c-MYC蛋白及S100A6在多发性骨髓瘤中的表达及意义

崔文婷，胡苏，黄燕，欧阳鹏，冯波

（九江市第一人民医院血液科，江西 九江332000）

多发性骨髓瘤（multiple myeloma，MM）是一种临床中常见的浆细胞恶性疾病，发病机制较为复杂，目前尚未明确，分析可能与辐射、环境及年龄等因素密切相关[1]。若治疗不及时，极有可能导致患者的骨骼和肾功能出现损伤，并出现高钙血症现象，严重影响患者的身心健康。通常情况下，临床多使用靶向分子药物治疗该病，虽能取得一定效果，但不能完全治愈，还需进一步研究，以探寻更为合适的靶点进行治疗，从而达到治愈的目的[2]。钙周期蛋白S100A6是细胞外功能-手形结构的信号分子之一，在胃癌、肝癌、乳腺癌及多发性骨髓瘤中均呈高表达。c-MYC基因是一种拥有永生能力的基因，临床研究[3]显示，MM的发病原因和疾病进展与c-MYC基因重排和突变密切相关，人体内的大多数基因均能经过c-MYC途径对MM细胞造成影响，从而导致MM细胞凋零。基于此，本研究旨在探究c-MYC蛋白及S100A6在多发性骨髓瘤（multiple myeloma，MM）中的表达及意义，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料选取2018年1月至2020年1月本院收治的60例MM患者作为研究对象，其中男32例，女28例；年龄45～80岁，平均（65.14±3.21）岁；分型：IgG型31例，IgA型18例，轻链型8例，不分泌型3例；D-S分期：Ⅰ期2例，Ⅱ期35例，Ⅲ期23例；髓外移者21例，无髓外移者39例。所有患者均对本研究知情同意并自愿签署知情同意书。本研究已通过本院伦理委员会审核批准。

1.2 方法采集标本：于患者化疗前及化疗4～6个疗程后取患者3 mL的骨髓（肝素抗凝），并以1∶1的比例添加至淋巴细胞分离液中，随后采取离心的方式收集中间层细胞，800 r/min离心30 min，离心后使用RPMI 1640培养液进行清洗，以分离单核细胞。

荧光定量PCR法检测MM的c-myc蛋白及S100A6表达：采用TRIzol试剂提取分离获得的化疗前后患者的单核细胞总RNA，并使用蛋白核酸分析仪测量RNA的浓度和纯度。使用cDNA第一链合成试剂盒将RNA反转录成cDNA，以cDNA作为模板，使 用Real time PCR Master Mix（SYBR Green）试剂盒扩增PCR后检测c-myc蛋白及S100A6的表达。

细胞及细胞培养：血液科实验室将MM U266细胞置于37℃的培养箱中进行培养并保存，取对数生长期的U266细胞进行后续实验。

实时荧光定量PCR法检测S100A6 siRNA转染后U266细胞中c-MYC、S100A6的表达：收集S100A6 siRNA转染后的各组U266细胞，并严格按照实时荧光定量PCR法检测各组骨髓单个核细胞的c-MYC、S100A6表达水平。连续进行6次实验。

1.3 统计学方法采用SPSS 22.0统计学软件分析数据，计量资料以“±s”表示，采用t检验，计数资料以[n（%）]表示，采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同分期MM患者骨髓单个核细胞c-myc、S100A6表达水平c-MYC、S100A6表达与MM临床分期均存在相关性（P＜0.05），见表1。

表1 不同分期MM患者骨髓单个核细胞c-MYC、S100A6表达水平[n（%）]

2.2 患者化疗前后骨髓c-MYC和S100A6表达水平比较化疗后，MM患者骨髓c-MYC、S100A6表达水平均明显低于化疗前，差异有统计学意义（P＜0.05），见表2。

表2 患者化疗前后骨髓c-MYC和S100A6表达水平比较（±s）

表2 患者化疗前后骨髓c-MYC和S100A6表达水平比较（±s）

注：c-MYC，c-MYC基因；S100A6，S100钙结合蛋白A6

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2.3 髓外转移MM患者c-MYC和S100A6的表达水平比较髓外转移MM患者的单个核细胞S100A6、c-MYC表达水平均均明显低于无髓外转移MM患者，差异有统计学意义（P＜0.05），见表3。

表3 髓外转移MM患者c-MYC和S100A6的表达水平比较（±s）

表3 髓外转移MM患者c-MYC和S100A6的表达水平比较（±s）

注：c-MYC，c-MYC基因；S100A6，S100钙结合蛋白A6

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3 讨论

MM属于血液系统疾病，在我国的发病率较高，较难治愈，且该病的病程较长，危害性较大。近年来，我国的检测技术水平不断提升，临床也逐渐提高了对分子生物学研究的重视程度。肿瘤的发生及发展过程较为复杂，主要由多因素、多基因及多阶段共同组成，其中还有大量的信号分子在该过程中发挥重要作用，但具体哪种作用尚无研究证实[4]。

