一例猪肺疫疫情的诊断体会

于泓

（山东省平邑县畜牧兽医局保太畜牧兽医站 273300）

猪肺疫是由猪多杀性巴氏杆菌引起的一种严重危害生猪养殖业的恶性传染病，又被称为猪巴氏杆菌病或猪出血性败血症，民间常称为“锁喉风”。该病发病率较高，可达40%，而死亡率不高仅为5%左右，在我国呈现散发性地方性流行，随着我国规模化养殖业的大规模发展，该病的发病率逐年升高。2020年11月底，某生猪养殖场突然爆发由猪多杀性巴氏杆菌所引起的猪肺疫疫情，发病猪以最急性型和急性型病例为主，部分病猪在发病后24～48h内便死亡。经兽医站专业工作人员诊断并及时诊断治疗，虽仍然有部分病情严重病猪死亡，其他症状较轻病猪均痊愈恢复，疫情得到有效控制，以下将对此次疫病的诊治过程进行逐一介绍。

1 发病情况

2020年11月底某个育有1000头左右生猪的生猪养殖场内突然出现6只发病猪，发病猪的临床症状主要表现为精神沉郁、体温升高、呼吸困难且咳嗽，呼吸方式呈腹式或犬坐呼吸。虽饲养人员及时发现病情并将患病猪群隔离，同时对圈舍及使用器械进行紧急消毒。但第二天仍然有13头生猪表现出类似症状，且隔离的病猪开始出现死亡。养殖场场主察觉异常后，及时与基层兽医站的专业技术人员联系，经病原学检测后确定为猪多杀性巴氏杆菌引起的猪肺疫疫病，经及时诊断与治疗，19头发病猪病死7头，治愈12头。

2 临床表现

最初发病的病猪主要表现为最急性型的临床症状，患猪突然发病，呼吸困难，体温升高可达41～42℃，食欲饮欲下降，并在发病后24h内死亡。而后续发病的病猪主要表现为急性型临床症状，体温升高，呼吸困难，发病初期主要表现为干咳，随着病情的延长转变为湿咳。猪咳嗽时有明显的疼痛感，听诊时有啰音和摩擦音，随着病程的进一步发展，患猪呼吸状况更加严重，表现为犬式呼吸或腹式呼吸，可视黏膜因缺氧、发绀。

3 解剖变化

对病死的生猪进行剖检可发现最急性型的死亡病猪全身黏膜、浆膜、皮下有散在的点状出血；全身淋巴结颌下淋巴结、颈上淋巴结、肠系膜淋巴结等出血、切面呈红色，肺脏充血水肿；急性型病死猪因病情较长，炎症反应较为明显，剖检可观察到明显的纤维素性坏死性肺炎、心包炎和胸膜炎等。全身的黏膜、浆膜及实质器官和淋巴结等有明显的败血症病变[1]。

4 病原鉴定

无菌采集发病死亡生猪的腹腔液或实质脏器、淋巴结组织进行触片检测，使用革兰氏、瑞氏和印度墨汁等染色液进行染色镜检，革兰氏染色结果发现大量阴性、大小不一的球杆菌；瑞氏染色结果发现两极呈明显浓染，符合巴氏杆菌的染色特性；印度墨汁染色结果显示，短杆菌周围有明显的荚膜。将培养物接种于鲜血琼脂培养基进行纯化培养，结果发现，该菌在血平板上生长情况旺盛，形成圆形微隆起的半透明灰白色露珠样菌落。为了对病原进行进一步检测和针对性治疗，将纯培养物接种于液体培养基，然后进行PCR检测、生化鉴定和药敏学检测。

5 生化鉴定

为了对分离的病原微生物进行生化鉴定，将培养好的病原纯培养物接种于各类生化培养基，生化鉴定结果为甘露醇+、葡萄糖+、乳糖+、阿拉伯糖+、山梨醇+、麦芽糖+、木糖+、蔗糖+、果糖+、H2S试验+、MR-、还原性硝酸盐试验-、明胶液化-，将纯培养的生化鉴定结果与伯杰氏手册进行对照，发现结果符合巴氏杆菌的生化鉴定结果，可初步确定本次疫情是由猪巴氏杆菌所引起，但具体亚型还需进一步鉴定。

