兔疥螨病的诊断方法研究进展

王正义，蔡冬冬，李春，张辉，刘瑞瑛，罗毅，陈宇航

摘要：兔疥螨病是由疥螨引起的一种顽固性、接触性、传染性皮肤病，以剧痒、结痂、脱毛、皮肤增厚等症状为主要特征，严重影响兔群健康，给养兔业带来巨大危害。正确、快速的诊断对防控兔疥螨病具有重要意义，本文就兔疥螨病的临床诊断、痂皮刮片涂检法、血清学诊断法以及PCR诊断法做一综述，以期为兔疥螨病的诊断带来一定参考价值。

关键词：兔疥螨;痂皮刮片涂检法;血清学诊断法;PCR诊断法

兔疥螨病是由疥螨寄生于兔体表引起的一种顽固性、高度接触性、传染性皮肤病。春、冬季节多发，主要经被污染的兔舍、兔笼、用具及工作人员传播。该病以剧痒、结痂、脱毛、皮肤增厚等症状为主要特征，患兔常因皮肤炎症的不断蔓延造成严重的贫血、消瘦，最后衰竭死亡，如不及时采取措施，会迅速波及全群，造成严重危害。因此早期诊断对控制兔疥螨病具有重要意义。

目前，关于兔疥螨病的诊断方法主要有临床诊断、痂皮刮片涂检法、血清学诊断法以及PCR诊断法。临床诊断和痂皮刮片涂检法适用于疥螨感染后期，此时感染部位临床症状较为明显，痂皮中有大量螨虫。然而，感染初期，大部分病例无明显疥螨病临床症状或表现为亚临床症状，且感染螨虫数量少，诊断非常困难，血清学诊断法以及PCR诊断法则为早期诊断带来希望。

1 临床诊断

1.1 病原

疥螨（sarcoptesscabiei）隶属于真螨目（acariformes）、疥螨科（sarcoptidae）、疥螨属（sarcoptes），呈乳白色，分为假头和躯体两部分。虫体较小，约为0.15～0.5mm，呈圆形或龟形，肉眼不易看到，常寄生于人或动物皮肤表皮内，以宿主细胞间液、血清为食。

1.2 流行情况

疥螨离开宿主后在较高湿度和较低温度（10～20℃）环境下可存活1～3周，且离开宿主24h后依然有很强的穿透皮肤的能力[1]，因此该病主要发生于阳光不足、阴暗潮湿、卫生条件不好等饲养条件下，冬春季节发病率高于夏秋季。病兔直接接触感染是主要的传播途径，也可通过被污染的笼舍、饲料、食具以及饲养人员等间接传播。

1.3 临床特征

感染初期，病家兔主要表现为瘙痒，不断用足趾和嘴搔抓啃咬皮肤痒处，一般从鼻端开始，蔓延到眼圈、上唇、下颌，最后遍及全身，皮肤表面出现鲜红色或淡红色针尖大小出血点。感染后期，随着瘙痒程度加剧，皮肤出现红肿、水泡、局部脱毛、皮肤损伤等，继而造成皮肤增厚、结痂、出血、坏死。同时，皮肤破损处，常常混合细菌、真菌继发感染，还会引起蜂窝织炎，淋巴管炎，急性肾小球炎等[2]。隨病情的发展，病兔采食和休息受到影响，生长发育受阻，表现为食欲不振、消瘦、贫血，最终可因极度衰竭而死亡。

通过该病的流行情况及临床特征等，可做出初步诊断。但疥螨早期感染的临床症状与湿疹、毛癣、虱病和营养性脱毛等疾病的临床表现相似，使鉴别诊断变得复杂。

2 痂皮刮片涂检法

痂皮刮片涂检法适用于感染后期，患部有痂皮产生，可直接检出螨虫体。刮取患病部位皮肤与健康皮肤交界处，剪去被毛，刮下表层痂皮，然后用手术刀片或其他锐物刮取痂皮，直至微见出血为止，将刮下的皮屑收集于培养皿内。然后将培养皿放置37℃培养箱，培养30min，低倍显微镜下观察活螨。也可采用直接涂片法、沉淀法等镜检观察。

痂皮刮片检查法作为诊断疥螨病的传统方法，方便快捷，能直接找到病原体。但它仅仅适用于疥螨病感染后期及样品数较少时的诊断，在疥螨感染早期及样品较多时还要依赖于其他诊断方法。

3 血清学诊断法

疥螨感染会引起宿主先天性与适应性免疫应答，诱导循环抗体产生。感染疥螨后，在宿主血清中也可检测到特异性抗体，因此通过血清学诊断方法来检测特异性抗体是可行的，如酶联免疫吸附法（ELISA）。

在血清学诊断中，需要确定合适的疥螨抗原以及合适的宿主抗体类型和特异性。目前，由于还没有稳定的体外螨虫培养系统，只能通过从感染疥螨的宿主（如模式动物兔、犬、猪）上收集螨虫，数量非常有限，所以天然抗原量较少。一些重组抗原分子已经在宿主兔、犬和猪中进行研究筛选，重组抗原分子可以被宿主产生的循环抗体识别，具有一定的血清学诊断潜力。He等[3]从收集的疥螨中提取RNA重组克隆的钙调蛋白建立ELISA检测感染疥螨的兔，显示有88%的敏感性，但因为疥螨和痒螨都拥有高度保守的钙调蛋白，易出现交叉反应，其特异性仅为23%。沈能兴等[4]选用重组蛋白酪氨酸激酶（rSsPTK）建立间接ELISA方法诊断兔疥螨早期感染，结果显示敏感性为95.2%，该方法与感染兔球虫和豆状囊尾蚴的兔血清不存在交叉反应，但与3份感染兔耳痒螨血清发生了交叉反应，特异性为94.1%。在重组几丁质酶类蛋白5（rSsCLP5）建立的间接ELISA方法中，对46份感染疥螨的兔血清进行检测显示该方法的敏感性为93.5%，与感染豆状囊尾蚴的兔血清不发生交叉反应，与3份感染兔耳痒螨的兔血清和2份感染兔球虫的兔血清发生了交叉反应，特异性为90.7%[5]。虽然，有基于疥螨粗提蛋白与重组蛋白的血清诊断方法研究，但是在敏感性与特异性上都有待提高，尤其是特异性方面，大量研究都显示存在交叉反应。

