miRNA-572、miRNA-218与老年患者术后认知功能障碍相关性分析

李丹妮， 高鹏飞， 洪晓雅， 王 焕， 王海啸， 李 懔

南京医科大学附属淮安第一医院1.麻醉科；2.胃肠外科，江苏 淮安 223300

术后认知功能障碍是一种常见的术后并发症，好发于老年患者[1-2]。有研究报道，25.8%的患者在术后7 d发生认知功能障碍，12.7%的患者在术后3个月发生认知功能障碍[3]。由于认知功能障碍常导致住院时间延长、生活质量下降、社会依赖性增加及医疗费用增加[4]，因此，阐明其潜在的分子机制对预防、诊断和治疗认知功能障碍非常重要。miRNA-572和miRNA-218是一种微小RNA，已被证实在多种疾病和肿瘤中发挥重要作用[5]。有研究发现，在恶性肿瘤、心血管疾病和精神疾病的患者中，均可发现miRNA-572和miRNA-218的异常表达[6]。大量miRNAs已被证实在神经系统的发育、学习、记忆等认知过程中发挥关键作用[7-10]。然而，miRNAs在认知功能障碍中的具体作用及其机制尚不完全清楚。本研究旨在探讨血清miRNA-572、miRNA-218表达水平与老年患者术后认知功能障碍的相关性。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取自2019年12月至2020年12月于南京医科大学附属淮安第一医院行腹腔镜下直肠癌根治术的132例老年患者为研究对象。纳入标准：年龄≥65岁；临床资料完整；手术治疗前简易精神状态量表(mini-mental state examination，MMSE)评分≥27分。排除标准：术前认知功能障碍；伴有严重的心、脑、肺、肾等重要器官功能障碍；精神类药物服用史；恶性肿瘤；失访。根据术后1 d的MMSE评分[11]将患者分为A组(非认知功能障碍，n=74)与B组(认知功能障碍，n=58)。两组患者一般资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。见表1。本研究经医院伦理委员会批准。患者及家属均签署知情同意书。

表1 两组患者一般资料比较/例(百分率/%)

1.2 麻醉方法 患者术前8 h禁食，术前2 h禁水，采用咪达唑仑、依托咪酯、瑞芬太尼和罗库溴铵进行麻醉，并进行气管插管辅助患者呼吸。

1.3 主要试剂及仪器 RNA提取试剂盒(批号：258741)、RNA反转录试剂盒(批号：215788)、RT-qPCR试剂盒(批号：125877)购自上海优宁维生物有限公司；伯乐Mini-PRO荧光定量PCR仪、AU全自动生化分析仪购自美国伯乐公司。

1.4 总RNA提取及RT-qPCR检测 手术前1 d清晨抽取患者空腹外周静脉血3 ml，根据RNA提取试剂盒说明书提取外周血总RNA，利用反转录试剂盒得到cDNA，-80℃保存备用。RT-qPCR体系：SYBR Green qPCR SuperMix 16.25 μl，特异性引物2.0 μl，模板cDNA3.25 μl，DEPC水补足至30 μl。反应条件：95℃，10 min；95℃，10 s；60℃，30 s；70℃，30 s；共40个循环。设置3个复孔，根据公式(2-ΔΔCT法)计算、分析miRNA表达情况。

1.5 血清指标检测 于手术前1 d采集患者空腹静脉血2 ml，按照试剂盒说明书操作步骤对患者血样进行前处理，处理完成后使用全自动生化分析仪检测患者血液中甘油三酯(triglyceride，TG)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterin，LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol，HDL-C)。

1.6 随访 采用门诊或电话问诊的方式对所有研究对象进行为期6个月的随访，随访过程中关注患者恢复及复发情况。采用改良Rankin量表(mRS量表)进行评分，其中0分为完全正常；1分为有轻微症状，但能够独自完成日常活动；2分为不能完成病前活动，有轻微功能障碍，能够自己照顾自己；3分为中度残疾，需要他人照顾日常活动，但可自己正常行走；4分为中重度残疾，日常行为活动需要他人照顾，无法自己行走；5分为重度残疾，表现为大小便失禁，卧床；6分为患者死亡。mRS评分0～2分的患者为预后良好，3～6分为预后不良[12]。

