进行清除，还会使机体发生免疫病理反应，最终将会引起肝细胞的损伤和破坏[5]。HBV DNA高水平地持续复制是慢性乙肝进展的主要推动力，其复制越多，就越有机会导致广泛性肝细胞损伤，最终将会导致肝衰竭死亡或发生肝癌[6]。本研究中有12例慢乙肝患者DNA高复制水平时肝纤四项都增高，说明了肝纤维化的程度较高。

本研究中，HA在HBV DNA复制水平的每一个阶段均增高，尤其以HBV DNA高复制水平阶段增高为主，提示HBeAg阴性中血清HBV高载量者肝脏存在损伤和肝纤维化或胶原合成。肝脏是体循环中HA的摄取和分解场所，当肝脏受损时，间质细胞增生，合成的HA将会增加，肝内皮细胞受损，则分解HA的能力将会降低。HA水平能体现肝脏纤维化的活动性及受损程度。有研究[7]显示，HA是肝纤维化标志物中唯一与HBV DNA载量水平具有相关性，说明肝纤维化的形成与病毒的连续感染有关。本研究结果还显示，Ⅳ-C和LN、PⅢP在HBV DNA高水平组增高。Ⅳ-C是基底膜的主要成分，在细胞粘附、分化和基因表达中起重要作用。肝纤维化时Ⅳ-C沉积增加，是反映肝基底膜胶原变化的可靠指标。Ⅳ-C的量随着肝纤维化进展而升高。LN是细胞外基质糖蛋白成分，正常情况下，肝窦内没有LN的沉积，但是在出现肝纤维化时，肝窦内就会有LN的沉积，提示肝窦内有基底膜的形成。PⅢP是Ⅲ型前胶原裂解下了的N-末端肽，肝纤维化早期PⅢP合成活跃，晚期合成减慢。PⅢP可在一定程度上反应炎症轻、重程度的变化，PⅢP对于纤维化和早期肝硬化均具有一定诊断价值，但灵敏度和特异度不高。所以，在HBV DNA各个水平分组之间无统计学意义。

本研究结果显示，血清HBV DNA载量与HA水平呈正相关与肝纤维化血清学指标有一定的关联，这与研究[8-9]相一致。有研究[10]报道，仅有HA随着HBV DNA水平的增高而增高。还有文献[11-12]报道，HBV DNA水平与肝纤维化指标没有相关性。都与本次研究结果不相符。其原因可能是，(1)由于慢性乙肝肝硬化的发病机制较复杂，HBV的复制并不是病理损害的唯一因素。(2)HBV的复制与肝纤维化反映了疾病的过程和发病的机制不在同一阶段，比如：在免疫耐受时期，HBV复制活跃但肝脏受损却不明显；而在免疫清除时期，肝脏炎症活动严重，部分的病毒被清除，可是血清HBV DNA水平却不高。除了病毒复制之外，机体正常或者病理免疫因素也是有影响的；也可能是由于检测的方法、设备及其试剂的不同所导致。