曲普瑞林对初产母猪定时输精效果的影响

2022-01-20王龙岩秦玉圣白佳桦许晓玲洪秦王宋玉清李俊杰

中国畜牧杂志 2022年1期

王龙岩，秦玉圣，于博，白佳桦，许晓玲，洪秦王，宋玉清，刘彦，李俊杰

（1.河北农业大学动物科技学院，河北保定 071000；2.北京市农林科学院畜牧兽医研究所，北京 100097；3.北京农学院动物科技学院，北京 102206；4.河北省种猪繁育技术创新中心，河北张家口 075800）

规模化猪场中初产母猪占比达20%以上，其利用率和繁殖性能决定着整个猪群的生产能力。但初产母猪在哺乳期间因泌乳导致蛋白质和能量负平衡，会引起体重和背膘急剧降低、生殖激素分泌紊乱、断奶-发情间隔延长、发情持续期缩短、排卵数量减少、胚胎存活率降低等一系列影响繁殖性能的问题。此外，也有高达60%的初产母猪在断奶后不能自然发情，降低了母猪利用率，增加生产成本。定时输精技术利用外源生殖激素对母猪发情、排卵进行调控，并在预定时间配种，该技术不仅能提高母猪利用率和繁殖性能，而且能使猪场实现全进全出的批次化生产，有助于猪群的生物安全防控。目前，国内母猪定时输精程序中诱导同步排卵激素为戈那瑞林（Gonadotropin-Releasing Hormone，GnRH）。与GnRH相比，GnRH类似物具有稳定性强、半衰期长等优点，国外研究人员在诱导母猪同步排卵方面已采用曲普瑞林、布舍瑞林和戈舍瑞林等GnRH类似物做了一些研究，证实母猪配种前6～10 h使用曲普瑞林可有效刺激促黄体素（Luteotropic Hormone，LH）浓度升高，提高母猪排卵集中度；Knox等研究表明，注射200 µg曲普瑞林可使经产母猪24 h内排卵率达88%；Knox等将曲普瑞林制成阴道凝胶（Triptorelin Gel，TG），发现凝胶浓度为1.2%时，诱导排卵集中度效果最好，LH峰值更高，并且对母猪繁殖性能无不良影响。为提高初产母猪利用率，本研究采用曲普瑞林诱导初产母猪同步排卵并实施定时输精，探究其应用效果，为曲普瑞林在生猪生产中的应用提供参考。

1 材料与方法

1.1 实验动物实验在河北省某规模化猪场进行，随机选取81头健康、产仔性能相近的大白×长白二元杂交断奶初产母猪，参与试验的母猪依据猪场饲喂标准进行饲喂，自由饮水。

1.2 实验药品戈那瑞林（宁波三生生物科技有限公司）、孕马血清促性腺激素（PMSG，宁波三生生物科技有限公司）、曲普瑞林（陕西西安恒宇医药有限公司）、生理盐水（河北仁厚商贸有限公司）。

1.3 实验设计母猪哺乳期为21d，断奶当天记为“第0天”，断奶时间为16:00。对照组（n=17头）：母猪断奶后，每天08:00、16:00驱赶性欲良好的公猪进行发情鉴定，如上午发情，则当天下午、第2天上午进行深部输精；如下午发情，则第2天上午、下午进行深部输精。生理盐水组（n=18头）、戈那瑞林组（n=20头）和曲普瑞林组（n=26头）母猪分别在断奶后24 h肌肉注射1 000 IU PMSG，间隔72 h后分别肌肉注射生理盐水2 mL、戈那瑞林100 µg、曲普瑞林200 µg，间隔24 h和40 h分别进行深部输精。

1.4 输精配种所用精液来自猪场自养杜洛克公猪。输精前对精液品质进行检查，精子活率≥70%、畸形精子率≤18%方可使用。

1.5 卵泡发育检测从各组中随机选择3头母猪，使用B超仪（HS-1600，日本）对卵泡发育进行监测，其中，断奶后第1～3天每天09:30用B超监测1次；第4～6天每天09:30、15:30、23:30分别进行1次B超监测。

1.6 血液采集与检测从各组中随机选择3头母猪，分别在断奶后第4天的15:00、17:30、18:30、19:30、20:30、21:30、22:30，第5天的08:00、17:00，第6天的17:00、第7 天的17:00，采用真空促凝采血管经耳缘静脉采血5 mL，然后在室温、4 000 r/min离心25 min，吸取血清并分装至1.5 mL离心管，做好标记后于-20℃冰箱冷冻保存备用。血清雌激素（E）、促黄体素（LH）浓度委托北方生物技术有限公司采用放射免疫法测定。

1.7 繁殖性能统计方法繁殖指标的计算参照如下公式：

发情率=发情母猪头数/参繁母猪头数×100%

参繁配种率=配种母猪头数/参繁母猪头数×100%

批次妊娠率=妊娠母猪头数/参繁母猪头数×100%

批次分娩率=分娩母猪头数/参繁母猪头数×100%

仔猪指数=窝产活仔数×批次妊娠率×100%[16]

1.8 统计分析实验数据使用 SPSS 22.0 进行单因素方差分析，采用 Duncan′s 进行多重比较和显著性分析，结果使用平均值±标准差表示；发情率、配种率、妊娠率等指标采用卡方检验，＜0.01表示差异极显著，＜0.05表示差异显著，＞0.05表示差异不显著。