2 结果

2.1 两组患者血清miRNA-572、miRNA-218水平比较 B组血清中miRNA-572水平高于A组，miRNA-218水平低于A组，两组比较，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 两组患者血清miRNA-572、miRNA-218水平比较

2.2 两组患者血清指标比较 B组LDL-C高于A组，两组比较，差异有统计学意义(P<0.05)。两组患者TG、HDL-C水平比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见表3。

表3 两组患者血清指标比较

2.3 ROC曲线分析 ROC曲线分析结果显示，miRNA-572、miRNA-218和LDL-C的ROC曲线下面积分别为0.902、0.811和0.684，最佳截点值分别为7.23、4.04和4.12，诊断认知功能障碍的灵敏度分别为91.4%、82.8%和69.0%，特异度分别为86.5%、78.4%和59.45%。见图1。

图1 各指标对老年手术患者术后认知功能障碍诊断的ROC曲线

2.4 Logistic回归分析 多因素Logistic回归分析结果显示，LDL-C>4.12 mmol/L、miRNA-572>7.23、miRNA-218<4.04是老年手术患者出现认知功能障碍的独立危险因素(P<0.05)。见表4。

表4 Logistic回归分析

2.5 预后良好与预后不良患者miRNA-572、miRNA-218表达情况比较 根据mRS量表评分，B组中21例预后良好，37例预后不良。预后不良患者血清miRNA-572、miRNA-218高表达频率分别为86.21%(25/37)、37.83%(14/37)，与预后良好的19.04%(4/21)、66.67%(14/21)比较，差异均有统计学意义(P<0.05)。

3 讨论

有研究发现，在认知功能障碍患者血清中可检测到miRNA-572呈现高表达状态[13]。miRNA-218是一种具有肿瘤生长抑制作用的微小RNA，与神经系统的发育密切相关。高表达的miRNA-218可有效地促进神经系统的发育[14]。本研究中，B组患者血清中miRNA-572表达水平显著高于A组，而miRNA-218表达显著低于A组，表明miRNA-572的异常增高和miRNA-218异常降低可能是导致老年手术患者发生认知功能障碍的原因之一，其引起患者出现认知功能障碍的机制可能为血清中miRNA-572升高后靶向抑制miRNA-218表达，而低表达的miRNA-218会引发术后患者神经功能异常，导致认知功能障碍。本研究根据mRS量表对认知功能障碍患者的预后情况进行了分析，结果发现，预后不良患者血清miRNA-572高表达频率高于预后良好患者，miRNA-218高表达频率低于预后良好患者，提示miRNA-572和miRNA-218与认知功能障碍患者预后密切相关，其结果可作为认知功能障碍预后的参考之一。

胆固醇水平在认知功能中起重要作用[15]。本研究中，B组LDL-C水平高于A组(P<0.05)，提示血清LDL-C水平高于正常值的患者往往存在明显的认知功能障碍[16]。本研究ROC曲线分析结果显示，miRNA-572、miRNA-218和LDL-C对于认知功能障碍均具有较高的诊断价值；Logistic回归分析发现，LDL-C>4.12 mmol/L、miRNA-572>7.23、miRNA-218<4.04均是老年患者术后出现认知功能障碍的影响因素(P<0.05)。因此，应密切关注此类患者，防止疾病的发生。本研究存在一定的局限性，后续应进行细胞研究，进一步验证miRNA-572与miRNA-218的相互作用。

综上所述，在认知功能障碍患者的血清中，miRNA-572表达水平异常升高，miRNA-218表达水平异常降低，miRNA-572和miRNA-218的异常表达可能引发老年术后患者认知功能障碍。