疟原虫胶体金快速检测试剂盒在加蓬的临床应用研究

李世佳，NGANIANGA Chailina

1.天津市第四中心医院检验科，天津 300143；2.加蓬弗朗斯维尔中加友谊医院检验科，弗朗斯维尔 3725

疟疾是一种严重危害人类身体健康的寄生虫病，疟原虫主要分为恶性疟原虫、间日疟原虫、三日疟原虫和卵型疟原虫。目前疟疾在世界范围内广为流行，其中以非洲最为严重，全球近90%的疟疾病例发生于非洲，且以恶性疟为主[1-2]。加蓬地处非洲西南部，气候多雨湿热，增大了疟疾经蚊虫传播可能[3-4]。近年来，随着全球经济一体化进程，我国外出到加蓬务工人员逐年增加，且多在林场、矿区等易于蚊虫生长繁殖地区工作，加之当地肠道疾病发病率也较高，很多疟疾患者发热后自行服用退热、消炎药治疗，不易被及时发现，常常延误最佳治疗时机。

疟疾的早期诊断是防治的关键[5]，目前常用的检测方法为疟原虫镜检法、抗原快速检测和核酸检测[6]。但受经济条件所限，非洲当地无法广泛开展疟疾核酸检测项目，故多以显微镜镜检法作为疟疾检测的金标准，辅以抗原快速检测。万孚疟原虫快速检测试剂盒是我国唯一可同时检测人体4种疟原虫的试剂盒[7]。本研究旨在分析疟原虫胶体金快速检测试剂盒法(RDTs法)对加蓬地区疟疾的检测效果，为RDTs法在非洲地区的推广应用提供依据。

1 资料与方法

1.1一般资料 收集加蓬弗朗斯维尔市中加友谊医院2020年9月至2021年6月105例疑似疟疾患者(中国人25例，加蓬人80例)的乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝全血标本。105疑似疟疾患者中男63例，女42例。

1.2仪器与试剂 奥利巴斯显微镜；疟原虫检测试剂盒(广州万孚生物技术有限公司，产品标准编号：YZB/国4201-2011)。

1.3方法

1.3.1RDTs法 参照试剂盒说明书，吸取5 μL全血标本垂直滴加于加样区，同时滴加3滴裂解液于加裂解液区，15 min内观察显示结果。对照区(C)和检测区(T1)同时出现红色条带提示感染恶性疟原虫。对照区(C)和检测区(T1、T2)同时出现红色条带提示感染恶性疟原虫合并其他3种疟原虫的一种或几种。对照区(C)和检测区(T2)同时出现红色条带提示感染间日疟原虫、三日疟原虫或卵形疟原虫的一种或几种。仅对照区(C)出现红色条带提示检测结果为阴性。对照区(C)无红色条带出现，提示检测结果无效。

1.3.2显微镜镜检法 参照WS259-2015《疟疾的诊断》[8]制作厚、薄血涂片，100倍油镜下观察厚血膜，发现疟原虫后，以薄血膜进行虫种分类。以显微镜镜检结果作为疟疾检测的金标准。

1.3.3RDTs法检测综合推广能效分析 将显微镜镜检法与RDTs法进行多角度推广能效比对，根据10项因素给予高、中、低3档评定，依不同档次赋值3、2、1分，总分30分，计算综合推广率，综合推广率越高表示综合推广能效越好。

2 结 果

2.12种方法检测阳性率比较 105例疑似疟疾患者中，显微镜镜检法检出阳性92例，阳性率87.6%(92/105)，其中恶性疟阳性率81.9%(86/105)，间日疟阳性率3.8%(4/105)，卵形疟阳性率1.9%(2/105)。采用RDTs法检出阳性91例，阳性率86.7%(91/105)，其中恶性疟87例，非恶性疟4例。显微镜镜检法、RDTs法检测阳性率比较，差异无统计学意义(P>0.05)。