2 结果与分析

2.1 曲普瑞林对断奶7 d内母猪发情率的影响由表1可知，曲普瑞林组母猪断奶7 d内发情率最高，但4组间差异不显著。

表1 曲普瑞林对断奶7 d内母猪发情率的影响 %

2.2 曲普瑞林对初产母猪卵泡发育的影响由图1可知，断奶后1～4天各组母猪卵泡直径随断奶后时间的延长而增加，但曲普瑞林组母猪卵泡直径在第4天达到最大（8 mm），高于其他3组（＜0.05），随后开始减小，并于第5天低于其他3组（＜0.05）。其他3组母猪卵泡直径在第5天达到最大，随后开始减小。

图1 断奶母猪卵泡直径随时间的变化

2.3 曲普瑞林对初产母猪主要生殖激素浓度的影响由图2可知，随着诱导同步排卵药物处理后的时间变化，戈那瑞林组和曲普瑞林组母猪血浆中E浓度在注射后2 h分别达到峰值，浓度为54.77、51.39 ng/mL，随后逐渐降低。LH浓度逐渐升高，戈那瑞林组和曲普瑞林组峰值分别出现在注射后4 h、5 h，浓度为10.22、10.26 ng/mL，两组间无显著差异。

图2 激素浓度随诱导同步排卵处理后时间的变化

2.4 曲普瑞林对初产母猪繁殖性能的影响由表2可知，生理盐水组、布舍瑞林组、曲普瑞林组母猪的参繁配种率高于对照组（＜0.01）；曲普瑞林组母猪的批次妊娠率高于对照组25.79个百分点（＞0.05）；曲普瑞林组母猪窝产总仔数高于生理盐水组（＜0.01），窝产活仔数为10.13头，与生理盐水组相比差异不显著。曲普瑞林组每100头母猪提供的活仔数（仔猪指数）为857头，较生理盐水组提高144头（＞0.05）。

表2 不同处理组母猪的繁殖性能

3 讨论

初产母猪的利用率和繁殖性能决定整个猪群生产能力和经济效益，减少初产母猪综合症的发生对提高母猪利用率及延长使用年限至关重要。研究表明，基于PMSG诱导母猪卵泡发育同步化、GnRH诱导卵泡排卵同步化的定时输精技术能够提高母猪断奶7 d内的发情率、配种率。

在母猪发情周期中，卵泡期通常持续5～7 d，卵泡生长发育受FSH和LH调节。PMSG属于糖蛋白类激素，同时具有LH和FSH活性，但以FSH活性为主，对卵泡发育具有良好的促进作用。研究表明PMSG可使母猪卵泡生长至3～4 mm，若要进一步发育，则需LH刺激。随着卵泡的发育，颗粒细胞合成分泌E增加，母猪在公猪刺激下表现静立发情。本研究中，与其他各组相比，曲普瑞林组母猪卵泡发育较快，E水平升高，发情率高于自然发情母猪。Knox等研究表明母猪断奶后96 h阴道投药曲普瑞林100 µg，可提高母猪发情率。Robert等研究发现通过肌肉注射100 µg曲普瑞林能够诱导后备母猪出现LH峰。本研究中，曲普瑞林组和戈那瑞林组母猪在促排卵药物处理后4～5 h有相对明显的LH峰，峰值浓度分别为10.26 ng/mL和10.22 ng/mL。Stewart等研究发现使用曲普瑞林处理母猪5 h后出现LH峰，峰值浓度为3.3 ng/mL，与本研究结果相比，使用曲普瑞林处理母猪后出现LH峰值时间接近，但峰值浓度差异较大，可能是国内外检测方法及灵敏度不同引起。

影响定时输精效果的关键因素之一是GnRH注射时间，注射过早虽然可诱导LH峰出现，但此时卵泡发育不成熟，会诱导排卵失败；注射太晚，母猪内源性LH峰已经出现，则不能发挥诱导母猪集中同步排卵的作用。大量研究证实，断奶后约96 h注射GnRH能够诱导母猪集中排卵，并经定时输精后可维持母猪正常繁殖性能。Knox等研究发现200 μg曲普瑞林TG置于母猪阴道可诱导81%的母猪发生排卵，且在断奶后96 h处理效果最好。虽然曲普瑞林凝胶阴道给药能够降低肌肉注射给药对母猪造成的应激刺激，但在规模化猪场批次配种母猪数量较多时，TG给药诱导排卵的方式效率较低，不仅工作量大而且可能引起生殖道感染。本研究在初产母猪断奶后96 h，颈部肌肉注射200 μg曲普瑞林，母猪发情率高于自然发情母猪。本实验中，曲普瑞林组母猪卵泡直径在第4天达到最大，随后发生排卵，卵泡直径减小；戈那瑞林组母猪卵泡直径则在第5天开始减小，表明曲普瑞林组不仅卵泡发育较快，排卵也较早。在定时输精程序中，由于PMSG具有超数排卵的作用，并且经GnRH刺激，成熟卵泡数量和排卵数会增加，因此，曲普瑞林组母猪窝总产仔数较高，但可能由于子宫空间与营养供给限制，最终与对照组相比产活仔数差异不显著。若定时输精母猪妊娠后期饲喂N-氨甲酰谷氨酸、精氨酸等能够提升母猪子宫血流的营养物质，可能会降低母猪死胎数，从而提升产活仔数。本实验对每100头母猪提供的活仔数进行统计发现，曲普瑞林组仔猪指数为857头，比对照组多255头。此外，受非洲猪瘟疫情等影响，猪场可繁母猪数量急剧减少、试验母猪成本增加，导致本实验中各组母猪样本量较小，经过2次定时输精处理，母猪批次妊娠率、分娩率虽然在统计学上差异不显著，但有提高趋势。