2021 年海南省小作坊土榨花生油中黄曲霉毒素B1的调查分析

吴基任，潘 望，谭高好，潘永波，魏 静，李 备

（1.海南省食品检验检测中心，海南海口 570314；2.国家市场监管重点实验室(热带果蔬质量与安全)，海南海口 570314）

黄曲霉毒素B1是二氢呋喃氧杂奈临酮的衍生物，即含有一个双呋喃环和一个氧杂萘临酮（香豆素）。黄曲霉毒素B1具有致癌、致突变、致畸性及肝毒性，对人体健康有极大的危害，1993 年黄曲霉毒素被世界卫生组织（WHO）癌症研究总署（LARC）划定为Ⅰ类致癌物[1-2]。考虑到黄曲霉毒素B1对人类健康的危害性，各个国际组织逐步确立法律法规限定其最大摄入量。1993 年联合国粮农组织和世界卫生组织规定食品中黄曲霉毒素限量为30 μg/kg[3]，2002 年欧盟规定供人食用的食品及食品原料中黄曲霉毒素B1限量为2 μg/kg[4]，食品法典委员会规定了花生中黄曲霉毒素总限量为15 μg/kg[5]。我国新修订的《国家食品安全标准 食品中真菌毒素限量》（GB 2761—2017）也对各类食品中的黄曲霉毒素B1限量进行了规定，其中花生及其制品的限量为20 μg/kg[6]。黄曲霉毒素B1广泛存在于油料，如花生、大豆、玉米等，而花生和玉米中黄曲霉毒素污染最为严重。在我国每年生产的花生中，有47.3%用于榨油，花生中的黄曲霉毒素随着榨油过程进入花生油中。有研究发现人工挑除霉变的花生，可以将花生中的黄曲霉毒素B1降低到一定程度，如果仔细挑选，能够将花生中黄曲霉毒素污染浓度降低约97%，从而降低花生油中黄曲霉毒素。

鉴于海南省花生油榨油小作坊众多，土榨花生油消费特点明显，了解当前海南省小作坊土榨花生油情况，展开小作坊土榨花生油中黄曲霉毒素B1含量的调查分析，以期较为全面掌握海南省小作坊土榨花生油安全水平及黄曲霉毒素B1污染状况，从而为相关部门提供风险评估、预警以及决策，为人们食用花生油提供安全保障。

1 材料与方法

1.1 样品采集

结合海南省榨油小作坊分布及土榨花生油消费特点，在海南省19 市县随机抽样检验。200 个榨油小作坊各抽取土榨花生油样品1 批，共计200 批。分批采集封装后常温保存，每份样品均做好详细采样记录和调查问卷。抽样时间为2021 年3 月—2021年4 月，有4 个市县没有抽到样品，实际抽样市县为15 个。

1.2 仪器与试剂

LC-30 超高效液相（日本岛津），QTRAP 5500三重四极杆液相色谱质谱联用仪（美国AB SCIEX 公司）；Multi Reax 全能型振荡器（德国Heidolph 公司）；Centrifuge 5804 高速离心机（德国Eppendorf 公司）；SCIENTZ-950E 超声波提取器（宁波新芝生物科技公司）；AutovapS60 氮吹仪（美国ATR）；XS-205 电子分析天平（瑞士Mettler-Toledo）；Milli-Q 超纯水制备系统（美国MILLI-PORE）；陶瓷均质子（美国安捷伦公司）；ACE Ultra Core Super C18色谱柱（2.1 mm×100 mm,2.5 μm,英国ACE 公司）；0.22 μm尼龙微孔滤膜（上海安谱科学仪器有限公司）。

甲醇、乙腈、甲酸，色谱纯，德国默克公司；黄曲霉毒素B1标准品（25 μg/mL）；花生油质控样品，批号:MRM-AO-04010，新加坡Pribolab 公司；提取盐包（4 g MgSO4、1 g NaCl、1 g 柠檬酸钠、0.5 g三水合柠檬酸二钠）、净化盐包（150 mg C18、900 mg MgSO4），美国安捷伦公司）；超高比表面积单壁碳纳米管（纯度＞95%，直径1～2 nm，长度5～30 μm，比表面积＞1 075 m2/g），南京纳米先锋公司；超纯水：超纯水制备系统制备。

1.3 检测方法

土榨花生油中黄曲霉毒素B1含量的测定方法根据《QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱法测定花生及土榨花生油中9 种真菌毒素》[7]。准确称取2.0 g 油样于50 mL 的离心管中，加入10 mL 含1%甲酸甲醇溶液，2 粒陶瓷均质子，加入提取盐包（4 g MgSO4、1 g NaCl、1 g 柠檬酸钠、0.5 g 三水合柠檬酸二钠），以2 500 r/min 涡旋混匀2 min，置于超声波清洗器超声提取5 min 后，再10 000 r/min 离心3 min，移取上清液至预先加入净化盐包（150 mg C18、900 mg MgSO4）15 mL 离心管中,对于颜色较深的试样15 mL 离心管中预先加入净化盐包（150 mg C18、900 mg MgSO4）及10 mg超高比表面积单壁碳纳米管，以500 r/min 涡旋混匀1 min，再10 000 r/min 离心3 min，准确吸取5 mL 上清液于10 mL 试管中，在40 ℃水浴下氮气吹至近干，加入1 mL 含0.1%甲酸的水-乙腈溶液（20 ∶80，V∶V）复溶，过0.22 μm尼龙微孔滤膜,上UPLC-MS/MS 测定。