6 分子生物学检测

为了对巴氏杆菌亚型进一步鉴定，利用商品化的细菌基因组提取试剂盒提取分离培养物的基因组DNA，参考文献并设计合成了针对性巴氏杆菌16SrRNA的同样引物和多杀性巴氏杆菌Kmt1基因的鉴定引物进行PCR扩增。将扩增结果进行核酸电泳检测，结果发现，16SrRNA引物扩增出大小为1500bp左右的特异性条带，kmt1引物扩增出450bp大小左右的特异性条带，将PCR产物送至生物科技公司进行测序并将测序结构在NCBI数据库中进行Blast比对分析发现，引起此次疫情的病原为多杀性巴氏杆菌，且kmt1基因可以作为快速诊断该病原的特异性基因。

7 药敏试验

为了能针对性地选择治疗本次疫病的有效药物，防止细菌耐药性的产生，笔者采用K-B纸片法对本次分离的病原微生物进行药敏检测，药敏试验采用含5%马血清的TSA固体培养基，培养时间、操作方法和判定标准依照于临床实验室标准化协会制定的CLSIM100的最新参考标准[2]。药敏试验结果发现，本次分离到的猪多杀性巴氏杆菌分离株对环丙沙星、诺氟沙星和氧氟沙星高度敏感，对多西环素、红霉素、阿奇霉素中度敏感，对包含杆菌肽、氯霉素、多粘菌素、卡那霉素、呋喃妥因、青霉素、四环素、克林霉素、利福平、头孢吡亏等多种抗生素耐药，为一株耐药谱广泛的高度耐药菌株，这一定程度上增大了治疗难度，也凸显出药敏试验筛选有效药物的重要性。

8 防治方法

当发现猪群有可疑病例时，需及时将疑似发病生猪和健康生猪进行隔离，并对圈舍、饮水用具、运输工具等相关物品使用过氧乙酸或氯制剂进行严格消毒，消毒需每天1次，连续7d，直到疫情不再发生。本次疫情发生后饲养人员虽及时将发病生猪和健康猪群进行隔离，但仍未能阻止疫情的进一步蔓延，这可能是由于消毒不彻底或疫情发现不及时导致的。

根据本次疫情的分离菌株的药敏结果，使用环丙沙星、诺氟沙星和氧氟沙星等抗生素对发病猪群进行联合给药和交替给药，以防细菌产生耐药性，视发病猪群的痊愈情况进行给药3～5d，也可以使用多西环素、红霉素、阿奇霉素等中度敏感性药物进行辅助治疗，同时应加强饲养管理，以提高猪群的基础免疫力。

对未死亡的奶牛进行紧急免疫猪多杀性巴氏杆菌灭活疫苗，每头2～3ml。

经过本次合理有效的紧急防控与治疗，除最急性型病猪因病程较短，死亡较快全部死亡外，急性型病猪仅死亡1头，其余病猪全部治愈，有效控制了本次疫情并挽回企业的损失。

9 体会

猪肺疫病原猪多杀性巴氏杆菌是一种条件性致病菌，其可以寄生于健康猪群的咽喉等器官内，当动物免疫能力下降时引起动物发病。本次疫病发生的最主要原因可能是秋冬季节气温骤变，导致动物应激，同时由于饲养管理不当，消毒不彻底等多方面原因。所以，饲养人员在平时饲养时要加强饲养管理，保证充足合理的饮食饮水，注意通风、保暖、干燥以减少动物应激[3]。

在对发病猪群进行治疗时，选择对本次分离株高度敏感的环丙沙星、诺氟沙星和氧氟沙星等抗生素进行联合给药和交替给药，因此，在药物治疗后发病猪群病情有明显好转，且大部分病猪痊愈，这提示我们进行药敏检测筛选合理药物的重要性。