风疹病毒和巨细胞病毒IgG 抗体亲和力检测对判断急性感染的应用价值

孙宏跃，艾亮，赵宗瑞，张富青，陶占领

（1.郑州市妇幼保健院检验科2.郑州市金水区总医院检验科3.郑州安图生物工程股份有限公司，河南 郑州 450000）

人巨细胞病毒(Human Cytomegalovirus,CMV)和风疹病毒（Rubella virus）是引起先天性感染的重要病原体。 35～50%的孕妇原发感染巨细胞病毒后可导致胎儿宫内感染，其中约10%的宫内感染胎儿会发生出生缺陷，严重程度与感染的病毒量、毒力和孕期有关，孕早期原发感染发生出生缺陷的几率更高。 先天性感染的胎儿多数可出现智力低下，视力受损，听力丧失等症状，特别是引起婴儿的巨细胞包涵体病，患儿可多个系统、多个器官受损[1]。 孕妇在孕期感染风疹病毒，可能会导致新生儿出现先天性风疹综合征（congenital rubella syndrome,CRS），最常见的出生缺陷是白内障等眼疾患，其次是耳聋和心血管系统缺损[2,3]，怀孕的前三个月原发感染，宫内感染的几率在70%以上，出生缺陷的几率在80%以上，在怀孕的后三个月原发感染，宫内感染的几率会降低到10%以下，很少会出现出生缺陷，因此确定是否为原发感染以及感染时间非常重要[4]。

目前对巨细胞病毒和风疹病毒感染的筛查主要是检测血清中的IgG 和IgM 抗体，单份血清样本IgM 抗体检测存在一些缺点，例如假阳性，IgM抗体过早消失，有些感染者IgM 抗体可能存在半年以上，复发感染也会产生IgM 抗体[5]等。IgM 抗体阳性同时IgG 抗体出现血清转化被认为是判断急性感染的金标准，但是这需要至少间隔一周以上的两次样本且容易错过最佳采样时机，这给判断是否为近期感染带来了困难。

近年来通过IgG 抗体亲和力的检测进行风疹病毒原发急性感染的诊断在国外已有报道，IgG 亲和力检测可以帮助区分是否为原发感染或新的复发感染，因为低亲和力的IgG 抗体出现在感然后的前几个月，随着时间的推移，抗体逐渐成熟为高亲和力的抗体，高亲和力的IgG 抗体可以排除发生在4 个月以内的感染[6,7]。 本文通过对原发感染人群、既往感染人群、IgM 抗体阳性人群的风疹病毒和巨细胞病毒IgG 抗体亲和力水平检测，评估抗体亲和力检测在判断急性感染诊断中的应用价值。

1 材料与方法

1.1 样本

1.1.1 风疹病毒急性感染样本（BIOMEX 公司血清转化样本盘） SCP-RV-001，15 例样本，取样时间至感染后第50d；SCP-RV-002，13 例样本，取样时间至感染后第42d；SCP-RV-003，20 例样本，取样时间至感染后第71d；SCP-RV-004，15 例样本，取样时间至感染后第60d。 四个血清转化盘共计样本63 例，这些样本是确定的原发急性感染样本，用于监测风疹病毒IgG 抗体亲和力与感染时间的关系。

1.1.2 巨细胞病毒急性感染样本（BIOMEX 公司血清转化样本盘） SCP-CMV-001，15 例样本，取样时间至感染后第99d；SCP-CMV-002，25 例样本，取样时间至感染后第124d；SCP-CMV-003，5 例样本，取样时间至感染后第34d；SCP-CMV-005，6 例样本，取样时间至感染后第35d；SCP -CMV -006，24 例样本，取样时间至感染后第122d；SCPCMV-007，20 例样本，取样时间至感染后第98d。六个血清转化盘共计样本95 例，这些样本是确定的原发急性感染样本，用于监测巨细胞病毒IgG 抗体亲和力与感染时间的关系。

