抗C1q联合TIGIT及ZBTB20在系统性红斑狼疮中临床诊断价值

田 玉， 马丽艳， 韩玉祥， 靳洪涛， 齐 晅， 薄世伟， 郭惠芳

河北医科大学第二医院1.风湿免疫科；2.影像科，河北 石家庄 050000

系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus，SLE)是一种复杂的自身免疫性疾病，可严重威胁患者生命，具有多种临床特征。SLE表现与多种自身抗体、随后的免疫复合物形成和沉积，以及其他免疫过程有关[1]。SLE患者的死亡可能与狼疮活动、治疗并发症或长期后遗症等有关，由于不能早发现、早诊断而演变成为重症或伴发重要脏器受损的患者较多，其中，肾损害在SLE患者中较为常见[2-3]。SLE患者发生肾损害早期阶段一般无特征性临床症状，肾功能生化检查也处于正常水平[4]。因此，确定SLE早期筛查生物标志物十分重要。抗C1q抗体属于免疫球蛋白G型自身抗体，是免疫补体经典途径始动分子相关抗体，对SLE的发病及进展有重要作用，结合抗原后，刺激机体免疫系统产生大量抗体，激活补体，增强炎症反应，造成肾损伤[5]。TIGIT是一种抑制性共刺激分子，与其配体CD155相互作用，向免疫细胞传导负性信号，在SLE的发生和发展中起着关键作用[6]。近年有研究报道，ZBTB20是淋巴细胞分化的重要转录因子，在多种免疫细胞中表达，通过调控免疫细胞相关增殖、分化通路参与免疫反应，可诱导异常的体液免疫反应，通过抗原刺激B细胞，浆细胞增殖分化成能分泌抗体的浆细胞和记忆细胞，引起自身免疫性疾病的发病[7-8]。本研究通过检测并比较抗C1q抗体、TIGIT及ZBTB20水平，分析各项标志物单项检测及联合检测在诊断SLE方面的价值。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取自2019年1月至2021年1月于河北医科大学第二医院风湿免疫科诊断为SLE的120例患者作为观察组，按照内生肌酐清除率(creatinine clearance，Ccr)再将患者分为Ccr<80 ml/min的SLE无肾损伤组(n=69)和Ccr≥80 ml/min的SLE合并肾损伤组(n=51)。纳入标准：(1)符合《系统性红斑狼疮诊断及治疗指南中华医学会风湿病学分会》[9]中关于SLE疾病的诊断标准；(2)半年内均未采取任何治疗措施；(3)临床资料完整。排除标准：(1)营养不良；(2)近半年接受过补充铁剂、输血、促红细胞生成素等治疗；(3)发病前已存在感染、出血、恶性肿瘤、糖尿病等；(4)合并自身免疫性胃炎、自身免疫性肝炎、风湿或类风湿等其他免疫性疾病及甲状腺功能异常；(5)肝功能障碍；(6)有嗜酒史、外伤。另选取同期来我院进行常规体检的47例体检者作为健康组。健康组中，男性4例，女性43例；年龄18～50岁，平均年龄(38.13±3.08)岁。观察组中，男性11例，女性109例；年龄19～49岁，平均年龄(38.01±4.22)岁。两组研究对象的一般资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。本研究经本院医学伦理委员会审核通过。所有研究对象均签署知情同意书。

1.2 研究方法

1.2.1 酶联免疫吸附试验法检测抗C1q抗体 于清晨抽取研究对象的空腹静脉血3～5 ml，1 000～2 000 r/min、离心15 min，采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)检测抗C1q抗体，具体操作步骤严格按照抗C1q抗体测定试剂盒使用说明书进行(合肥莱尔生物科技有限公司)。

1.2.2 流式细胞术检测TIGIT及ZBTB20 于清晨抽取研究对象的外周血5～7 ml，抗凝，1 000～2 000 r/min、离心15 min，采用流式细胞术检测TIGIT及ZBTB20，具体操作步骤严格按照TIGIT及ZBTB20测定试剂盒(流式细胞术)使用说明书进行(中生北控生物科技股份有限公司)。

