规模化种猪场口蹄疫病免疫净化及效果评估

刘 威，单爱婷，袁芳艳，周丹娜，赵海忠，刘泽文，高 婷，郭 锐，杨克礼，孙 裴*，田永祥*

(1.湖北省农业科学院 畜牧兽医研究所 农业农村部兽用药物与诊断技术湖北科学观测实验站，湖北 武汉 430064；2.安徽农业大学 动物科技学院，安徽 合肥 230036)

口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的偶蹄动物的一种急性、热性、高度接触性传染病[1]，该病传播途径多、速度快[2]，曾多次在世界范围内暴发流行，造成巨大经济损失[3]，世界动物卫生组织(OIE)将其列为法定通报性动物疫病[4]，我国将其列为一类动物疫病[5]。亚洲地区是口蹄疫重疫区[6-9]，O型口蹄疫为全世界流行最广的一个血清型，也是我国猪口蹄疫的主要流行血清型[10]。中国邻国众多且是养猪大国，防控口蹄疫不仅对本国养猪业发展起关键作用[11-12]，而且对全球口蹄疫防控有重要意义[13]。`

《全国兽医卫生事业发展规划(2016—2020年)》中明确将口蹄疫列为有计划控制并净化的重点动物病种之一。“十三五”期间，为推动口蹄疫病的净化工作，我国启动了“种畜场口蹄疫净化技术集成与示范”国家重点研发计划项目，旨在应用综合集成的疫苗免疫、检测、监测、淘汰及生物安全等技术，构筑种猪场口蹄疫综合防控体系，建立口蹄疫净化种猪示范场，以提升我国规模化养猪场动物疫病防控水平，促进畜禽养殖业的持续健康发展。本研究将对参与净化的部分规模化种猪场的净化效果和成效进行评估。

1 材料与方法

1.1 基因组序列与数据库样品来源于湖北、安徽地区部分规模化种猪场，样本随机采集。其中生产母猪抗凝血共2 405份、后备猪群抗凝血1 710份、种公猪抗凝血810份、保育猪抗凝血1 360份、育肥猪抗凝血1 860份、唾液样本23份、扁桃体样本40份、环境样本15份。

1.2 试剂猪O型口蹄疫病毒ELISA抗体检测试剂盒、猪A型口蹄疫病毒ELISA抗体检测试剂盒、猪口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC-ELISA抗体检测试剂盒均购自武汉科前生物股份有限公司；猪口蹄疫O型、亚洲1型、A型三价灭活疫苗和猪口蹄疫O型、A型二价灭活疫苗均购自金宇保灵生物药品有限公司。

1.3 本底调查本底调查于2016年进行，旨在调查示范场口蹄疫流行状况、疫苗使用及免疫程序、生物安全措施(人流、物流、车流、生物安全通道及消洗、隔离等)，评价疫苗免疫效果、野毒感染状况等，查找风险因素。公猪、生产母猪、后备母猪全群采集血样，保育和育肥猪随机抽检，采样计划详见表1。

表1 本底调查口蹄疫疫苗O型抗体和非结构蛋白3ABC抗体检测计划

1.4 监测采样情况2017—2020年，为监测疫苗免疫后O型抗体以及非结构蛋白3ABC抗体阳性率，每年分2次，对公猪、后备母猪、生产母猪、保育和育肥猪进行随机抽检，监测计划详见表2。

表2 种猪场口蹄疫疫苗O型抗体和非结构蛋白3ABC抗体监测计划

1.5 口蹄疫净化检测技术扁桃体、唾液、环境样本送湖北动物疫病控制中心、华中农业大学动物疫病诊断中心进行病原学检测；采用猪O型口蹄疫病毒ELISA抗体检测试剂盒检测猪口蹄疫O型抗体；采用猪A型口蹄疫病毒ELISA抗体检测试剂盒检测猪口蹄疫A型抗体；采用猪口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC-ELISA抗体检测方法检测猪口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC抗体。

1.6 阳性动物的处理经济价值较低的3ABC阳性猪直接淘汰处理。经济价值较高的3ABC阳性猪，隔离饲养，并间隔4周后第2次采样检测，如3ABC阴性，分群饲养，跟踪观察，适时淘汰；如3ABC阳性，淘汰处理，并采集淋巴结，送兰州兽医研究所确诊。淘汰猪按国家有关规定处理。

2 结果

2.1 本底调查2016年对种猪场进行了本底调查，共对2 514份血清进行了O型抗体和3ABC抗体ELISA检测，不同猪群检测结果见图1，2。结果显示：湖北和安徽某种猪场公猪、生产母猪和后备母猪O型抗体阳性率均保持在85%以上，而保育猪、育肥猪O型抗体阳性率较低；安徽某种猪场后备母猪、保育猪和育肥猪3ABC抗体阳性率较高，湖北某种猪场3ABC抗体阳性率为0.0%。2个种猪场均建立了较为完善的人流、物流、车流、生物安全通道及消洗、隔离等生物安全措施。

