荧光定量PCR检测技术在动物检疫中的应用进展

李 波，蒋慧娴，杨 瑾，任志彬，商建成

（1.廊坊海关，河北廊坊 065000；2.张家口海关，河北张家口 075000；3邯郸海关，河北邯郸 056000）

常规PCR技术在应用过程中暴露出了许多的问题，如假阳性、环境污染问题等，这些问题的存在限制了PCR技术的进一步应用。而荧光定量PCR检测技术是当前社会最常用的动物检疫的方法，它本身是很难被替代的，科研人员需尝试找到并解决荧光定量PCR检测技术中存在的缺陷，并进行研究，将荧光定量PCR技术应用到了生物、食品等领域，尤其是在动物检疫方面，本文将具体阐述荧光定量PCR检测技术及其在动物检疫中的应用[2]。

1 荧光定量PCR检测技术简介

荧光定量PCR技术是将荧光基团加入到PCR反应体系中，并在实验过程中，通过对荧光信号积累实时检测整个PCR反应的进程[3]。最后，根据得到的标准曲线对未知的模板进行定量的分析。这一新的检测技术实现了定量检测的目的，比常规PCR技术的运用更加广泛，广大科研人员需要重视这一检测技术在动物检疫中的运用，为动物检疫工作提供新的检测思路和方法，为人们提供更加安全无害的食品。

目前，常见的荧光定量PCR技术有TapMan技术、Amplisensor技术、分子信标技术、LightCycler技术以及复合探针定量PCR技术。其中，TapMan技术被广泛运用到了基因的定量检测中，在荧光定量PCR技术市场中占据着重要的位置，这项技术所运用的原理是Tap酶的5'外切酶的活性。Amplisensor技术是基于复合探针技术的荧光定量PCR技术，这一技术增加了操作步骤，还可能会产生污染，具有一定的局限性。分子信标技术建立的原理是基于荧光共振能量转移原理，可以对扩增得到的产物进行定量检测，而且还能够避免交叉污染。Lightcycler技术是Roche公司开发的一种新的荧光定量PCR技术，它需要合成两个比较长的探针，成本较高。复合探针定量PCR技术需要合成两个探针，一个是荧光探针，另一个是淬灭探针。新型的荧光定量PCR检测技术的成本较低，检测比较快速，并且具有高效性，克服了LightCycler技术和分子信标技术等技术中的不足之处，在原有基础上进行了创新，通过解决原有技术上的短板，成为一种更为先进的技术。荧光定量PCR检测技术相较于传统PCR检测方式具有非常广泛的应用前景。

2 荧光定量PCR检测技术优势

与常规PCR技术相比，荧光定量PCR检测技术能够进行定量分析，而且具有更强的灵敏性以及特异性，还有效解决了常规PCR技术污染性较大的问题。另外，荧光定量PCR检测技术还具有能进行多重反应、准确性较高等优点[4]。这种全新的荧光定量PCR检测技术能够在一定程度上取代传统检测技术，保障人们身体健康安全。随着生活水平的提高，人们在选择食品的时不仅关心价格，还更加注重安全。而肉类是人们生活中必不可缺的营养物质，荧光定量PCR检测技术其相较于常规PCR技术有较大的进步和显著的优势，这一检测技术在动物检疫领域的应用非常广泛，并取得了明显的成效。

3 荧光定量PCR检测技术应用

在动物检疫工作中，其中一项工作是检测金黄色葡萄球菌，但是传统的生化检测方法需要耗费许多的时间，而且灵敏度也不高，不能达到快速检测的目的。为了解决上述问题，科研人员运用荧光定量PCR技术进行了快速检测。如唐吉思等运用荧光定量PCR检测了牛乳中金黄色葡萄球菌肠毒素A基因。在研究过程中，建立了金黄色葡萄球菌肠毒素A基因DNA的SYBR GreenⅠreal-time PCR检测方法。结果显示这一检测方法的特异性较好，为检测牛乳中金黄色葡萄球菌提供了新的检测方法。另外，荧光定量PCR检测技术也可以用来检测炭疽杆菌、大肠杆菌O157∶H7、沙门氏菌等多种细菌。如杜清春等运用荧光定量PCR检测技术建立了一种快速检测炭疽杆菌的方法，在炭疽杆菌感染初期筛查中可有效运用。

荧光定量PCR检测技术也可以用来检测病毒，如猪瘟病毒、猪水疱病病毒、口蹄疫病毒等。如胡骑等为了建立一种可以快速、准确检测O型口蹄疫病毒的TaqMan荧光定量PCR方法，设计了特异性引物和TaqMan探针，并建立了标准曲线，最终结果显示，这一检测方法比传统荧光定量PCR检测技术灵敏10倍以上，能够更加快速、准确地检测出O型口蹄疫病毒。Hui-Hua Zheng等运用荧光定量PCR同时检测了猪瘟病毒和猪圆环病毒3型。结果表明，这一检测方法的线性度、重复性和再现性都比较高，是检测猪瘟病毒和猪圆环病毒3型的可靠方法。

4 结语

运用荧光定量PCR检测技术开展动物检疫工作是非常有效的，科研人员需对荧光定量PCR检测技术进行深入的研究，并要将其广泛运用到动物检疫工作中，从而能够确保食品的安全性[5]。荧光定量PCR检测技术的出现可提高食品安全水平，肉类是人们生活中的必需品，人们生活水平的提高也让人们不仅重视价格，更重视食品安全和营养价值。随着互联网信息时代的到来，任何细微的问题都可以通过信息得知并被不断放大，而肉类的主要来源是各种家畜，动物检疫工作需要更加严谨，荧光定量PCR检测技术的出现可有效解决此问题，通过对传统PCR检测技术的改进，保障肉类食品的安全，推动食品行业稳定发展。