瑶药材犁头草质量标准研究

何瑞婷，朱华，黎理，张淼，谢凤凤，黄飘玲，杨雯琪，董雪静

犁头草为堇菜科堇菜属植物长萼堇菜Viola in⁃conspicuaBlume.的新鲜或干燥全草，其药用始载于《履巉岩本草》[1]，生于林缘、山坡草地、田边及溪旁等处，主要分布在浙江、江西、湖北、湖南、广东、广西等地[2]。瑶药名音译为“穷雷随咪”，瑶医认为其具有清热解毒、散瘀消肿的功效，用于治疗淋浊、黄疸、阑尾炎、结膜炎、疔疮、痈疖肿毒等[3]。犁头草在我国多个省份都有临床应用，在《广西中药志》[4]、《福建药物志》[5]、《广东中药志》[6]、《贵州草药》[7]等书籍中均有记载。犁头草作为瑶族、壮族常用药材，缺乏相关质量标准研究，不能有效控制其质量，因此本研究对犁头草药材进行了较为系统的质量研究，包括性状鉴别、显微鉴别，测定水分、灰分、浸出物含量，通过薄层色谱法进行定性研究，为犁头草品种鉴定和质量评价提供依据，为其质量标准的制定提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 仪器 Ni-U型系统显微镜及DS-Ri2型成像系统（日本Nikon公司）；HistoCore Arcadia C型石蜡包埋机、RM2235型轮转式切片机、HI1210型摊片机（上海徕卡公司）；SQP型及BSA224S型电子天平（德国Sartorius公司）；SX2-4-10N型箱式电阻炉（上海一恒科技有限公司）。

1.1.2 试药与试剂 夏佛塔苷对照品（纯度≥98%，批号RP180714，购自成都麦德生科技有限公司）；硅胶H板（青岛海洋化工有限公司）；甲醇、乙醇、乙酸乙酯、甲酸（分析纯，国药集团化学试剂有限公司）；其余试剂均为分析纯；水为纯化水。

犁头草药材采自广西各地，详细信息见表1，经广西中医药大学韦松基教授鉴定为堇菜科植物长萼董菜Viola inconspicuaBlume.。样品粉碎后过2号筛，备用。

表1 犁头草样品信息表

1.2 实验方法

1.2.1 药材性状及显微鉴别 通过肉眼、放大镜或解剖镜，观察犁头草干燥全草的根、茎、叶等部位，按形状、大小、表面、色泽、纹理、质地、断面、气、味等依次描述其性状特征；采用石蜡切片、表面制片、粉末制片法，观察并描述犁头草根横切面、叶横切面及表面、全草粉末的特征[8]。

1.2.2 薄层色谱鉴别 取犁头草药材粉末适量，照《中华人民共和国药典》2015年版四部通则0502薄层色谱法试验，供试品色谱与对照品色谱应在相应位置显相同颜色斑点[9]。

1.2.3 水分、灰分、浸出物含量测定[10]取犁头草药材粉末适量，精密称定，照水分测定法（中国药典2015年版四部通则0832第二法烘干法）测定样品含水量；照灰分测定法（中国药典2015年版四部通则2302）测定样品总灰分及酸不溶性灰分；照浸出物测定法（中国药典2015年版四部通则2201热浸法），以纯水为溶剂，测定样品浸出物含量。依据12批药材的测定结果，并从实际应用出发，拟定检查限度。

2 结果

2.1 药材性状 本品常皱缩成团。根圆柱形，多弯曲，表面有皱纹，土黄色。根状茎短或无，可见叶柄残基。叶基生，呈莲座状，黄棕色至灰绿色；展开后叶片呈三角形、三角形卵状或戟形，基部宽心形，先端渐尖，边缘具钝锯齿，两面无毛或具短绒毛；叶柄细，具不明显狭翅；托叶3/4与叶柄合生，分离部分披针形，通常有褐色锈点。萼片卵状披针形或披针形，基部附属物伸长，长2～3 mm，末端具缺刻状浅齿。蒴果椭圆形或三角状裂开，内有种子多数，土黄色。气微，味辛、微苦。见图1。

图1 犁头草药材图

2.2 显微特征

2.2.1 根横切面 类圆形。木栓细胞1～10列，长方形，常破碎，微木化。皮层占切面二分之一，细胞类圆形、类方形，有的含草酸钙簇晶，散有黏液细胞。维管束外韧型，韧皮部狭窄；木质部导管类圆形，单个散在或数个相聚，呈切向排列。见图2。

