CD20、Ki-67 及P53 蛋白在弥漫大B 细胞淋巴瘤中的表达及其临床意义

蒋磊 周颖 王银花 许倩

近年来弥漫大B 细胞淋巴瘤治疗取得了较大进展，但仍有相当多的患者治疗反应不敏感，治疗后复发亦常有发生［1］。Ki-67、P53 均与弥漫大B 细胞淋巴瘤密切相关，而CD20 阴性弥漫大B 细胞淋巴瘤侵袭性较强且预后状况较差［2-4］。由此可见，CD20、Ki-67 及P53 均可能与弥漫大B 细胞淋巴瘤病情和预后相关。联合检测多个基因蛋白表达可更全面准确进行预后判断［5］。因此，本研究探讨CD20、Ki-67 及P53 蛋白在弥漫大B 细胞淋巴瘤中的表达水平，并分析其对临床病理特征及预后的判断价值，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

分析2018 年3 月～2022 年3 月苏州市第九人民医院血液科收治的86 例弥漫大B 细胞淋巴瘤患者的临床和病理学资料。其中男45 例，女41 例，平均年龄（53.68±9.85）岁，≥60 岁39 例，＜60 岁47 例，结外累及53 例，霍奇金淋巴瘤分期（staging of Hodgkin's lymphoma，Ann Arbor 分期）［6］为Ⅲ+Ⅳ分期患者55 例而Ⅰ+Ⅱ分期患者31 例，国际预后指数（international prognostic index，IPI 评分）［7］≥2 分39例而＜2 分47 例，东部肿瘤协作组体能状态（Eastern Cooperative Oncology Group performance status，ECOG PS 评分）［8］≥2 分35 例而＜2 分51 例，汉斯（Hans）免疫分型为生发中心B 细胞型（Germinal center B cell，GCB）分型［9］30 例而ABC 分型56 例，骨髓浸润48 例。

纳入标准：符合WHO（2016）关于淋巴组织肿瘤修订版相关分类标准［10］，淋巴结活检确诊为弥漫大B 细胞淋巴瘤。均为成年患者。确诊后生存期＞6 个月。检查完善且资料齐全。排除标准：合并坏死性淋巴炎、其他原发肿瘤疾病或转移性肿瘤疾病、传染性单核细胞增多症、髓外白血病或全身重要脏器严重疾患者。患者均知情同意且研究经本院伦理委员会审核批准。

1.2 研究方法

采用免疫组化法检测肿瘤石蜡组织中CD20、Ki-67 及P53 蛋白表达。将石蜡组织切制成4～5 μm 厚连续切片，80℃烤箱烤片半小时，二甲苯脱蜡和常规梯度酒精水化，柠檬酸缓冲液煮沸修复抗原，磷酸盐（PBS）缓冲液冲洗，3%过氧化氢阻断内源性过氧化物酶活性。向切片滴加一抗，在4℃恒温箱中孵育过夜，PBS 缓冲液冲洗，滴加通用型免疫球蛋白G 抗体-辣根过氧化物酶多聚体，37℃恒温箱中孵育15 min，PBS 缓冲液冲洗，行二氨基联苯胺试剂染色、苏木素轻度复染细胞核，PBS 缓冲液冲洗，梯度酒精脱水干燥，中性树胶封片。阴性对照为采用PBS 代替一抗。

由2 名以上病理学专家确定免疫组化病理结果。当肿瘤细胞内有定位清晰的棕黄色或棕褐色颗粒时判断为阳性，随机选取10 个视野（200×）观察，确定着色强度和阳性细胞数量占比，其中没有着色0 分，浅黄色1 分，棕黄色2分，棕褐色3 分；阳性细胞数占比＜25%1 分，25%～50% 2 分，＞50% 3 分，取着色强度和阳性细胞数量占比分值相乘分值结果，分值在0～1 分阴性（-），2～4 分弱阳性（+），5～8 分中等阳性（++），9～12 分强阳性（+++），中等阳性和强阳性均计入阳性表达［11］。