1.4 评价标准与方法

依据《国家食品安全标准 食品中真菌毒素限量》（GB 2761—2017）中花生及其制品的限值（≤20 μg/kg）及《QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱法测定花生及土榨花生油中9 种真菌毒素》的黄曲霉毒素B1定量限（0.23 μg/kg）对花生油进行评价。

采用Excel 2016 和SPSS 19.0 数据统计软件处理分析实验数据。主要包括描述性分析，各个地区检出率之间的比较采用卡方检验，以（p＜0.05）为差异有统计学意义。

1.5 质量控制

所有检出的样品，均按照《食品安全国家标准 食品中黄曲霉毒素B 族和G 族的测定》（GB 5009.22—2016）第一法同位素稀释液相色谱-串联质谱法[8]进行复测确认，同时采用有证质控样随样测定，以保证结果的准确性。

1.6 暴露评估

采用简单点评估法计算居民食用油黄曲霉毒素B1的膳食暴露量，食用油中黄曲霉毒素B1暴露量（ng/kg bw/d）=食用油人日均消费量×食用油中黄曲霉毒素B1平均含量（μg/kg）/标准成人体重（60 kg）[9-10]。

2 结果与分析

2.1 样品中黄曲霉毒素B1 的含量分析

本次调查采集的土榨花生油200 批样品经检测，85 批样品检出AFB1（≥0.23 ug/kg），检出率为42.5%，低于2016 年福建省的71.4%及2017 年广西省的78.08 %[11-12]。含量范围为0.25～22.03 μg/kg，中位数1.47 μg/kg，平均含量为1.22 μg/kg。按现行的《食品安全国家标准 食品中真菌毒素限量》（GB 2761—2017）中花生油的黄曲霉毒素B1限量规定（≤20 μg/kg），所调查的样品中有1 批超过国家限量标准，不合格率为0.5%。检测结果在15～20 μg/kg，接近国家限量标准的样品有1 批，而这个污染水平可能会被企业所忽视。200 批样品检测结果值分布水平见图1。

图1 花生油样品黄曲霉毒素B1 检测结果散点图

2.2 各市县样品中黄曲霉毒素B1 污染状况分析

将花生油样品黄曲霉毒素B1检测结果按市县分析，结果见表1。从表中可以看出黄曲霉毒素B1的检出率比较高，有4 个市县的黄曲霉毒素B1的检出率大于50%，定安县检出不合格1 批，该县的不合格率为3.85%。使用SPSS 对15 个市县的土榨花生油样品中黄曲霉毒素B1的监测结果进行分析，发现各个地区的样品中黄曲霉毒素B1的检出率差异有统计学意义（χ2=31.42，p＜0.05）。

表1 各市县花生油样品中AFB1 检测结果

2.3 膳食暴露情况

结合海南统计年鉴（2020）的植物油人日均消费量（21.22 g/d）[13]和本次黄曲霉毒素B1含量调查数据，代入暴露量水平计算公式，得出海南省居民食用土榨花生油中黄曲霉毒素B1的平均暴露水平为0.43 ng/kg bw/d。通过食用土榨花生油摄入黄曲霉毒素B1的量为25.89 ng/人，低于我国消费人群花生油平均日膳食暴露量（50.16 ng/人）[14]。

3 结论与讨论

本调查遵循样本“覆盖面广、多点采样”的原则，样本覆盖全省15 个市县的200 家榨油小作坊，基本能够代表人们购买土榨花生油的主要渠道。对200 批样品中黄曲霉毒素B1检测分析结果表明，2021 年海南省小作坊花生油黄曲霉毒素B1超标率为0.5%，检出率为42.5%，经简单风险评估发现，海南省人群食用土榨花生油摄入黄曲霉毒素B1的量为25.89 ng/人，低于我国消费人群花生油平均日膳食暴露量。调查中发现小作坊土榨花生油多是前店后厂模式生产，条件比较简陋，设施设备及加工工艺比较落后，产品过滤精炼不足，部分产品静置后有深棕色絮状沉淀物。花生油中黄曲霉毒素B1含量的高低取决于花生原料的质量及压榨加工过程精炼处理效果。如果在花生种植收获、存储运输和压榨加工过程中没有做好防霉、精炼过滤等处理，容易造成终产品的黄曲霉毒素B1含量超标。有研究发现人工挑除霉变的花生，可以将花生中的黄曲霉毒素B1降低到一定程度，如果仔细挑选，能够将花生中黄曲霉毒素污染浓度降低约97%，从而降低花生油中黄曲霉毒素B1。花生油中黄曲霉毒素B1高于和接近国家标准限值的小作坊可采取如下措施：①加强对标准法规的学习，提升食品安全和质量保证意识；②加强防霉储存知识学习，以做好压榨加工及储存过程的防霉处理；③加强环境温湿度控制，加强剔除原料中的霉粒，必要时改善设施设备和改进加工工艺。以进一步提升海南小作坊土榨花生油质量，保证人们食用花生油安全。

鉴于本次研究仅针对2021 年海南省小作坊土榨花生油中的黄曲霉毒素B1进行膳食暴露评估，而黄曲霉毒素B1存在于各种食用农产品中，且食用植物油的种类繁多。因此，本研究结果并不能完全代表该地区居民人体黄曲霉毒素素B1的总体摄入水平。