重度子痫前期患者血清和胎盘组织中ADMA与DDAH2的表达水平及其相关性

王 宇, 周杜娟, 黄 艳, 徐 雁, 夏宏林

(安徽医科大学附属宿州医院， 安徽 宿州 234000)

子痫前期是指孕妇在妊娠20周后发生的血清蛋白、血压以及血脂的异常情况，其发病率高达6%～8%，随着病情进展会累及到脑、心、肝和肾等多个重要脏器官，形成重度子痫前期[1]，不仅会使得母婴面临严峻的挑战与威胁，而且影响妊娠结局。既往研究发现，重度子痫前期是炎症免疫过度激活、氧化应激以及遗传等多种因素共同作用的结果[2]，早发型重度子痫前期发病早、病情危重，直接威胁母婴健康，其会通过重塑胎盘血管诱发胎源性疾病，表现为一氧化氮(nitric oxide，NO)表达异常及活性降低，从而引起母胎血管内皮受损[3]；晚发型则程度轻，多由机体与疾病耐受失衡有关。近年来，研究发现非对称性二甲基精氨酸(asymmetric dimethylarginine，ADMA)以及甲基精氨酸二甲胺水解酶(dimethylarginie dimethylaminohydrolase，DDAH)能够调节机体NO，该机制主要是通过影响酶活性实现的，进而导致血管内皮激活，在损伤形成中有一定的参与作用[4]。本研究以2017年1月至2020年10月62例重度子痫前期患者作为研究对象，分析血清和胎盘组织ADMA与DDAH2在重度子痫前期中的表达及其相关性，现将结果报告如下。

1 资料与方法

1.1一般资料:前瞻性收集安徽医科大学附属宿州医院收治的重度子痫前期患者病例，来源时间范围为2017年1月至2020年10月，病例总数为62例，其中早发型重度子痫前期患者(早发型重度子痫前期组)32例，晚发型重度子痫前期患者(晚发型重度子痫前期组)30例。早发型重度子痫前期患者年龄(22～37)岁，平均年龄(29.63±4.02)岁；孕周(25～35)周，平均孕(32.39±1.14)周。晚发型重度子痫前期患者年龄21～38岁，平均年龄(29.53±4.09)岁；孕(26～36)周，平均孕(34.95±1.21)周。选择同期健康孕妇(n=30)作为对照组，年龄36～23岁，平均年龄(29.18±4.21)岁，孕(25～36)周，平均孕(33.84±1.64)周。三组孕妇年龄及孕周对比，无显著差异(P>0.05)，具有可比性。

1.2纳入与排除标准:入组标准：①收集对象均为初产妇，且B超显示为单胎;②重度子痫前期诊断标准参照《妊娠期高血压和子痫前期指南2019版》[5]；③患者及家属已明确研究目标及流程，自愿参与研究并在知情同意书签字，医学伦理委员会掌握研究相关事项，并批准;④产妇年龄≥18岁，可正常交流。排除标准：①合并精神异常、心理障碍或意识丧失患者；②合并原发性高血压、糖尿病及心脑血管疾病患者；③听力丧失、语言沟通不顺畅，对研究无法做到顺利配合患者。

1.3方 法

1.3.1血清胎盘样本采集:血液样本采集均应在清晨空腹状态下进行，抽血部位为肘部，抽血量以6mL为宜，放置于室温环境下静置30min，然后置于4℃环境下，按照2500r/min的离心速率实施离心处理，离心半径设置为22.5cm，离心处理时间为15min，将血清分离，保存于-70℃冰箱中。产妇娩出胎盘后立即将脐带位置血管密集部位胎盘组织，以1.5cm×1.0cm×0.5cm为宜，需要注意避开钙化点位置。采用生理盐水进行反复冲洗，并采用滤纸做吸干处理，在液氮下进行短暂冷冻，然后保存于-70℃冰箱环境中待测。

1.3.2血清ADMA与DDAH2检测:严格按照ELISA试剂盒说明检测ADMA及DDAH2指标，试剂盒由泉州市睿信生物科技有限公司提供。完成标准品稀释、加样以及温育等操作，并进行洗涤、加酶以及显色处理，然后完成测定。

1.3.3胎盘组织ADMA及DDAH2表达检测:分别提取三组研究对象胎盘标本，处理步骤包埋-切片-脱蜡，然后实施抗原修复，将山羊血清封闭液及第一抗体适量加入，漂洗后将生物素化二抗及链霉亲和素-生物素复合物(strept avidin-biotin complex,SABC)试剂依次加入其中。实施DAB显色及苏木精复染处理。阳性：染色后细胞核呈现颜色为棕黄色。阴性：未着色或仅呈现背景颜色。Fromowitz综合计分法：0分：阳性细胞数量低于1%；1分：阳性细胞数量在1%～25%之间；2分：阳性细胞数量介于25%～50%；3分：阳性细胞数超过50%；染色强弱评分依据：0分表示未染色；1分为淡黄色；2分为黄色；3分棕黄色；两项评分进行综合处理相乘，共分为阴性(-)、弱阳(+)、阳性(++)以及强阳(+++)4个级别，对应分值分别为0分、1～3分、4～6分、9分。

1.4观察内容:①比较三组研究对象的外周血清ADMA及DDAH2水平；②比较三组研究对象的外周血清ADMA及DDAH2的阳性表达率；③分析血清中ADMA与DDAH2表达的相关性。

