猪口蹄疫疫苗临床免疫效果评估

宁慧波 周 洋 王华龙

（天康生物制药有限公司，江苏苏州 215124）

口蹄疫（foot and mouth disease,FMD）是一种由口蹄疫病毒引起的急性、热性、高度接触性传染病[1]。本病具有强烈的传染性，发病率几乎达100%，一旦发病，传染速度很快，往往造成大流行，且不易控制和消灭，给养殖企业带来严重的经济损失。世界动物卫生组织（OIE）一直将本病列为发病必须报告的A类动物疫病之首，我国也将口蹄疫列为一类家畜传染病。因此，实际养猪生产中，应采取综合防控措施，全面预防口蹄疫等动物疫病。

疫苗免疫是防控口蹄疫的重要手段，安全高效的疫苗是成功预防乃至净化FMD的先决条件[2,3]。我国对口蹄疫的防控政策主要是预防为主、扑杀为辅。我国针对口蹄疫防控实行强制免疫政策，免疫抗体水平检测既是疫苗免疫质量评估的常用手段，也是免疫效果好坏的重要评价指标，同时也可以为科学制定免疫程序、做好疫病风险评估提供可靠的技术支持。疫苗质量受到毒株、抗原含量、佐剂、保质期等因素影响。为了更科学地评估口蹄疫疫苗抗原含量对免疫效果的影响程度，本研究对2款口蹄疫产品进行免疫试验并跟踪评估免疫效果，为口蹄疫疫苗的选择及临床使用提供参考。

1 材料与方法

1.1 试验动物

广东某规模化猪场，经产母猪存栏9 600头，两点式生产，封闭式管理，猪群整体健康状况良好。

1.2 试验材料

口蹄疫O型、A型二价灭活疫苗X，购自新疆某公司；口蹄疫O型、A型二价灭活疫苗Y，购自内蒙古某公司；紫外分光光度计，购自赛默飞世尔科技（中国）有限公司；口蹄疫O型抗体液相阻断ELISA检测试剂盒，购自中国农业科学院兰州兽医研究所。

1.3 试验方法

1.3.1 疫苗抗原含量测定

采取蔗糖密度梯度离心法获得一定体积口蹄疫病毒146S病毒粒子，使用紫外分光光度计在259 nm紫外光下检测吸收峰，从而测定口蹄疫疫苗抗原含量。

1.3.2 免疫方案

分别选取经产母猪和9周龄仔猪进行试验，免疫方案见表1。

表1 试验免疫方案

1.3.3 抗体测定

于免疫当天、免疫后8周对每组母猪随机采血100份，于免疫当天、免疫后4周对每组仔猪随机采血100份，分离血清，－20℃冷冻保存，进行猪口蹄疫O型抗体测定。口蹄疫O型抗体检测按照相应试剂盒说明书，判定标准：抗体效价＜1∶64为阴性，1∶64～1∶128为可疑，≥1∶128为阳性。

2 结果与分析

2.1 抗原146S含量检测结果

如图1所示：疫苗X的146S含量为33.7 μg/mL，是疫苗Y的2倍以上，二者在抗原检测方面表现差异显著（P＜0.05）。

图1 两种口蹄疫疫苗146S含量检测结果

2.2 口蹄疫O型抗体检测结果

2.2.1 母猪抗体检测结果

如图2所示，免疫前两组抗体阳性率均低于80%，免疫8周后抗体水平有了明显提升，且疫苗X组阳性率明显高于疫苗Y组。疫苗X组阳性率（98%）提升了19个百分点；疫苗Y组抗体阳性率（89%）提升了12个百分点，疫苗X组增幅明显高于疫苗Y组。免疫前两组抗体离散度均较大，免疫后均降低，且疫苗X组明显低于疫苗Y组；疫苗X组离散度显著降低至10%（P＜0.05），降幅达35个百分点；疫苗Y组离散度降低至39%，降幅3个百分点。

图2 母猪免疫前后O型抗体检测结果

2.2.2 仔猪抗体检测结果

如图3所示，免疫前两组抗体阳性率较高，均超过90%。免疫后，疫苗X组阳性率升至100%，而疫苗Y组阳性率却降至65%。对比两组免疫后抗体效价，疫苗X组不同效价的抗体比例均远高于疫苗Y组，且疫苗Y组抗体效价＞1∶512的比例高达70%，结果如图4。两组抗体结果差异显著（P＜0.05）。

图3 仔猪免疫前后O型抗体检测结果

图4 仔猪免疫后O型抗体检测结果

3 讨论

口蹄疫流行毒株复杂多变，有7个血清型，各血清型之间无交叉免疫性，同血清型的口蹄疫病毒拓扑性之间也仅有部分交叉免疫保护。口蹄疫病毒的传播途径众多，可通过气溶胶随风移动50～100 km，据英国资料报道最远可达300 km。猪是口蹄疫气溶胶的最大制造者，一天可排出108感染单位病毒，可使1 000万头牛感染发病。生物安全对于口蹄疫的防控至关重要，但并不能保证万无一失。目前，国际公认免疫注射口蹄疫疫苗是防控该病最经济有效的措施。

近几年，我国主要流行O、A型口蹄疫，亚洲Ⅰ型处于非免疫无疫状态。目前，临床生产中主要使用的是口蹄疫灭活疫苗。此类疫苗抗原是完整的病毒颗粒（146S），具有充分的T细胞和B细胞位点[4]。口蹄疫疫苗的免疫应答以体液免疫为主，在一定范围内体液中抗原含量越高，产生抗体水平越高、抗体维持时间也就越久。更为重要的是，抗原含量高才能对“扑朔迷离”的田间流行毒株产生更好的交叉保护力。同时，抗原含量高，更容易削弱母源抗体的干扰作用，缩短甚至避免仔猪免疫空窗期[5,6]。此外，合理的免疫程序对于充分发挥疫苗作用至关重要。

本研究评估了两款口蹄疫疫苗的抗原含量、母猪及仔猪免疫前后抗体变化情况。结果显示，两款疫苗抗原含量差距显著，疫苗X的146S显著高于疫苗Y。母猪群分别免疫后，抗体阳性率均显著提升，离散度均下降；但疫苗X组抗体的阳性率及离散度变化均明显优于疫苗Y组。同时也发现，该场母猪群抗体阳性率并未达到100%，这可能与猪群健康度或疫苗免疫程序有关，后续可以对母猪群进行加强免疫。仔猪群分别免疫后，抗体阳性率均显著变化；疫苗X组阳性率升至100%，而疫苗Y组却下降至65%，结果“大相径庭”；疫苗X组不同效价的抗体比例均远高于疫苗Y组。这可能与母源抗体的干扰作用有关，疫苗X由于抗原含量高，可以快速产生高水平的抗体，更大程度地削弱母源抗体的干扰作用。后续可以对母源抗体进行中和抗体测定，以制定更科学的免疫程序。

口蹄疫疫苗的稳定性相对较差，疫苗中的146S含量及稳定性对于疫苗免疫效果至关重要。疫苗中的146S在4℃时相对稳定，但在37℃及以上温度下稳定性较差。因此，需加强口蹄疫疫苗的运输及储存环节管控[7]。为了更好地发挥疫苗效果，一般采用油性佐剂，低温条件下较为黏稠，刺激性较大，回温操作可以大大降低疫苗黏稠度、提高疫苗通针性、减轻疫苗应激、降低劳动量，从而进一步提升疫苗使用效果[8]。