1.1.3 初筛IgM 抗体阳性样本 州市妇幼保健院优生遗传中心2014年12月1 日-2016年4月30日，筛查的孕妇风疹病毒IgM 和IgG 抗体均为阳性的样本43 例，巨细胞病毒IgM 和IgG 抗体均为阳性的样本59 例（郑州安图生物工程股份有限公司产品），-20℃保存。

1.1.4 既往感染样本 郑州市妇幼保健院优生遗传中心2016年2月1 日-2016年4月30 日，筛查的孕妇风疹病毒IgG 抗体阳性IgM 抗体阴性的样本300 例，巨细胞病毒IgG 抗体阳性IgM 抗体阴性的样本300 例（郑州安图生物工程股份有限公司产品），-20℃保存。

1.2 方法

1.2.1 亲和力检测试剂盒 风疹病毒IgG 抗体亲和力检测试剂盒（ELISA），批号20151201，巨细胞病毒IgG 抗体亲和力检测试剂盒（ELISA），批号20151201，郑州安图生物工程股份有限公司生产。

1.2.2 亲和力检测方法 样本1/100 稀释后复孔加样，37℃反应30min 后洗涤微孔板，向其中一个孔加入对照缓冲液，另外一个孔加入解离缓冲液，37℃反应10min，在此过程中解离孔中的结合的IgG 抗体会被解离缓冲液从结合的抗原上解离，洗涤微孔板后加入二抗酶结合物，37℃反应30min 后显色。

1.2.3 亲和力计算 IgG 抗体亲和力指数（Avidity Index，AI）=解离缓冲液孔OD 值/对照缓冲液孔OD值×100%。

注：样本中IgG 抗体浓度需大于试剂盒要求才能用于IgG 抗体亲和力计算，但是当样本中IgG 抗体浓度太高时，OD 值会超出3.0，这种情况下需要将样本4 倍稀释后重新检测，或者使用405/620 双波长读数后计算亲和力。

1.2.4 亲和力结果判断 风疹病毒IgG 亲和力指数：≤50%，为低亲和力；50%～55%之间为灰区；＞55%为高亲和力。 巨细胞病毒IgG 亲和力指数：＜45%，为低亲和力；45%～50%之间为灰区；＞50%为高亲和力。

1.2.5 统计学分析 采用GraphPad Prism 5 统计软件处理数据。 数据采用平均值±标准差表示，两组间比较用独立样本t 检验方法分析，P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 急性感染者抗体亲和力检测结果 风疹病毒4个抗体血清转化盘（BIOMEX 公司） 共计63 例样本，取样时间从感染开始至第71d，有17 例样本因取样时间较早，IgG 抗体为阴性，不能计算亲和力，其余46 例样本的IgG 亲和力水平随着感染时间的延长而持续升高，从第20d 的约10%，升高到第71d 的约45%，均为低亲和力，见图1。

图1 风疹病毒IgG 抗体亲和力水平随感染时间的变化

巨细胞病毒6 个抗体血清转化盘（BIOMEX 公司） 共计95 例样本，取样时间从感染开始至第124d，有18 例样本因取样时间较早，IgG 抗体为阴性，不能计算亲和力，其余77 例样本的IgG 亲和力水平随着感染时间的延长而持续升高，但不同样本的抗体亲和力成熟时间有所不同，有3 例样本至第99d（3 个月）仍为低亲和力，1 例样本在75d成熟为高亲和力，见图2。

图2 巨细胞病毒IgG 抗体亲和力水平随感染时间的变化

2.2 初筛IgM 抗体阳性样本和既往感染样本抗体亲和力检测结果 来我院优生遗传中心进行TORCH 感染筛查的孕妇均用ELISA 方法检测了风疹病毒和巨细胞病毒IgM 和IgG 抗体，并对初筛IgM 抗体阳性的样本进行了复测确认，共检出风疹病毒IgM(+)IgG(+)样本43 例，巨细胞病毒IgM(+)IgG(+)样本59 例，另随机选择风疹病毒和巨细胞病毒IgM(-)IgG(+)既往感染样本各300 例。

