中生菌素水剂对芒果细菌性角斑病的田间防效

李双双潘忠成张心心郑鹏飞田利明周柳李蒲民

(1.陕西麦可罗生物科技有限公司，陕西 渭南 714200； 2.哈尔滨工程大学材料科学与化学工程学院教育部超轻材料与表面技术重点实验室，黑龙江 哈尔滨 150001)

芒果细菌性角斑病(Xanthomonas campestris pv. Mangiferaeindicae)又称细菌性溃疡病、细菌性黑斑病、细菌性叶斑病等，是芒果生产上常发性重要病害。据联合国粮食及农业组织在2015年统计，我国是仅次于印度的第2大芒果生产国，占世界总产量的11%[1]。该细菌性病害具有一定的潜伏性和爆发性[2]，尤其在多雨、多雾年份及台风雨过后常发生突然爆发现象，主要危害树梢、叶片及果实，期间造成大量的叶斑和果斑，严重时炭疽病病菌等常经叶片或果实的病斑处入侵到果实，诱发贮藏期出现大量的烂果，严重影响果实外观及商品价值。该病多聚集于芒果盛产的广东、广西、海南、四川及福建等地区，一般造成的产量损失在15%～30%，严重时高达50%[3]，严重威胁了芒果产业健康持续发展，对果农的经济收入也造成严重损失。化学药剂的使用成为生产上防治芒果细菌性角斑病的主要方法，但由于化学药剂的长期使用仍存有安全隐患，且会对环境造成极大的污染，因此生产上寻找安全、高效、低风险的药剂对芒果产量和品质的提高有重大意义。目前生产上出现不少替代农用链霉素防治细菌病害药剂，中生菌素便是其中之一。

中生菌素(zhongshengmycin)由中国农业科学院生物防治研究所开发，后定名的新型农用抗生素，其产生菌是淡紫灰链霉菌海南变种。中生菌素作为生物农药，对丝状真菌、革兰氏阳性菌以及革兰氏阴性菌均具有强烈抑制效果，对环境无污染，是农业生产中一种接近完美的抗细菌、真菌的新型生物农药杀菌剂。其使用安全，可在果树花期使用，该产品被列为“九五”国家重点推广项目，1991年通过国家科技成果鉴定，1996年获国家级新产品奖[4]。为了验证中生菌素对芒果细菌性角斑病的防治效果，本试验进行了杀菌剂中生菌素对芒果细菌性角斑病的室内毒力测定，为田间应用提供了数据支撑。并在此基础上进行了田间防效叶面喷施的方法，对生物农药杀菌剂防效进行测定，旨在为芒果细菌性角斑病的生物防治提供理论依据。

1 供试材料与方法

1.1 供试材料

1.1.1 试验药剂

1.1.1.1 室内毒力测定试验

试验药剂30%中生菌素原药，由陕西麦可罗生物科技有限公司生产提供。对照药剂71.7%春雷霉素原药，由有广西田园生化股份有限公司提供。

1.1.1.2 田间防效试验

试验药剂5%中生菌素水剂、3%中生菌素可湿性粉剂，均由陕西麦可罗生物科技有限公司生产提供。对照药剂4%春雷霉素水剂，由陕西麦可罗生物科技有限公司生产提供。

1.1.2 试验体系及芒果品种

室内毒力测定试验在中国热带农业科学院环境与植物保护研究所农药化学生物学与应用研究组实验室进行。试验对象芒果细菌性角斑病，由中国热带农业科学院南亚热带作物研究所热带园艺产品采后保鲜项目团队提供。

田间试验在海南省乐东县佛罗镇新丹村基地进行，基地平地种植，供试品种为“贵妃芒”。芒果树龄7a，种植密度为45棵·667m-2，历年芒果细菌性角斑病均有发生。试验是在芒果物候期果实幼果期进行。

1.2 方法

1.2.1 室内毒力测定

1.2.1.1 试验设计及安排

试验重复3次，剂量如表1所示。

1.2.1.2 室内毒力测定方法

采用浑浊度法参考NY/T 1156.16-2008试验准则[5]进行室内毒力测定试验。利用等倍稀释法配制含药液体培养基，并将其以浓度梯度自低到高的顺序加入到96孔酶标板中(每孔200μL)。将菌悬液加入酶标板中，加量为10μL。其中样品对照组加10μL菌悬液及200μL液体培养基，空白对照组加入200μL液体培养基，同时设置药剂溶液对照，每孔200μL。将药剂溶液与菌悬液用混匀器混匀打散，将样品置于培养箱中振动(500r·min-1)培养，设置培养温度28～30℃，培养时间12～18h，用酶标仪测定菌液吸光度。

所得结果用邓肯氏新复极差(DMRT)法对实验数据进行分析，采用DPS对试验结果进行统计分析。按以下公式计算离体抑制效果：

表1 室内毒力测定试验各处理设计

1.2.2 田间药效试验方法

1.2.2.1 施药设计

此次田间药效试验设在海南省乐东县佛罗镇新丹村基地进行，历年芒果细菌性角斑病均有发生，初始发生为害。方法参照GB/T 1798098-2004试验准则进行[6]，试验根据要求设置，药剂处理如表2所示。无风或微风的傍晩黄昏时分，采用背负式电动喷雾器(新加坡利农PJB-16型)选择芒果果实和叶片为主要的喷施部位，药液不流下为准，且喷雾均匀。以不添加杀菌剂的处理为空白对照。

1.2.2.2 小区设置及施药时间

田间小区按随机区组排列，每个处理的小区面积为3株，均重复4次，在芒果幼果期开始施药，施药3次，每次间隔14d。施药时间分别为2021年1月7日、1月21日、2月4日。

