快速评估过氧化氢酶的方法研究

2021-11-30张秀红李雪梅

养殖与饲料 2021年5期

关键词：色卡条带过氧化氢

尤雅张秀红黄甜李雪梅孟勇

绵阳禾本生物工程有限公司，四川绵阳621000

目前市售商品过氧化氢酶种类繁多，质量良莠不齐。多数评判过氧化氢酶的方法是采用酶学性质比较，但此方法操作繁琐，耗费时间。本文旨在建立一套快速评估过氧化氢酶的方法，为使用者选择过氧化氢酶提供基础。

1 材料与方法

1.1 试验材料

选取4 个不同厂家的液体过氧化氢酶，分别编号A、B、C、D；德国默克（MERCK）过氧化氢快速检测试纸条，操作方法见说明书。

1.2 试验试剂与仪器

1）主要试剂。30%过氧化氢、无水磷酸二氢钠、十二水合磷酸氢二钠、硫代硫酸钠、硫酸等，以上试剂均为分析纯。

2）仪器设备。78HW-1 数显恒温磁力搅拌器，杭州仪表电机有限公司；SHA-CA 水浴恒温振荡器，常州冠军仪器制造有限公司；碱式滴定管；pH 计，成都世纪方舟科技有限公司。

1.3 试验方法

对过氧化氢酶A、B、C、D 进行酶活检测、电泳图谱及过氧化氢试纸条试验。

1）酶活检测。采用硫代硫酸钠滴定法，对A、B、C、D 进行酶活检测。

2）NATIVE-PAGE 电泳图谱。参照文献[1]方法，测定A、B、C、D 的蛋白质分子质量。

3）过氧化氢试纸条试验。用纯水将样品A、B、C、D 酶活统一稀释成10 万倍；配制0.1%的过氧化氢溶液，分别调至pH 2.5、pH 3.5、pH 11.5；取同一pH 值的过氧化氢溶液100 mL，分别加入统一酶活的过氧化氢酶，酶添加量0.02%；每分钟用过氧化氢试纸条检测溶液中过氧化氢的残留。

2 结果与分析

2.1 酶活检测

4 种过氧化氢酶的检测酶活与厂家标识酶活差异较大，A、C 检测酶活低于标识酶活，B、D 检测酶活高于标识酶活。

2.2 NATIVE-PAGE 电泳图谱

4 种过氧化氢酶电泳图谱的差异，A 主条带蛋白分子质量在95 ku 附近；B 主条带蛋白分子质量在130 ku 附近；C 和D 电泳图谱相似，主条带蛋白分子质量分别在72，95 和130 ku 附近。

2.3 过氧化氢试纸条试验

此试验中颜色越深表示过氧化氢残留越多，过氧化氢酶降解过氧化氢效果越差。

1）pH 2.5 条件下，4 种过氧化氢酶的试纸条结果。在pH 2.5 条件下，B 在反应4 min 时试纸条变为无色，对比标准比色卡过氧化氢含量为0 mg/L，表明溶液中过氧化氢已被降解完；A、C、D 在反应4 min 时试纸条颜色仍为深蓝，超出标准比色卡颜色范围，且与0 min 颜色无差异，表明溶液中过氧化氢几乎没被降解。

2）pH 3.5 条件下，4 种过氧化氢酶的试纸条结果。在pH 3.5 条件下，A、B、D 在反应8 min 时试纸条变为无色，表明溶液中过氧化氢已被降解完；C 在反应8 min 时试纸条颜色较浅，对比标准比色卡过氧化氢含量在0.5 mg/L 左右，表明溶液中还有微量的过氧化氢没被降解。

3）pH 11.5 条件下，4 种过氧化氢酶的试纸条结果。在pH 11.5 条件下，A、C、D 在反应5 min 时试纸条变为无色，表明溶液中过氧化氢已被降解完；B 在反应5 min 时试纸条颜色较浅，对比标准比色卡过氧化氢含量在0.5～2.0 mg/L，表明溶液中还有微量的过氧化氢没被降解。

3 讨论

从试纸条试验可以看出，在pH 2.5 条件下，B降解过氧化氢效果最好，A、C、D 几乎没有降解效果，表明B 耐酸性好，A、C、D 不耐酸，在pH 2.5 时均已失去活性。在pH 3.5 条件下，A、B、D 降解过氧化氢效果相当，略优于C。在pH 11.5 条件下，A、C、D 降解过氧化氢效果相当，略优于B，表明4 种过氧化氢酶均有良好的耐碱性。

4 种酶的不同，其蛋白分子质量不一样，C 和D的条带相似，但与A、B 各不相同，可能是因为其生产过程不一样，如菌种、生产工艺不同，导致4 种过氧化氢酶存在差异。