1.3 统计学方法

2 结果

2.1 弥漫大B 细胞淋巴瘤组织CD20、Ki-67 及P53 蛋白表达水平分析

CD20 蛋白表达定位于细胞膜，Ki-67、P53 蛋白表达均定位于细胞核。86 例弥漫大B 细胞淋巴瘤患者肿瘤石蜡组织中CD20、Ki-67 及P53 蛋白阳性表达率分别为38.37%（33/86）、82.56%（71/86）和80.23%（69/86）。见图1。

图1 弥漫大B 细胞淋巴瘤组织CD20、Ki-67 及P53 蛋白表达免疫组化检测结果（SP，×200）Figure 1 Immunohistochemical detection results of CD20，Ki-67 and P53 protein expression in diffuse large B-cell lymphoma tissue（SP，×200）

2.2 不同CD20、Ki-67 及P53 蛋白表达情况患者的临床病理参数和预后参数比较

CD20、Ki-67 及P53 蛋白阳性和阴性表达患者的Ann ArborⅢ+Ⅳ分期患者比例、IPI 评分≥2 分患者比例、ECOG PS 评分≥2 分患者比例、Hans GCB分型患者比例、骨髓浸润发生率比较差异均有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 不同CD20、Ki-67 及P53 蛋白表达情况患者的临床病理参数和预后参数比较［n（%）］Table 1 Comparison of clinicopathological parameters and prognostic parameters in patients with different CD20，Ki-67 and P53 protein expressions［n（%）］

2.3 弥漫大B 细胞淋巴瘤患者CD20、Ki-67 及P53 蛋白阳性表达状况的危险因素分析

弥漫大B 细胞淋巴瘤组织CD20、Ki-67 和P53蛋白表达均可影响其IPI 评分、ECOG PS 评分、Hans 分型、骨髓浸润状况（P＜0.05）。见表2 和表3。

表2 变量赋值Table 2 Assignment of arguments

表3 弥漫大B 细胞淋巴瘤患者CD20、Ki-67 及P53 蛋白表达状况的危险因素分析Table 3 Analysis of risk factors for expression of CD20，Ki-67 and p53 protein of patients with diffuse large B-cell lymphoma

2.4 弥漫大B 细胞淋巴瘤组织CD20、Ki-67 及P53 蛋白表达情况对其临床病理和预后状况的判断效能

弥漫大B 细胞淋巴瘤组织CD20、Ki-67 及P53蛋白表达情况对其IPI 评分、ECOG PS 评分、Hans分型、骨髓浸润等的判断效能均良好，以三者联合判断效能最佳。见表4。

表4 弥漫大B 细胞淋巴瘤组织CD20、Ki-67 及P53 蛋白表达情况对其临床病理和预后状况的判断效能Table 4 The efficacy of CD20，Ki-67 and P53 protein expression in diffuse large B-cell lymphoma tissue for evaluating its clinicopathological and prognostic status

3 讨论

弥漫大B 细胞淋巴瘤约占非霍奇金淋巴瘤的32.5%，具有侵袭性强的特点，可侵犯患者全身多个部位，患者预后情况差［12］。对弥漫大B 细胞淋巴瘤进行及时有效诊治对改善其预后的重要意义，目前其治疗以免疫化疗为主，但有相当一部分患者肿瘤治疗困难且可出现疾病复发情况的发生［13］。因此，改善弥漫大B 细胞淋巴瘤疗效和预后仍是目前需解决的重要医疗问题。弥漫大B 细胞淋巴瘤的发生发展涉及多种机制和相关基因蛋白的异常表达，目前已发现多种基因蛋白参与其中［14］。通过相关因子检测早期确定肿瘤病情恶化或不良预后风险，可为其治疗方案调控优化和靶向治疗提供参考。