S100蛋白家族是指存在EF-手形结构的钙结合蛋白信号分子，家族成员众多，个别成员在肿瘤的发生与发展进程均具有异常的表达，且该类信号分子还能在肿瘤细胞增生、凋零及迁移过程中发挥作用[5]。此外，S100蛋白家族还能通过不同成员配形的方式与RAGE、EGFR和TLR4等部分受体相互结合，从而起到介导肿瘤发展的作用，其中，RAGE是一种免疫球蛋白超家族的多配体信号受体，能在炎症和肿瘤的发病过程中产生作用，而RAGE在激活后，转录因子NFKB、MAP及粘附分子在内的各种细胞内信号分子均能发生活化，该类分子会随着RAGE配体的改变而改变。此外，S100蛋白家族中的部分成员还能通过自分泌及旁分泌的方式在细胞外释放，释放后可与S100A12、S100B等分子有机结合，从而发挥出更大的作用[6]。S100A6是S100蛋白家族中的一员，是一种位于细胞内部的蛋白，其蛋白分子接近10 235分子量，其活性形式均为二聚体，在充分与钙离子相互结合后，可完全暴露EF-手型经典区，该区能充分与多样性的靶蛋白有机结合，但主要作用尚无权威证实，还需进一步研究证实。据相关研究[7]显示，S100A6能在肝细胞中提高表达，在促进肝细胞肿瘤增生中发挥重要的作用。此外，还有研究[8]表明，与良性细胞相比，S100A6的表达水平在胰腺恶性细胞中较高，可见S100A6能对胰腺癌患者的预后因素产生影响。c-MYC属于可易位基因，能调节多种物质，在骨髓瘤发生及疾病进展的过程中均能起促进作用，因此，临床可将该基因作为治疗骨髓瘤的靶点。S100A6与Annexin 2一致，均属于钙调节相关的蛋白，这两种蛋白在肿瘤中共同表达，能在一定程度上加快肿瘤的生长。临床研究[9]显示，S100A6与Annexin 2在胰腺癌共同表达，能加快胰腺癌细胞的运动，而在口腔鳞状细胞癌中共同表达，能加快肿瘤细胞的增生和迁移。此外，Annexin 2还能经c-MYC通路作用于恶性肿瘤中，但主要作用尚未明确。近年的研究结果[10]表明，c-MYC基因重排、突变及mRNA水平升高与MM发生和发展密切相关，人体内的大多基因均通过c-MYC途径对MM细胞造成侵蚀，而S100A6与肿瘤增殖、浸润及凋零中的关联较为密切，因此，在各种实体肿瘤中均存在较为异常的表达，可见c-MYC与S100A6在MM患者中呈高表达。在使用荧光定量PCR法对患者进行检测后发现，c-MYC、S100A6表达与MM临床分期均存在相关性。由此可见，MM患者的c-MYC、S100A6表达水平较高。c-MYC基因是骨髓瘤和淋巴瘤研究领域的重点内容，在骨髓瘤中，大部分与肿瘤相关的基因均能相互结合，使其作用获得进一步增强，有利于加快肿瘤的生长与转移，而S100A6与c-MYC的表达呈正相关。本研究结果显示，化疗后，MM患者骨髓单个核细胞c-MYC、S100A6表达水平均明显低于化疗前（P＜0.05）。表明c-MYC、S100A6在化疗前的表达水平较高。c-MYC属于原癌基因，其功能较为多样，主要位于染色体8q24上，该基因不仅含有转录因子的功能，还能抑制细胞的分化、进展及凋零。小鼠浆细胞瘤实验[11]证实，人类多发性骨髓瘤中存在c-MYC的重排和过度表达，是影响预后的不良因素之一。有报道[12]显示，S100A6在骨髓瘤髓外转移的患者中表达增高，且极有可能直接在骨髓迁移中发挥作用，可见S100A6可能参与骨髓瘤发生发展的过程，但具体作用还需进一步研究证实。本研究结果还显示，存在髓外转移MM患者单个核细胞c-MYC、S100A6表达水平明显高于无髓外转移MM患者（P＜0.05）。表明存在髓外转移的MM患者，c-MYC、S100A6表达水平较高。

综上所述，使用荧光定量PCR法检测MM患者骨髓单个核细胞c-MYC、S100A6表达水平后发现，c-MYC、S100A6在化疗前及存在骨髓外转移MM患者中的表达水平均较高，但c-MYC、S100A6在MM中的主要作用机制还需进一步的研究证实。