2 结 果

2.1三组研究对象外周血清ADMA及DDAH2水平比较:与对照组相比，晚发型及早发型重度子痫前期组ADMA均较高，DDAH2均较低，差异有统计学意义(P<0.05)，晚发型与早发型重度子痫前期组患者相比，后者ADMA较前者高，DDAH2水平后者较前者低，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

2.2三组研究对象胎盘组织ADMA和DDAH2表达率比较:三组ADMA阳性表达率比较，差异有统计学意义(χ2=16.389，P=0.000)；三组DDAH2阳性表达率比较，差异有统计学意义(χ2=12.370，P=0.000)；早发型重度子痫前期组胎盘组织ADMA阳性表达率(93.75%)高于晚发型重度子痫前期组(66.67%)及对照组(46.67%)，其阳性表达率经Fisher的精确检验后，差异有统计学意义(P=0.010，0.000)。早发型重度子痫前期胎盘组织DDAH2阳性表达率(37.50%)低于晚发型重度子痫前期(66.67%)及对照组(80.00%)，其阳性表达率经Fisher的精确检验后，差异有统计学意义(P=0.025，0.001)。见表2。

表1 三组研究对象外周血清ADMA及DDAH2水平比较

表2 三组研究对象胎盘组织ADMA和DDAH2表达率比较

2.3血清中ADMA及DDAH2表达相关性分析:血清ADMA水平与DDAH2在早发型及晚发型重度子痫前期均呈现为负相关(r=-0.71，-0.77，P<0.05)。

3 讨 论

作为产科常见并发症，子痫主要指的是不明病因的抽搐，表现为全身小动脉痉挛以及全身器官及脏器血液灌流的减少[6]。既往研究发现，子痫前期与多基因有着密不可分的联系，多基因遗传会加重对子痫前期的易感性，引起胎母免疫平衡及耐受失调，降低免疫抑制反应，引起胎盘缺氧、缺血，损伤血管内皮，进而形成子痫前期[7]。早发型重度子痫前期伴随明显胎盘组织凋亡，阻断滋养细胞进入，各类因子进入母体循环系统后会使得NO减少，难以发挥对血压的调节作用，考虑有明显内皮损伤。

作为一种天然氨基酸，ADMA主要来源于人体组织、体液及细胞，能够对一氧化氮合酶活性产生竞争性抑制，使得NO合成受到一定的抑制，这也是血管内皮损伤的主要因素，进而影响到血流动力学,以往有学者在研究中发现少部分ADMA会经过肾脏被排出，90%会受到DDAH的水解作用以瓜氨酸及二甲胺形式被排出[8]。DDAH1主要来源于胰腺、主动脉及中性粒细胞，其中肝、肾部位置表达最高。处于妊娠期女性DDAH2主要存在心脏及胎盘组织中。当孕妇处于病理状态，DDAH会减少，导致ADMA在机体大量聚集，降低eNOS活性[9]。以往有学者在动物试验中发现ADMA处于异常状态下，会影响到子痫前期患者胎盘功能，主要表现为血管异常收缩[10];ADMA持续升高，长此以往会使得血管内皮功能受到不同程度损伤，增加高血压发生风险。本研究就不同组别孕妇进行了血清ADMA水平检测，从研究得出的数据可以看出早发型重度子痫有着更高的水平，且阳性表达率在三组中居于首位，三组差异显著，考虑与以下几个因素有关：①过度ADMA表达减少内源性NO的生成，降低了eNOS对血管内皮及血管舒张功能的保护作用;②ADMA能够对SOD、CAT等抗氧化物质分泌产生抑制作用，使得胎盘组织中滋养细胞被炎症介质破坏，对凋亡程度产生激活作用，滋养细胞凋亡速度明显增加，这也是子痫前期形成的重要机制；可以将该指标作为评估胎盘功能的可靠指标。作为一种胞质蛋白酶，DDAH2能够将90%以上ADMA降解，妊娠期孕妇心血管及胎盘组织是DDAH2的主要分布部位，既往有学者在研究中发现DDAH2在高血压及高血脂中呈现出低转录及低表达[11]。本研究早发型重度子痫前期组血清DDAH2水平及胎盘组织DDAH2阳性表达率均较晚发型及对照组低，差异有统计学意义(P<0.05)，说明DDAH2在早发型重度子痫前期呈现出明显下调。早发型重度子痫前期DDAH2与ADMA能够对ERKl/2-CREB信号通路产生影响，竞争内皮细胞氧化氮合酶，使其表达下调及降低一氧化氮生成，加重胎盘血管内皮细胞损伤及提高全身微小血管的紧张性，可见胎盘组织中DDAH2与ADMA相关性与血清中两者表达是相通的，因此仅对血清中DDAH2与ADMA表达相关性进行分析，Pearson相关系数分析显示，血清ADMA水平与DDAH2在早发型及晚发型重度子痫前期均呈现为负相关(r=-0.71，-0.77，P<0.05)；提示早发型重度子痫前期的形成与上述两项指标有着一定的关联性，但由于样本少、精力有限，结果可能存在一定的偏倚，有待进一步大样本、大规模研究，为临床提供更多可靠的依据。

综上所述，与正常孕妇及晚发型子痫前期孕妇相比，早发型重度子痫前期患者ADMA有明显升高趋势，DDAH2表现为明显降低，血清ADMA和DDAH2表达水平可作为诊断、评估早发型重度子痫前期的可靠指标，为治疗方案提供可靠的依据。