鱼类及暂养水中丁香酚等3种兽药残留量的检测与分析

◎ 方荣谦，林伟琦

（厦门市产品质量监督检验院，福建 厦门 361000）

厦门是我国著名的沿海旅游城市，海鲜等水产品特别有名。鲜活的水产品在运输中往往需要用到麻醉剂，受运输条件及成本影响，鲜活的水产品往往集中在有限的空间内，密度大，容易缺氧；且由于过度聚集，鱼类等水产品容易受到惊吓，加之运输途中颠簸的影响，常常引起鱼类等水产品剧烈挣扎，容易造成脱鳞等体表伤害，最终导致鱼患病而亡[1]。麻醉药品能够不同程度抑制鱼类等水产品的中枢神经，从而减缓新陈代谢，降低其应激反应，进而使其活动减缓，减少因群体躁动引起的体表损伤，减少运输死亡率，保证水产品在长途运输中的鲜活度，有效降低了运输成本[2]。近年来，随着餐饮业的迅速发展，麻醉药品在鱼产品中的应用水平有所提升，人们对水产品中麻醉药品的残留量及安全性也越来越重视[3]。在运输过程中，商家对麻醉剂的使用往往局限于他人的经验或者自己摸索，对使用剂量缺少一定的把控标准，容易造成麻醉剂的滥用。因此，对鱼及暂养水进行麻醉剂含量的检测很有必要。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

6500 液相色谱-三重四极杆质谱联用仪（美国AB SCIEX 公司）；GC 6890N-5975MSD 气相色谱-质谱联用仪（安捷伦公司）；氮气吹干仪（北京Lab Tech 公司）；高通量固相萃取装置[睿科仪器（厦门）有限公司]；Vortex 漩涡混匀器（德国 IKA 公司）；ME204 电子天平（梅特勒托利多仪器上海有限公司）；Milli Q 超纯水器（美国Millipore 公司）。

购买有证书的标准物质，均可溯源；水为Minipore超纯水机制备的一级水；有机溶剂甲醇、正己烷和乙腈等（色谱纯），购自默克股份两合公司；无水硫酸钠，国药集团化学试剂有限公司。

1.2 样品来源

鱼与暂养水样本源于市面，在对鱼进行抽样的同时也对相应的暂养水进行抽样。样本涉及福建省厦门市6 个市辖区餐饮环节和流通领域，共抽样100 批次，在餐饮环节抽检42 批次，其中大型餐馆4 批次，中型餐馆22 批次，小型餐馆16 批次；在流通环节抽检58 批次，其中，超市44 批次，农贸市场8 批次，批发市场2 批次，小食杂店4 批次。基本覆盖了市民能够购买和消费鲜活鱼类的经营场所。涉及淡水鱼及其暂养水样本共50 批次（各25 批次），海水鱼及其暂养水样本共50 批次（各25 批次），基本覆盖了市面上常见鱼的品种，使样本具备典型性。

1.3 实验方法

1.3.1 鱼类中麻醉剂的检测方法及判定标准

丁香酚：采用《水产品及水中丁香酚类化合物的测定》（BJS 201908）中检测方法。取2 g 样品于离心管中，加入5 g 无水硫酸钠，适当搅拌混匀，加入一颗陶瓷均质子和10 mL 乙腈，涡旋混匀1 min，超声提取15 min，离心，上清液转至另一50 mL 离心管中；残渣中再加入10 mL 乙腈重复提取一次，合并所有上清液；再加入5 mL 乙腈饱和的正己烷，涡旋振荡1 min，离心，弃去正己烷层；乙腈层加入50 µL 的DMSO，40 ℃氮吹至近干，用1 mL 乙腈溶解残余物，混匀，过滤膜后待测。

三卡因和苯唑卡因：称取1 ～5 g 的样品于50 mL聚乙烯离心管中，加入20 mL 甲醇，中速均质2 min，超声10 min，离心后取澄清液氮吹并用1 mL 甲醇水溶液溶解残余物，过滤膜后待测。

1.3.2 暂养水中3 种麻醉剂的检测方法

将水样用快速滤纸过滤，准确量取50 mL 的水样，调节pH 至3 左右，过HLB 固相萃取柱（该柱先用6 mL甲醇和6 mL 水进行预活化平衡），随后用10 mL 水进行淋洗，去杂，用泵抽干淋洗液，再用6 mL 甲醇进行洗脱，控制流速在4 mL·min-1左右，洗脱液转移到氮气吹干仪中，于40 ℃下吹近干，用1 mL 乙腈溶解残余物，过滤膜，待上机检测。