图2 犁头草根横切面

2.2.2 叶横切面 上表皮细胞1列，类圆形、类方形，细胞大小不等，排列紧密；下表皮细胞1列，较小；上下表皮均可见气孔。栅栏细胞1～2列，呈圆柱状，不通过主脉；海绵组织占较大部分，细胞较大，排列疏松。主脉维管束外韧型。黏液细胞类圆形，多见。薄壁细胞含草酸钙簇晶。见图3。

图3 犁头草叶横切面

2.2.3 叶表面片 上表面表皮细胞垂周壁较平直；下表面表皮细胞垂周壁波状弯曲，有的连珠状增厚，表面有明显角质纹理；上下表面均有气孔，为直轴式、平轴式。见图4。

图4 犁头草叶表面片：A为上表皮；B为下表皮

2.2.4 粉末 全草粉末棕黄色。草酸钙簇晶，直径17～53 μm，棱角较尖或钝尖。非腺毛单细胞，偶见多细胞，长174～330 μm，表面具角质纹理。黏液细胞类圆形或椭圆形。纤维成束或散在，壁厚，孔沟明显。导管为螺纹、网纹、具缘纹孔。淀粉粒甚多，常成团，单粒类圆形，直径2～5 μm，脐点点状、裂缝状或星状；复粒由2～9分粒组成。石细胞呈类圆形、类方形，壁厚，少见。种皮厚壁细胞成片，细胞细长，纹孔明显。见图5。

图5 犁头草粉末显微图

2.3 薄层色谱鉴别

2.3.1 对照品溶液的制备 取夏佛塔苷对照品适量，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。

2.3.2 供试品溶液的制备 取犁头草粉末0.5 g，加70%甲醇10 mL，超声处理30 min，冷却，滤过，续滤液作为供试品溶液。

2.3.3 薄层色谱条件及结果 吸取上述溶液各1 μL，点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-丙酮-甲酸-水（4∶7∶1∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以3%三氯化铝乙醇溶液，晾干，在105℃加热5 min，置紫外光灯（365 nm）下检视。结果表明，供试品色谱与对照品色谱在相应位置显相同颜色的荧光斑点。见图6。

图6 犁头草及夏佛塔苷的薄层色谱图

2.4 水分、灰分、浸出物含量测定12批犁头草药材水分、总灰分及酸不溶性灰分、浸出物的测定结果详见表2。结果表明，药材水分含量在8.72%～11.61%之间；总灰分在10.03%～18.31%之间，酸不溶性灰分在1.17%～5.91%之间；水溶性浸出物含量在29.06%～37.16%之间。从实际应用的角度考虑，初步将犁头草水分拟定为不得过14.0%；总灰分拟定为不得过20.0%，酸不溶性灰分拟定为不得过8.0%；水溶性浸出物含量拟定为不少于27.0%。

表2 犁头草水分、灰分和浸出物测定结果/%

3 讨论

薄层色谱鉴别考察了供试品溶液的制备方法，发现最佳提取溶剂是70%甲醇，取样量为0.5 g、溶剂用量为10 mL时斑点较清晰明显；考察了甲苯-乙酸乙酯-甲酸（5∶4∶1）、氯仿-甲醇-冰醋酸（10∶1∶0.5）、丙酮-氯仿-甲醇-甲酸（1∶10∶2∶0.5）、乙酸乙酯-甲酸-水（10∶1∶1）、氯仿-丙酮-甲酸-水（4∶7∶1∶1）等展开系统，经反复试验最终确定氯仿-丙酮-甲酸-水（4∶7∶1∶1）为展开系统；考察了不同点样量（1、2、5、10 μL），结果发现点样1 μL时，斑点较清晰；考察了条带状、圆点状点样方式，发现圆点状点样效果较好；此外，还考察了不同温湿度、不同厂家及不同类型预制板对展开的影响，发现各条件对展开结果影响不大，方法耐用性较好[11]。

根据药材样品的测定结果，考虑到药材产地在南方，而南方气候较湿润，因此，将犁头草药材水分拟定为不得过14.0%。总灰分拟定为不得过20.0%，酸不溶性灰分拟定为不得过8.0%，其中LTC-2及LTC-8两个批次的样品总灰分及酸不溶性灰分较高，猜测是由于药材采自路边、田间，泥沙灰尘过多。浸出物含量拟定为不少于27.0%，经过考察不同方法及不同溶剂，发现犁头草药材水溶性浸出物高于醇溶性浸出物，热浸法含量高于冷浸法，故采用热浸法、以纯水作为提取溶剂，这与临床水煎服相吻合。

本研究运用性状鉴别法、显微鉴别法、薄层色谱法对收集到的12批瑶药犁头草药材进行定性鉴别，并测定样品水分、灰分、浸出物含量，初步建立了犁头草质量标准，可用于其质量控制。