甲噻诱胺原药高效液相色谱分析方法研究

2022-01-11许艳秋王广成谢树林陈丙坤吴春先高立明

世界农药 2021年12期

许艳秋，王广成，谢树林，陈丙坤，吴春先，高立明

(四川省农药检定所，成都 610041)

甲噻诱胺，化学名称N-(5-甲基-1,3-噻唑-2-基)-4-甲基-1,2,3-噻二唑-5-甲酰胺，CAS号：908298-37-3，分子式：C8H8N4OS2，结构式见图1，是由南开大学创制开发的植物诱导抗病激活剂，其作用机制为诱导植物自身产生广谱的抗病活性[1-2]。此物质主要用于防治病原真菌、细菌和病毒等引起的多种作物病害，尤其是对水稻稻瘟病、烟草病毒病、黄瓜细菌性角斑病和黄瓜霜霉病等作物病害有一定的防治效果[2-4]和很好的诱导抗病效果[4-6]。

目前，关于甲噻诱胺的残留分析方法已有专利报道[7]，但甲噻诱胺原药的分析检测方法尚未见公开报道。因此，本文采用高效液相色谱仪建立了一种测定甲噻诱胺原药质量分数的定量分析方法，具有操作快速、简便的特点，精密度和准确度均能满足定量分析的要求，可用于甲噻诱胺生产中的质量控制及其相关分析测试研究。

1 材料与方法

1.1 供试药剂和试剂

甲噻诱胺标准品，质量分数99.0% (广安利尔化学有限公司)；甲噻诱胺原药，质量分数96.46% (广安利尔化学有限公司)；甲醇，色谱纯(飞世尔科技公司)；磷酸，分析纯(四川西陇化工有限公司)；超纯水，自制。

1.2 仪器

Agilent 1260型高效液相色谱仪配DAD检测器(美国安捷伦科技有限公司)；AB204-S电子天平(瑞士梅特勒-托利多)；过滤器：滤膜孔径0.45 μm。

1.3 液相色谱操作条件

色谱柱为250 mm×4.6 mm (i.d.)不锈钢柱，内填ZORBAX SB-C18，5.0 μm填充物；流动相为甲醇+0.1%磷酸水溶液(60∶40，体积比)，流速为1.0 mL/min；色谱柱温度为30 ℃；检测波长为265 nm；进样体积为3.0 μL，采用外标法以峰面积定量。在该色谱条件下，甲噻诱胺保留时间约为5.8 min。典型色谱图见图1。

图1 相同条件下甲噻诱胺标样和原药样品的液相色谱图

1.4 样品准备

准确称取(万分之一天平)甲噻诱胺标准品0.05 g于50.00 mL容量瓶中，用甲醇溶解稀释后，定容至刻度线，摇匀后作标准样品溶液储存待用。另称取甲噻诱胺原药样品0.05 g，采用同样方法用甲醇溶液并定容至50.00 mL，作待测样品溶液。

1.5 进样分析

按上述仪器条件运行液相色谱，当信号基线保持平稳且无明显波动时，取用标准样品溶液进样分析，至连续2次进样检测的信号值变化小于1.5%后，以标准样品、待测样品、待测样品、标准样品的顺序对甲噻诱胺含量进行测定。

1.6 结果计算

利用色谱工作站分别对标样和待测样中甲噻诱胺的峰响应信号面积进行积分，并将所得结果平均后，按下列算式计算待测样中的甲噻诱胺质量分数ω(%)：

式中：A1、A2分别为标准样品中和待测样品前后两针甲噻诱胺峰面积的平均值；m1、m2分别为称取的甲噻诱胺标准品和待测样品的质量(g)；ωs为标准品中甲噻诱胺的纯度(%)。

2 结果与讨论

2.1 检测波长的选择

采用二极管阵列检测器(DAD)，在210~400 nm吸收波长范围内对甲噻诱胺标样进行光谱扫描，结果显示，甲噻诱胺在345 nm附近有最大吸收，在265 nm也有较大吸收，结合出峰峰形，选择265 nm作为本方法的检测波长。

2.2 流动相的选择

流动相采用有机相和水相按一定比例配合组成，其中甲醇作有机相部分，水相部分在纯水或0.1%磷酸水溶液中选择。在2种不同的水相下分别对甲噻诱胺标样进行预分析试验，试验发现0.1%磷酸水溶液有利于改善甲噻诱胺的峰形与分离效果。调节流动相中甲醇和磷酸水溶液的比例，当其体积比为60∶40，流速为1.0 mL/min时，甲噻诱胺得到了良好的分离。

2.3 分析方法的线性相关性

配制5个浓度分别为0.429 0、0.801 9、1.029 6、1.237 5、2.162 2 mg/mL的甲噻诱胺标准溶液，按照1.3节色谱条件进行测定。以甲噻诱胺的质量浓度为自变量，相应的峰面积为因变量，进行线性回归分析，结果见图2，在试验质量浓度范围内，甲噻诱胺的质量浓度与信号响应值之间呈现良好的线性关系，线性方程为y=4 977.3x+46.371，相关系数(R2)为1.000 0。