不同产地蒙药材多叶棘豆总黄酮的含量测定*

高士杰，刘 洋，李旻辉，王晓琴

(1.呼和浩特职业学院中专部，内蒙古 呼和浩特 010050；2.内蒙古医科大学药学院；3.内蒙古自治区中医药研究所)

多叶棘豆为豆科棘豆属多年生草本植物，其干燥全草为蒙医常用药，具有杀“粘”消热、愈伤、生肌、止血等功效，主治流感、瘀血肿胀、喉咙肿痛、痈疮肿毒等[1-2]。通过课题组前期对多叶棘豆进行的化学成分研究以及结合相关文献表明，多叶棘豆中的主要成分为黄酮类[3-10]，该类成分具有增强免疫、抗炎抗菌、活血化瘀、抑制肿瘤等药理作用。因此本研究首次采用单因素实验优选了多叶棘豆总黄酮的提取条件，并建立了以芦丁为对照品，通过三氯化铝显色法进行测定，并计算总黄酮含量的有效方法，同时测定了16批不同产地、不同采集时间多叶棘豆总黄酮的含量，以期为多叶棘豆药材的后续研究提供参考。

1 仪器、试剂与材料

UVmini-1280型紫外-可见分光光度计(岛津苏州有限公司)；KQ-500E超声仪(昆山市超声仪器厂)；Sartorious BT 25S型分析天平(十万分之一，北京赛多利斯有限公司)。芦丁标准品(批号K16D7B26927)购买于上海源叶生物试剂公司；实验用水均为蒸馏水。16批多叶棘豆药材采集或购买信息见表1，由内蒙古医科大学渠弼教授鉴定为多叶棘豆Oxytropis myriophylla(Pall)DC.的全草。

表1 多叶棘豆药材来源

2 方法与结果

2.1对照品溶液的制备 取5.02 mg芦丁对照品，精密称定，甲醇定容，配制成0.5020 mg/mL的对照品溶液，摇匀后于4 ℃冰箱中冷藏备用。

2.2供试品溶液的制备 精密称取药材粉末0.15 g，于具塞锥形瓶中，加入25 mL 50 %甲醇溶液，称定质量，超声提取30 min，放冷后称重，用相同浓度溶液补足减失质量，摇匀过滤后取续滤液即得。

2.3显色方法 精密吸取待测溶液1.0 mL，置于10 mL容量瓶中，加入1.0 mL 1 %三氯化铝溶液，甲醇定容后静置15 min。

2.4最大吸收波长的确定 分别精密量取供试品滤液和标准品溶液0.80 mL和1.00 mL，按“2.3”项下方法显色，以不加样品的相同溶剂为空白，于200～800 nm波长范围内扫描，结果表明二者吸收曲线基本一致，最大吸收波长均为275 nm，且无干扰，故选择其作为测定波长。

2.5含量测定方法学考察

2.5.1线性关系考察 精密吸取对照品溶液各0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mL，显色后于275 nm处测定吸光度。以吸光度(A)为纵坐标，浓度C(mg·mL)为横坐标绘制标准曲线，得回归方程为Y = 0.0377X + 0.0704(r=0.999 2)，结果表明芦丁对照品在0.251 mg/mL～1.506 mg/mL的浓度范围内线性关系良好，结果见图1。

图1 芦丁标准曲线

2.5.2精密度试验 取多叶棘豆药材粉末，按“2.2”项下的方法制备供试品溶液，显色后于275 nm处重复测定6次吸光度，计算得吸光度的RSD为0.02 %，表明仪器精密度良好。

2.5.3稳定性试验 取多叶棘豆药材粉末，按“2.2”项下的方法制备供试品溶液，显色后分别于0、2、4、6、8、12、24 h内于275 nm处测定吸光度，按“2.5.1”项下方法计算得总黄酮含量的RSD为1.76 %，说明溶液在24 h内稳定。

2.5.4重复性试验 取多叶棘豆药材粉末，按“2.2”项下方法平行制备供试品溶液6份，显色后于275 nm处测定吸光度，按“2.5.1”项下方法计算得总黄酮含量的RSD为1.01 %，说明本方法重复性良好。

2.5.5加样回收率试验 精密称取多叶棘豆药材粉末0.15 g，平行称定9份，分别精密加入相当于药材中已知总黄酮含量的80 %、100 %、120 %倍量的芦丁对照品溶液，平行3份，测定吸光度。计算结果见表2。

表2 加样回收率试验

2.6总黄酮提取条件单因素试验

2.6.1提取溶剂的选择 精密称取多叶棘豆粉末0.15 g，取不同浓度提取溶剂各25 mL，置于具塞锥形瓶中，称定质量，超声提取30 min，放冷后用相应溶剂补足减失质量，摇匀并过滤，按“2.5.1”项下方法计算，结果显示50 %甲醇溶液提取后所测得的含量最高，见图2。

图2 提取溶剂的选择

2.6.2提取方法的选择 精密称取2份药材粉末各0.15 g用于考察回流提取和超声提取的效果。两份分别按“2.5.1”项下方法计算，结果显示两种提取方法下测得的总黄酮含量无显著差异，故选择超声提取法。

2.6.3提取时间的选择 精密称取药材粉末0.15 g，加入25 mL 50 %甲醇，分别超声提取不同时间。按“2.5.1”项下方法计算，结果显示超声提取30 min时制备的供试品液总黄酮含量测定值最高，见图3。

图3 提取时间的选择

2.6.4浸泡时间的选择 精密称取药材粉末约0.15 g，加入25 mL 50 %甲醇，分别采用不浸泡、浸泡30 min、浸泡60 min的处理，超声提取30 min，按“2.5.1”项下方法计算，结果显示不浸泡直接提取所得的总黄酮含量最高。见图4。

图4 浸泡时间的选择

2.6.5取样量的选择 分别精密称取不同质量的药材粉末，按“2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.5.1”项下方法计算，结果显示取样量为0.15 g时总黄酮含量最高。见图5。

图5 取样量的选择

因此，本研究在单因素优选的基础上确定多叶棘豆总黄酮的最佳提取条件为：取样量0.5 g，加入25 mL的50 %甲醇溶液，超声提取30 min。在该提取条件下总黄酮提取效果较为理想。

2.7总黄酮的含量测定 精密称取不同批次的多叶棘豆药材粉末0.15 g，平行3份，制备得供试品溶液，按“2.5.1”项下方法进行计算，结果见表3。

表3 样品含量测定结果

3 小结

本文首次采用单因素实验确定了多叶棘豆中总黄酮的最佳提取条件，并建立了多叶棘豆中总黄酮含量测定的方法。本方法稳定可靠，可用于多叶棘豆总黄酮的含量测定。

首次测定了产自内蒙古地区的16批多叶棘豆蒙药材中总黄酮的含量，结果表明多叶棘豆总黄酮含量在8.60～36.01 mg/g范围内，由于采集地不同，采集时间不同，差异较大；采集时发现有些样品明显为多年生、但是没有开花，如S9和S11样品中总黄酮含量较低。