猪圆环病毒3型检测方法研究进展

尹佳彤，马湘海，袁晨阳，成 豫

(西北农林科技大学动物医学院，陕西 杨凌 712100)

0 引言

猪圆环病毒目前已知有3个血清型，分别为猪圆环病毒1型(PCV1)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪圆环病毒3型(PCV3)。PCV1一般被认为不致病；PCV2能够引起猪皮炎肾病综合征(PDNS)、断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)、呼吸系统疾病、繁殖障碍疾病等；PCV3感染严重危害猪群体健康。本文就PCV3近年来检测方法研究进展进行综述，以期为PCV3检测和研究提供参考。

1 分子生物学检测

近年来，除了常规PCR方法外，还有套式PCR、荧光定量PCR、双重PCR、环介导等温扩增技术等检测技术被应用于PCV3检测。

1.1 常规PCR

常规PCR广泛应用于病毒核酸的检测，是诊断动物疾病的重要方法。姜玲玲等通过不断优化PCR反应体系和反应条件，建立了PCV3 PCR检测方法。该方法具有较高灵敏度，能特异扩增出长度为649 bp的目的片段，扩增的最低模板量为0.143 ng/μL，用该PCR检测方法对屠宰场送检的376份样品进行检测，PCV3平均阳性率达12.9%[1]。该方法对PCV3具有良好的检测效果。

1.2 套式PCR

套式PCR可以降低在错误片段上配对和扩增的概率。张静等使用2对特异性引物，通过两轮PCR反应进行DNA片段扩增，建立了PCV3套式PCR检测方法，该检测方法仅对PCV3检测阳性，最低检测限为17.4拷贝/μL的质粒模板，特异性强、敏感度高、简便易操作，适用于PCV3临床样品检测[2]。

1.3 荧光定量PCR

荧光定量PCR重复性和稳定性良好。徐朋丽等根据Rep基因高度同源保守区，设计1对引物，建立了检测PCV3的SYBR Green Ⅰ 荧光定量PCR方法，该方法PCV3最低检测值为21.9拷贝/μL[3]。陈如敬等同样基于Rep基因设计特异性引物及探针，建立了TaqMan实时荧光定量PCR方法，该方法适用于PCV3检测，其中PCV3的最低检测值为42.2拷贝/μL[4]。畅通等则根据PCV3 Cap基因核苷酸序列，建立了一种高灵敏度的TaqMan荧光定量PCR检测方法[5]。

1.4 双重PCR

双重PCR检测方法能够很好解决2种病毒混合感染时的检测问题。温海京等不断优化PCV2和PCV3 的PCR检测方法条件，建立了一种针对PCV2和PCV3的双重PCR检测方法。该方法检测PCV2、PCV3的灵敏度分别是610拷贝/μL、800拷贝/μL，高于已有报道，虽然较各自单独PCR检测率稍低，但并无显著差异，适用于早期快速检测PCV2与PCV3[6]。赵宇等建立了一种针对PCV3和猪伪狂犬病毒(PRV)的双重PCR检测方法。其引物设计与合成是基于PRV gE和PCV3 Rep基因保守区域。该方法检测PRV和PCV3的极限分别为502.0拷贝/μL和91.2拷贝/μL[7]。

1.5 环介导等温扩增技术

环介导等温扩增技术(LAMP)具有检出率高、检验条件方便的优点。朱小甫等根据PCV3全基因序列，设计了4条引物，建立了检测PCV3的LAMP方法。此种LAMP方法检测限为10个拷贝/μL的质粒模板，利用此方法和常规PCR方法检测84份样品，两种方法符合率达到97.6%。而LAMP方法操作更加简便，能够用于PCV3现场检验[8]。

2 血清学检测

血清学检测方法目前主要有原位杂交技术(ISH)、免疫组织化学技术(IHC)、间接酶联免疫吸附实验(iELISA)、间接免疫荧光(iIFA)等。

PCV3 Cap蛋白在PCV3血清学检测方法中起到重要作用。葛玉凤等建立了一种PCV3重组Cap蛋白间接ELISA抗体检测方法。阳性检测血清样品OD450≥0.363，阴性检测血清样品OD450≤0.315。该方法灵敏度高，操作简便，对PCV3抗体的最低检出效价可达1:25 600[9]。何博等将PCV3 ORF2基因截短表达，将纯化后的重组蛋白作为包被抗原，建立了检测PCV3抗体的间接ELISA方法[10]。陈如敬等以PCV3去核定位信号 Cap蛋白作为抗原建立了检测PCV3抗体的间接ELISA检测方法[11]。

3 结语

猪圆环病毒病对于猪养殖业健康发展有着重大影响，PCV3作为近年来新发现的病毒，其在生产上的危害不能被忽视。目前对于PCV3的各项研究正处于积极探索阶段，相信随着研究的深入，能够建立更加灵敏及简便的PCV3的检测方法。各大养殖场在日常管理中也要加强对于PCV3的检测，做到早预防、早检测、早治疗，最大限度控制疫病的传播，减小经济损失。