1.3.3 主要仪器参数

（1）色谱条件。色谱柱选择ShimNex UP C18高纯硅胶色谱柱（100 mm×2.1 mm，1.8 μm）。柱温：35 ℃；进样量：1 μL；流速：0.2 ～0.3 mL·min-1。流动相：甲酸水溶液（0.1%，V/V）（A）和甲酸乙腈溶液（0.1%，V/V）（B）。梯度洗脱程序见表1。

表1 梯度洗脱程序表

（2）质谱条件及参数。采用AB6500 液相色谱-三重四极杆质谱联用仪，检测模式：多反应选择监测模式。离子源温度，600 ℃；门帘气压（CUR），35 psi；Gas1，55 psi；Gas2，50 psi；离子喷射电压（IS），5 500 V；碰撞气压：medium。3 种麻醉剂的母离子、子离子及去簇电压（Declustering Potential，DP）、碰撞能（Collision Energy，CE）见表2。

表2 目标麻醉剂药物的串联质谱检测参数表

1.3.4 判定标准

丁香酚在国内是一种食品添加剂，作为香精香料可在食品中使用，但不得在水产品中使用[4]。三卡因，又名鱼安定或MS222，国内目前尚无法律或法规对水产品中的麻醉剂进行种类和剂量的规定，严格来说不允许在水产品中使用。即对丁香酚、三卡因和苯唑卡因的参考值应均列为“不得检出”。

2 结果与分析

100 批次样本中，有14 批次鱼样品检出丁香酚，1 批次暂养水（淡水鱼暂养水）检出三卡因，苯唑卡因未检出，丁香酚和三卡因的检出情况见表3。

表3 鱼及暂养水样本中麻醉剂的检出情况表

从表3 看出，有14 批次鱼样品检测到丁香酚，占比为28%，可见丁香酚作为麻醉剂在鱼产品中使用相当广泛。在14 批次检出丁香酚的鱼样品中，检测出淡水鱼6 批次，海水鱼8 批次，说明两种鱼使用麻醉剂丁香酚的数量并无显著差异，可以推测海水鱼和淡水鱼在运输过程中均不同程度地使用丁香酚作麻醉剂。在50 批次鱼样本中检测出14 批次丁香酚，而在相应的50 批次暂养水并未检出丁香酚。可以推断鱼体中的丁香酚极可能来源于运输过程中的水体；暂养水中未检出丁香酚，说明在超市、农贸市场等流通领域和餐饮店等餐饮领域，由于鱼即将被消费者买走或即将被宰杀做菜，因此无再添加麻醉剂的必要。

14 批次丁香酚的检出含量在0.03 ～7.00 mg·kg-1，由于丁香酚具有抗菌、抗氧化、防腐功能，应用广泛[5]，不仅可作为香料成分应用于口腔护理领域，还是我国规定允许使用的食用香料，可按正常生产需要适量使用，如丁香酚在熟肉制品中使用量为40 ～2 000 mg·kg-1，调味品中9.6 ～100.0 mg·kg-1等。本次鱼体内检出丁香酚含量≤7.0 mg·kg-1，对人体健康影响不大。

本次专项在50 批次暂养水中检测1 批次三卡因，而鱼体中并未检测出三卡因。如上所述，在暂养水中并无添加麻醉剂的必要，暂养水中的三卡因极可能是随着鱼一起残留的运输水体带入；鱼体中未检出三卡因，主要原因是三卡因一般是在鱼的器官中累积，残留在鱼肉中的很少，因此未检出。

本次专项在采样批次鱼及暂养水中均未检测到苯唑卡因。原因可能为使用苯唑卡因麻醉的鱼容易沉底而造成缺氧死亡，所以苯唑卡因作为鱼类麻醉剂应用较少。

3 结论

此次实验首次对鱼及暂养水中的丁香酚、三卡因和苯唑卡因3 种麻醉剂含量进行检测，发现多批次的鱼体内检测出含量不等的丁香酚，1 批次暂养水检测三卡因。可见麻醉剂在水产品运输过程中的应用是广泛存在的。研究发现，鱼及暂养水中麻醉剂的检出量并不高，大部分含量均低于丁香酚在食品中的使用含量，几乎对人体的健康不会造成影响。此次抽检的数据量较为有限，今后的抽检中则需要制定进一步的抽检方案，对鱼虾、蟹、贝类等其他水产品进行抽检，获取更多数据，更全面地了解风险点的来源，提出麻醉剂对人体健康影响程度及消除麻醉剂对人体影响的解决办法。