2 结果

2.1 两组抗C1q抗体、TIGIT及ZBTB20 mRNA比较 观察组的抗C1q抗体、TIGIT及ZBTB20 mRNA水平均高于健康组，组间比较，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 两组抗C1q抗体、TIGIT及ZBTB20 mRNA比较

2.2 观察组患者两个亚组的抗C1q抗体、TIGIT及ZBTB20 mRNA比较 SLE合并肾损伤组患者的抗C1q抗体、TIGIT及ZBTB20 mRNA水平均高于SLE无肾损伤组，组间比较，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 观察组患者两个亚组的抗C1q抗体、TIGIT及ZBTB20 mRNA比较

2.3 抗C1q抗体、TIGIT及ZBTB20 mRNA单项检测及联合检测对SLE合并肾损伤的诊断效能 依据Ccr≥80 ml/min为SLE合并肾损伤的诊断标准，分析显示，抗C1q抗体+TIGIT+ZBTB20 mRNA三者联合检测诊断SLE合并肾损伤的AUC、灵敏度及特异度均显著优于各指标单项检测及两两联合检测。见表3。

表3 抗C1q抗体、TIGIT及ZBTB20 mRNA单项检测及联合检测对SLE合并肾损伤的诊断效能

3 讨论

SLE是一种由环境、遗传等因素引起的以B淋巴细胞异常活化、自身抗体产生、免疫复合物沉积为主要病理特征的自身免疫性疾病[10-11]。SLE的临床表现复杂多样，血清中有以抗核抗体为主的多种致病性抗体存在，真正的发病机制目前尚未完全明确[12]。随着疾病进展，SLE可影响多个末端器官，尤其是肾，常威胁患者的生命安全[13]。

SLE患者的细胞过度凋亡，形成众多凋亡小体，从而暴露自身抗原并出现大量自身抗体[14]。其中，C1q通过与抗原抗体复合物相结合，刺激免疫补体经典途径被激活，对凋亡细胞碎片的清除和免疫复合物的清除具有促进作用，防止组织免疫性损伤。抗C1q抗体是免疫补体经典途径始动分子相关抗体，通过与免疫复合物结合，刺激补体活化能力增强，促进炎症反应，损伤肾功能[15]，对SLE的发病及进展起关键作用。正常状态下，机体内仅有少量免疫复合物存在，被补体刺激而活化的巨噬细胞吞噬清除，当机体内的免疫复合物大量形成时，将超过单核吞噬细胞清除能力，残余的免疫复合物会随血液累及到肾，刺激炎症反应发生，炎性因子进一步加重对肾组织的损害，此过程中经典途径、旁路途径及凝集素途径被激活，大量的C1q产生，进一步诱导机体产生抗体[16-17]。TIGIT是一种含有T细胞免疫球蛋白和免疫受体蛋白酪氨酸抑制模体结构域的抑制性受体，通过与相应配体CD155和CD112结合发挥抑制作用[18]，促进B细胞活化，加重病情。ZBTB20又被称为树突细胞来源的POZ锌指蛋白，参与了对免疫细胞的增殖及分化的调控，能够对浆细胞增殖进行调节，同时还对免疫球蛋白的分泌起到促进作用[19]。本研究结果显示，SLE患者的抗C1q抗体、TIGIT及ZBTB20 mRNA均显著升高，且SLE合并肾功能损伤患者的抗C1q抗体、TIGIT及ZBTB20 mRNA均升高的更明显，提示抗C1q抗体、TIGIT及ZBTB20 mRNA能够作为临床诊断SLE及发生肾损害的检验标志物。本研究结果与既往研究报道[20-22]结果相一致。

本研究还发现，C1q抗体+TIGIT+ZBTB20 mRNA联合检测诊断SLE合并肾损伤的灵敏度及特异度分别为92.2%和89.4%，约登指数为0.681，AUC为0.959，均显著优于各指标单项检测及两两联合检测。这表明，三者联合检测可以明显提高诊断灵敏度和特异度，避免漏诊和误诊，提高了临床确诊率，对于临床诊断SLE患者发生肾损伤具有重要的价值。

综上所述，SLE患者的抗C1q抗体、TIGIT及ZBTB20水平明显升高，且SLE发生肾损伤患者的抗C1q抗体、TIGIT及ZBTB20水平更高，三者联合检测对SLE及其合并肾损伤具有较高的诊断价值。