同样地，用于血清学检测的抗体类型也很重要。疥螨感染会引起机体血清中IgM、IgA、IgG、IgE等循环抗体水平呈不同程度的升高[6]。IgM是机体感染后产生的第一抗体，IgA主要在黏膜免疫中发挥作用。Arlian等[7]对91例普通疥疮患者中的一项研究显示，45.1%、27.5%和73.6%的患者分别检测到血清抗体IgA、IgG和IgM，只有2.2%的人显示IgE抗体与疥螨抗原反应。但同时，研究也指出疥螨抗原与屋尘螨之间具有较高的交叉反应。因此，关于IgM和IgA抗体作为疥螨病的血清学诊断抗体还需进一步深入的研究。IgG抗体在免疫应答中起着激活补体、中和多种毒素的作用，在感染过程中持续时间长。疥螨感染兔后，血清中IgG抗体水平均显著升高[8]，IgG抗体也是疥螨病血清学诊断中最常见的抗体。沈能兴等[4，5]根据重组蛋白rSsPTK和rSsCLP5建立的间接ELISA方法检测24只兔子，结果显示，在感染疥螨1周和2周后，血清特异性IgG抗体水平均明显升高，且两种方法的检出率均为100%，显示了该方法作为早期诊断兔疥螨病的潜能。

4 PCR診断方法

随着分子技术的出现，加上疥螨基因组序列的完成，为替代诊断方法的开发提供了机会。Angelone-Alasaad等[9]对线粒体16S rD

NA中的135bp片段进行扩增，建立两种疥疮PCR诊断方法对从23种宿主物种收集的疥螨进行了检测，显示出高敏感性、特异性。此外，还有LAMP法[10]、巢式PCR法[11]等都显示出用时时间短、检出率高等特点。但在PCR诊断法实施过程中，收集的样品中疥螨或者疥螨成分的有无直接影响检测结果的准确性，且技术要求较高，所以基于PCR技术的诊断法还需要进一步的优化研究。

综上所述，在兔疥螨病的研究中，确切诊断与否，直接影响患病动物的康复情况及预后，严重者会影响全群动物的健康，造成严重的经济损失。临床诊断及痂皮刮片检测法简单易用、经济方便、实操性强，在生产实际中应用广泛，但漏检、误检率高，在疥螨感染后期的诊断中发挥了重要作用。血清学诊断法及PCR诊断法为早期诊断带来希望，但特异性及敏感性都有待提高，建立敏感性高、特异性强的早期诊断方法将是新的研究方向。

参考文献：

[1] Arlian LG， Runyan RA， Achar S， et al. Survival and infectivity of Sarcoptes scabiei var. canis and var. Hominis[J]. J Am Acad Dermatol， 1984， 11（2 Pt1）：210-205.

[2] Walton SF， Holt DC， Currie BJ， et al. Scabies： New Future for a Neglected Disease[J]. Advances in Parasitology ， 2004， 57（1）：309-376.

[3] He R， Shen N， Lin H， et al. Molecular characterization of calmodulin from Sarcoptes scabiei[J]. Parasitol Int， 2017， 66（2）：1-6.

[4] Shen N， He R， Liang Y， et al. Expression and characterisation of a Sarcoptes scabiei protein tyrosine kinase as a potential antigen for scabies diagnosis[J]. Scientific Reports， 2017， 7（1）： 9639.

[5] Shen N，Wei W， Chen Y ， et al. An Antibody Persistent and Protective Two rSsCLP-Based Subunit Cocktail Vaccine against Sarcoptes scabiei in a Rabbit Model[J]. Vaccines， 2020， 8（1）.

[6] Walton SF， Beroukas D， Roberts-Thomson P， et al. New insights into disease pathogenesis in crusted （Norwegian） scabies： the skin immune response in crusted scabies[J]. British Journal of Dermatology， 2010， 158（6）：1247-55.

[7] Arlian LG， Feldmeier H， Morgan MS. The Potential for a Blood Test for Scabies[J]. PLoS Neglected Tropical Diseases， 2015， 9（10）：e0004188.

[8] Morgan MS， Arlian LG. Serum antibody profiles of Sarcoptes scabiei infested or immunized rabbits[J]. Folia Parasitologica， 1994， 41（3）：223-7.

[9] Angelone-Alasaad S， Molinar Min A， Pasquetti M， et al. Universal conventional and real-time PCR diagnosis tools for Sarcoptes scabiei[J]. Parasites & Vectors， 2015， 8（1）：587.

[10] Fraser T A， Carver S， Martin A M， et al. A Sarcoptes scabiei specific isothermal amplification assay for detection of this important ectoparasite of wombats and other animals[J]. PeerJ， 2018， 6（7）：e5291.

[11] Hahm J E， Kim W C， Kim S S. The efficacy of a nested PCR in detecting cytochrome c oxidase subunit1 gene of Sarcoptes scabiei var. Hominis for diagnosing scabies[J]. Br J Dermatol， 2018， 179（4）：889-895.