表2 田间药效试验各处理设计

1.2.2.3 调查方法

药前果实尚未发病，故未作病情基数调查。末次施药后20d，即2月24日，对果实进行分级调查，共调查1次。每小区调查2株，每株按东西南北中5点取样，每点调查10个果。施药后第20天记录调查的总果实数及各级病果数，统计病情指数，计算药剂防治效果。

病果分级标准，0级：无病斑；1级：每果有病斑1～5个；3级：每果有病斑6～10个；5级：每果有病斑11～15个；7级：每果有病斑16～20个；9级：每果有病斑21个以上。

按以下公式分别计算病情指数和防治效果：

式中，CK1为对照区施药后病情指数；PT1为处理区施药后病情指数。

1.3 数据处理

室内毒力测定试验所得结果用邓肯氏新复极差(DMRT)法对实验数据进行分析，采用DPS对试验结果进行统计分析；田间药效试验所得数据使用Excel进行整理，并利用SPSS 21.0统计软件进行显著性分析，P<0.05表示差异显著。

2 结果与分析

2.1 结果

2.1.1 室内毒力测定试验结果

如表3所示，中生菌素对芒果细菌性角斑病菌有很好的抑制作用，其EC50值为3.33mg·L-1，最小抑菌浓度为25mg·L-1；抑制效果优于对照春雷霉素。

表3 中生菌素对芒果细菌性角斑病菌的室内防效

2.1.2 田间试验防效测定结果

田间试验结果表明，供试药剂5%中生菌素水剂在施药20d后对芒果细菌性角斑病具有一定的防治效果。其中，在最高稀释倍数300倍液时，相对防效最好，防治效果为66.35%，与对照药剂4%春雷霉素水剂相比无显著性差异。但其它浓度处理对芒果细菌性角斑病的防治效果较差，稀释倍数500倍液和1000倍液的防治效果均<60%，防效分别为58.27%、47.18%。

供试样品3%中生菌素可湿性粉剂在施药20d后对芒果细菌性角斑病具有较好的防治效果。当3%中生菌素可湿性粉剂稀释倍数在300倍液时，相对防效最佳，为69.98%。其中，稀释倍数在300倍液和500倍液时的防治效果与对照药剂4%春雷霉素水剂相比无显著性差异，2个稀释倍数均达到60%以上。

5%中生菌素水剂和3%中生菌素可湿性粉剂在稀释倍数均为300倍液时防治效果两者无显著性差异。但当稀释倍数在500倍液时，两者间的防治效果出现显著差异，由表4可知，5%中生菌素水剂500倍液较3%中生菌素可湿性粉剂500倍液时的防治效果高出2.59%。当稀释倍数在1000倍液时，5%中生菌素水剂和3%中生菌素可湿性粉剂防治效果较差，分别为47.18%、47.37%，相差0.19%。

表4 5%中生菌素对芒果细菌性角斑病的防效

2.2 结果分析

2.2.1 室内毒力测定

中生菌素对芒果细菌性角斑病的室内离体抑制效果良好，优于对照药剂春雷霉素，可用于田间试验。

2.2.2 田间防效试验

试验结果表明，3%中生菌素可湿性粉剂与5%中生菌素水剂在相同稀释倍数下对芒果细菌性角斑病的田间防治效果存在差异。其中，3%中生菌素可湿性粉剂的防治效果更佳，符合田间生产的需要，5%中生菌素水剂对芒果细菌性角斑病的田间防治效果总体防治效果不高。出现这种结果的原因可能是中生菌素水剂在长期贮藏过程中存在分解的情况，而粉剂在常温贮藏过程中性状良好。

2.3 安全性

田间试验过程中，试验药剂及对照药剂对芒果的叶片、枝条、果实均未产生药害。在本试验处理供试剂量下，亦对芒果无不良影响[7]。

3 讨论

以探究性试验旨在测试杀菌剂中生菌素对芒果细菌性角斑病的室内毒力测定，为田间应用提供数据支撑，探究结果表明，中生菌素对芒果细菌性角斑病的室内离体抑制效果良好，可用于田间试验。

本试验在室内探究性试验为支撑的基础上，验证了3%中生菌素可湿性粉剂对芒果细菌性角斑病的田间防治效果能达到70%以上，符合田间生产的需要，田间建议使用3%中生菌素可湿性粉剂防治芒果细菌性角斑病，有效稀释倍数为300～500倍液；而5%中生菌素水剂对芒果细菌性角斑病的田间防治效果总体不高，田间建议使用5%中生菌素水剂SC防治芒果细菌性角斑病，有效成分稀释倍数为300倍液。应在芒果细菌性角斑病发病前或初期开始施药防治，幼果期使用次数不应超过2次，间隔14d左右，注意均匀喷雾。此外，由于芒果叶片为难润湿型叶片，需要添加助剂以提高其润湿性能，增加药剂接触面积进而提高农药利用率。

随着我国芒果栽培面积的不断扩大，芒果细菌性角斑病危害频繁发生，严重打击果农的信心。芒果细菌性角斑病注重于提前预防病害的发生，在暴风雨或者台风雨过后，及时多次用药，能够在一定程度上控制病害的爆发流行[8]。中生菌素作为生物杀菌剂，无病害产生、安全性高、环保、防治效果好，是芒果生产上理想的推广药剂。本试验为应用中生菌素防治芒果细菌性黑斑病的生物防治提供了实践依据，具有一定的研究价值和应用前景。试验中只对中生菌素单独使用进行了病害的防效测定，下一步可将中生菌素与杀菌剂或者生物农药进行复配，探讨其增效作用，以期望获得更佳的安全高效防治药剂。