草莓叶片植株再生技术

王禹

（黑龙江省农科院园艺分院 黑龙江，哈尔滨150069）

优质种苗是草莓优质高效生产栽培的前提保障[1]。草莓种苗的繁育方式一般采用田间无性繁殖[2]，在繁殖过程中易造成病毒病的感染及传播，导致草莓品种的种性退化，出现植株生长势变弱、结果能力下降及抗病性降低等问题[3]，致使种苗质量变劣，造成草莓生产产量降低[4]。张利英等试验研结果显示采用植物组培手段进行草莓种苗繁育具有显著的提纯复壮作用[5]，在实际生产中，除了利用组织培养技术保持或恢复物种特性外，还要探索易掌握的有效途径，便于应用及推广。本文从材料选择、不定芽诱导，植株培养、驯化及驯化管理等方面介绍了草莓叶片植株再生技术育苗，以期促进组培种苗生产及应用。

1 培养基的制备及工具准备

所有培养基均采用MS+植物激素+7g/L 琼脂+25～30g/L 白糖，PH5.4～6.0，0.103MPa，121℃，湿热灭菌20min。无菌水、滤纸及接种工具，0.103MPa，121℃，湿热灭菌30min[1]。

2 材料选择

选择展叶后生长15～20 d且无病虫害的叶片。此时叶片生长旺盛，且易消毒处理。

3 材料处理

采集的叶片在流水状态下冲洗20min（水流要小，否则刮伤叶片），置于超净工作台中无菌水冲洗2次。酒精消毒 40s，无菌水冲洗 3 次，每次 1min 以上。Agcl2消毒5min，无菌水冲洗3次，每次1min以上。将叶片顺着叶脉方向切成1cm×1cm 大小，叶基部不要切掉，此部位最易产生不定芽。

4 再生植株培养

4.1 不定芽诱导

将切好的叶片，接种到不定芽诱导培养基上。不定芽培养基采用MS+1mg/L TDZ+0.5mg/L 6-BA+0.3mg/L 2,4-D，暗培养20 d后，光照培养14 h/d、20 d；将叶片褐化部分切掉，带已生出的不定芽或者愈伤组织继续转到不定芽诱导培养基中培养40 d。

培养条件：白天温度25℃±2℃，夜间不低于18℃；光照强度为2500lux～3000lux；相对空气湿度40%～60%。

4.2 不定芽增殖

将不定芽从叶片切下，切成不超过0.5cm×0.5cm 大小的丛生团，接种到增殖培养基上。增殖培养基采用MS+2 mg/L TDZ+0.1 mg/L 6-BA，30 d转接一次。

培养条件：白天温度25℃±2 ℃，夜间不低于18℃；光照强度为2500lux～3000lux，光照时间14 h/d，；相对空气湿度40%～60%。

4.3 生根培养

将不定芽切成不超过0.5cm×0.5cm 大小的丛生团，接种到MS+0.5 mg/L培养基上进行生长培养。

待植株长至1 cm高时，将组培苗切成单株，接种到生根培养基上。生根培养基采用MS+0.2 mg/L IBA[6]。

培养条件：白天温度25℃±2℃，夜间不低于18℃；光照强度为2500lux～3000lux，光照时间12 h/d，；相对空气湿度40%～60%。

5 驯化

5.1 驯化前处理

当组培苗株高2cm 时，将组培苗从培养室移至驯化室，让组培苗提前适应驯化环境。继续生长至株高4cm以上，根系长2cm 以上时，进行驯化。驯化前1d，把瓶盖打开，让组培苗充分适应驯化环境。

5.2 移栽基质

栽基质采用草炭土，拌入30%的百菌清（百菌清：土1:100），30%辛硫磷1000倍液，覆盖塑料布10d。穴盘采用32穴，11cm深，此规格穴盘苗可直接田间定植，中间不用移苗。穴盘浇透水，放置1d，使用前打好孔。

5.3 组培苗栽植

将组培苗根部培养基用30%百菌清500倍溶液洗净，栽入穴盘中，根部保持垂直，不卷曲，栽植原则按照“深不漏根，浅不埋心”。栽好后要把茎基部土壤轻轻压实，浇透水。

5.4 移栽后管理

移栽后遮光率20%～40%、相对空气湿度不高于60%、环境温度20℃～28℃，缓苗前保持土壤湿润即可，15d后驯化成活率可达92%。

缓苗后，穴盘见干浇水即可。30d后根据环境情况预防红蜘蛛及各种真菌、细菌性病害，红蜘蛛可选用73%炔螨特乳油2000倍液或阿维菌素1000倍液；病害可采用甲基托布津1000倍液或使百克熏蒸。每15d 喷1 次0.2%～0.3%磷酸二氢钾溶液，每30d 随浇水追0.2%尿素一次。及时摘除抽生出的匍匐茎、花序、病叶及老叶，留3～5 片健壮叶片即可[7-10]。