如表1 所示，43 例风疹病毒IgM(+)IgG(+)样本中有20 例检测为低亲和力，18 例检测为高亲和力，5 例检测为灰区。 300 例风疹病毒IgM(-)IgG(+)样本中有1 例检测为低亲和力，3 例检测为灰区，296 例检测为高亲和力。

表1 风疹病毒IgG 抗体亲和力检测结果

如表2 所示，59 例巨细胞病毒IgM(+)IgG(+)样本中有24 例检测为低亲和力，31 例检测为高亲和力，4 例检测为灰区。 300 例巨细胞病毒IgM(-)IgG(+) 样本中有2 例检测为低亲和力，3 例检测为灰区，295 例检测为高亲和力。

表2 巨细胞病毒IgG 抗体亲和力检测结果

2.3 风疹病毒急性感染样本46 例、IgM(+)IgG(+)样本43 份、IgM(-)IgG(+)300 份，共计389 例样本的IgG 抗体亲和力数据如图3，巨细胞病毒急性感染样本77 例、IgM(+)IgG(+)样本59 例、IgM(-)IgG(+)300 例，共计436 例样本的IgG 抗体亲和力数据如图4，可以看出三个类型样本之间的抗体亲和力存在显著差异（P＜0.001）。

图3 389 份风疹病毒IgG 抗体亲和力统计结果

图4 436 份巨细胞病毒IgG 抗体亲和力统计结果

3 讨论

国内外的孕期风疹病毒和巨细胞病毒感染处理指南均建议临床医生应结合IgM、IgG 和IgG 亲和力的检测结果对孕妇宫内感染的风险进行评估[8,9]。 Lazarotto 等用CMV IgG 亲和力试剂盒检测了42 例孕妇，15 例器官移植病人，96 例献血员血清转化样本，结果表明88.6%的原发感染病人为低亲和力,且抗体成熟为高亲和力需要17～25 周的时间[10]。 Bodeus 等用ELISA 方法检测了409 例IgM 和IgG 均阳性孕妇的IgG 抗体亲和力，发现207 例孕妇为高亲和力，可排除原发感染，121 例怀孕三个月内的孕妇中，有30%通过亲和力检测排除了原发感染[11]。 Us 等发现41 例CMV IgM 和IgG 均 阳性样本中有34 例为低亲和力（82.9%），7 例为高亲和力（17.1%），52 例CMV IgM 阴性IgG 阳性样本均为高亲和力[12]。

本研究中，我们检测了77 例巨细胞病毒原发感染抗体血清转化样本，100%的样本在感染后10周内为低亲和力，87.2%的样本在感染17 周内为低亲和力，与Lazarotto 的研究结果基本一致。59 例IgM (+)IgG (+) 的样本中，40.7%检测为低亲和力，52.5%检测为高亲和力，与Bodeus 的研究结果基本一致。 300 例IgM(-)IgG(+)的既往感染中只有2 例检测为低亲和力，98.3%的样本检测为高亲和力。

Bottinger 等研究了94 例有典型风疹病毒感染症状且IgM 抗体阳性的病人抗体亲和力结果，发现85%的病人抗体亲和力低于30%，97%的病人抗体亲和力低于40%，而对于137 例既往感染者，平均亲和力为85%[13]。Hedamn 等研究了15 例风疹病毒急性感染后4～5 个月的84 例样本抗体亲和力随时间的变化趋势，发现所有感染者的抗体亲和力都随时间逐渐升高，6 周内均为低亲和力，13周后均为高亲和力[14]。

本研究中，我们检测了46 例风疹病毒原发感染抗体血清转化样本，感染后10 周内均为低亲和力，与Hedamn 的研究基本一致。 300 例IgM(-)IgG(+)的既往感染中只有1 例检测为低亲和力，98.7%的样本检测为高亲和力。 43 例IgM(-)IgG(+)的样本中，46.5%检测为低亲和力，41.9%检测为高亲和力。

文献研究和本研究表明，IgG 抗体亲和力检测可以区分急性感染和既往感染，高亲和力基本可以排除10 周以内的感染。 对于IgM 和IgG 抗体均阳性的样本应该进行亲和力检测，其中约50%可以通过亲和力排除急性感染。