图1 2016年湖北某种猪场O型抗体和3ABC抗体ELISA检测结果

图2 2016年安徽某种猪场O型抗体和3ABC抗体ELISA检测结果

2.2 免疫程序调整湖北某种猪场使用猪口蹄疫O型、亚洲1型、A型三价灭活疫苗，仔猪50日龄首免，90日龄二免，公、母猪每年免疫2次，后备猪配种前免疫2次。通过母源抗体消长规律研究，发现仔猪母源抗体在30～50日龄急剧下降(图3)，故调整免疫程序将首免时间从50日龄调整为35日龄。2019年后使用金宇公司的猪口蹄疫O型、A型二价灭活疫苗。

图3 湖北某种猪场母源抗体消长检测结果

安徽某种猪场保育、育肥猪使用政府采购的口蹄疫O型单价苗，其他猪群使用金宇公司的猪口蹄疫O型、亚洲1型、A型三价灭活苗。根据本底调查结果，猪场保育、育肥猪O型抗体阳性率较低，故调整免疫程序将疫苗改为金宇保灵生物药品有限公司的猪口蹄疫O型、亚洲1型、A型三价灭活疫苗。2018年后使用金宇公司的猪口蹄疫O型、A型二价灭活疫苗。

2.3 O型抗体监测2016—2020年，种猪场共检测O型抗体8 145份。湖北某种猪场O型抗体阳性率从89.7%提升到93.0%，安徽某种猪场O型抗体阳性率从81.3%提升到94.3%，其中保育猪和育肥猪O型抗体阳性率提升显著(保育猪从77.6%提升到92.0%，育肥猪从69.9%提升到95.5%)(图4，5)。

图4 湖北某种猪场O型抗体监测结果

2.4 3ABC抗体监测2016—2020年，种猪场共检测3ABC抗体8 145份。湖北某种猪场3ABC抗体阳性率始终为0.0%，安徽某种猪场3ABC抗体由阳性逐步转为阴性(图6)。

图6 安徽某种猪场3ABC抗体监测结果

2.5 A型抗体抽检2020年，种猪场共抽检A型抗体450份。湖北某种猪场A型抗体阳性率为90.67%，安徽某种猪场A型抗体阳性率为93.33%(表3)。

表3 种猪场A型抗体抽检结果

2.6 病原学检测采集猪唾液、扁桃体、环境样品送湖北省动物疫病预防控制中心和华中农业大学动物疫病诊断中心进行病原学检测，检测结果见表4。从结果可以看出，本试验猪群无野毒感染及传播，猪场内无病毒传播。

图5 安徽某种猪场O型抗体监测结果

表4 病原学检测结果

3 讨论

动物疫病净化是在特定场群或区域消灭某种或某些动物疫病，是实现动物疫病的源头控制，推动无疫区建设的重要基础，也是保障公共卫生安全的重要内容[14]。为实现净化目的，种畜场在开展净化之前，应根据相关规定要求，完善生物安全防护设施设备建设，强化饲养管理，建立严格的生物安全措施(包括消毒、生物安全通道管理、人员管理、物流管理、隔离措施等)。种猪场动物疫病净化需要经历3个阶段，即本底调查阶段、免疫控制阶段和净化维持阶段。本底调查主要是了解猪场生产、疫病流行、疫苗免疫效果、生物安全现状、分析疫病相关风险因素，便于查漏补缺，制定“一场一册”净化方案。免疫控制阶段主要是通过免疫、监测、分群和淘汰等措施，建立健康阴性群。监测净化阶段必须严格执行阳性动物淘汰策略，实现彻底的清群，并逐步扩大净化效果。净化维持阶段主要依靠常规和维持性监测以及健全的生物安全体系，防止输入性感染，确保猪场免疫无疫或非免疫无疫。

本研究中口蹄疫净化工作分别在安徽3ABC抗体阳性场和湖北3ABC抗体阴性场开展，通过5年的净化实施，安徽某种猪场3ABC抗体阳性率由7.9% 降至0.0%，O型抗体阳性率从81.3%提升到94.3%，湖北某种猪场3ABC抗体阳性率始终维持在0.0%，O型抗体阳性率从89.7%提升到93.0%，提示本试验中猪场口蹄疫净化方案是有效和可行的。安徽某种猪场在调整免疫程序后，保育猪和育肥猪O型抗体阳性率提升显著(保育猪从77.6%提升到92.0%，育肥猪从69.9%提升到95.5%)。湖北某种猪场在完成母源抗体消长规律研究后，将仔猪的首免时间从50日龄提前至35日龄，调整后保育猪O型抗体阳性率从76.9%提升到91.7%，育肥猪从82.0% 提升到92.9%。综上所述，本研究所评估猪场的口蹄疫净化效果显著，为我国开展种猪场口蹄疫净化提供了一定的经验。