Ki-67 是与多种肿瘤密切相关的核蛋白，可通过核糖体RNA 的转录影响细胞增殖活跃度，而张静等［15］的研究免疫组化法检测弥漫大B 细胞淋巴瘤患者癌组织和癌旁组织的Ki-67 蛋白的表达情况，结果表明其在弥漫大B 细胞淋巴瘤癌组织中异常高表达，且其癌组织中Ki-67 蛋白高表达甚至可作为患者不良预后的独立危险因素。而本研究中弥漫大B 细胞淋巴瘤癌组织中的Ki-67 蛋白阳性表达率为82.56%，与张静等［15］的研究中的90.14%差异不大，进一步确定了Ki-67 蛋白表达在弥漫大B 细胞淋巴瘤中的高表达。本研究中，Ki-67蛋白阳性表达患者的Ann ArborⅢ+Ⅳ分期患者比例、IPI 评分≥2 分患者比例、ECOG PS 评分≥2 分患者比例、Hans GCB 分型患者比例、骨髓浸润发生率均高于其相应蛋白阴性表达患者，弥漫大B细胞淋巴瘤组织Ki-67 蛋白表达可影响其IPI 评分、ECOG PS 评分、Hans 分型、骨髓浸润状况，而诊断性试验四格表分析肯定了弥漫大B 细胞淋巴瘤组织Ki-67 蛋白表达情况对其IPI 评分、ECOG PS 评分、Hans 分型、骨髓浸润等的判断效能。

P53 基因调控细胞周期组织、衰老、凋亡等过程，且弥漫大B 细胞淋巴瘤中P53 蛋白阳性表达为其独立预后因素，可作为其预后评估指标［16］。本研究中弥漫大B 细胞淋巴瘤组织中P53 蛋白阳性表达率较高，且蛋白阳性表达和阴性患者的Ann ArborⅢ+Ⅳ分期患者比例、IPI 评分≥2 分患者比例、ECOG PS 评分≥2 分患者比例、Hans GCB 分型患者比例、骨髓浸润发生率有较大差异，弥漫大B细胞淋巴瘤组织P53 蛋白表达可影响其IPI 评分、ECOG PS 评分、Hans 分型、骨髓浸润状况且P53 蛋白表达对其IPI 评分、ECOG PS 评分、Hans 分型、骨髓浸润等具有较好的判断效能。

CD20 阴性的弥漫大B 细胞淋巴瘤临床较少见，但是CD20 阴性的弥漫大B 细胞淋巴瘤具有更强的肿瘤侵袭性，患者预后情况也更差［17］。本研究中，弥漫大B 细胞淋巴瘤组织CD20 阴性表达患者比例为38.37%，且相对于CD20 阳性患者，CD20阴性患者的Ann ArborⅢ+Ⅳ分期患者比例、IPI 评分≥2 分患者比例、ECOG PS 评分≥2 分患者比例、Hans GCB 分型患者比例、骨髓浸润发生率均更高，弥漫大B 细胞淋巴瘤组织CD20 蛋白表达可影响其IPI 评分、ECOG PS 评分、Hans 分型、骨髓浸润状况，且对其IPI 评分、ECOG PS 评分、Hans 分型、骨髓浸润等的判断效能均良好，CD20、Ki-67 及P53 蛋白表达三者联合判断弥漫大B 细胞淋巴瘤临床病理和预后状况的效能最佳，提示CD20、Ki-67 及P53 蛋白联合检测在弥漫大B 细胞淋巴瘤中具有更佳的应用价值，可更好地指导弥漫大B细胞淋巴瘤诊治，从而改善疗效和预后。

综上所述，在弥漫大B 细胞淋巴瘤中Ki-67 及P53 蛋白阳性水平较高而CD20 蛋白阴性表达，三者与患者临床病理和预后状况均密切相关且联合应用可更好判断其临床病理和预后状况，但本研究尚不能确定三者可作为弥漫大B 细胞淋巴瘤靶向干预基因，仍需更多的基因干预实验确定其可能性。