2.2RDTs法对恶性疟、非恶性疟的诊断指标分析 以显微镜镜检法为金标准，对恶性疟检测结果分析得出：RDTs法检测灵敏度为100.0%，特异度为94.7%。对非恶性疟检测结果分析得出：RDTs法检测灵敏度为66.7%，特异度为100.0%。2种方法检测结果比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 RDTs法对恶性疟、非恶性疟的诊断指标(%)

2.32种检测方法在加蓬的综合推广能效分析 根据10项因素评定得分显示，显微镜镜检法合计得分为19分，综合推广率为63.3%(19/30)，而RDTs法检测合计得分为26分，综合推广率为86.7%(26/30)。见表2。

表2 2种检测方法的综合推广能效分析

2.42种方法检出时间比较 显微镜镜检法经制作厚、薄血膜及镜检过程，平均检出时间为(40.0±5.2)min，RDTs法平均检出时间为(12.6±1.5)min，2种方法检出时间比较，差异有统计学意义(P<0.05)。

3 讨 论

2021年6月30日，世界卫生组织认证中国已消除疟疾[9]。但随着经济一体化带来的人口流动，我国输入性疟疾的风险依旧存在，主要由非洲及东南亚国家归国务工人员输入[10]。据报道，全球每年感染疟疾病例近2亿，其中引起死亡的多为恶性疟疾[11]。因此，提高疟疾的早期诊断率是救治的关键。

目前，疟疾诊断方法包括显微镜镜检法、RDTs法和PCR法。其中传统血涂片显微镜镜检法是检测疟原虫的金标准，此方法成本较低且能鉴定虫种，但受检验人员水平限制，在血液中疟原虫密度较低的情况下极易造成漏检，而且制作厚、薄血膜步骤烦琐、用时较长。PCR核酸检测技术因其高灵敏度和特异度等优势，在疟疾诊断中应用前景广泛，但受非洲环境、经济等条件所限，在当地较难开展。本研究结果显示，RDTs法灵敏度较高，可以减少漏诊。与镜检法不同，RDTs法检测操作更为简便，1 min内即可观察结果且更加直观，易于基层检验医生甚至非专业人士操作使用，已广泛应用于疟疾筛选[12]。万孚疟原虫快速检测试剂盒采用恶性疟原虫抗组氨酸富集蛋白Ⅱ(HRP-Ⅱ)单克隆抗体和抗鼠IgG多克隆抗体。胶体金标记抗HRP-Ⅱ单克隆抗体，应用层析式双抗体夹心法的原理定性检测全血中的疟原虫抗原。HRP-Ⅱ是疟原虫消化血红蛋白的产物，属于血溶性抗原，包含大量组氨酸，在疟疾患者血、尿中均可检出，在恶性疟疾及间日疟诊断中特异度高[7]。本研究中，镜检法所示的86份恶性疟原虫阳性标本，应用RDTs法全部检出。一般认为，当疟原虫密度<50个/μL时镜检法难以检出，RDTs法可检出疟原虫>10个/μL，本研究中RDTs法检测灵敏度为100.0%，较镜检法多检出1例恶性疟病例，正是因患者血液中疟原虫密度低所致。但RDTs法漏诊了2例非恶性疟患者，提示其对非恶性疟的检测灵敏度不佳，这与MALTHA等[13]的研究结果一致。本研究结果显示，采用镜检法与RDTs法检测疟疾的阳性率比较，差异无统计学意义(P>0.05)，这与张欣等[14]研究结果一致。此外，RDTs法检出时间明显短于显微镜镜检法，达到了临床快速诊断的要求。

综上所述，该试剂盒能够快速准确地检测疟原虫，特别是非洲地区高发的恶性疟，检出质量和效率与显微镜镜检法相当，且综合推广能效优于显微镜镜检法。因此，RDTs法可作为显微镜镜检法的辅助检测工具，在医疗条件落后的非洲加蓬地区推广使用。