原发性肝癌的分子诊断标记物研究进展

文 /黄志卓

我国肝癌（HCC）患病率占全球一半左右，全球新发HCC病例约为40万，我国占20万左右，且每年11万人中死亡率占50%左右，占全球HCC死亡率45%左右[1-2]。该疾病主要是机体肝内胆管细胞及肝细胞受到多种因素影响而产生癌变，若未对其实施针对性治疗，可严重危及患者生命安全[3]。相关研究显示[4]，HCC在恶性肿瘤可极易诱发患者死亡，且多见于男性患者，年龄主要集中在40岁左右，同时具有预见性差、发病快等症状，因此针对性对该疾患者实施早治疗、早诊断具有重要意义。由于病因众多，发病机制复杂，只有在早期检测诊断中及时发现问题，采取相关治疗措施，才能保证患者存活率和生活质量。临床检测中对于原发性肝癌的诊断通常以影像学检查、肝穿刺、血清甲胎蛋白（AFP）检测为主。取活体组织进行肝脏疾病的诊断，但肝脏穿刺比较痛苦，常常出现患者不愿配合、感染、出血等诸多问题[5-6]。目前采用血清进行肝功能检查逐渐成为临床上常用的诊断方式，具有无创性、重复性好、准确性高、患者配合程度高、能反映不同肝病患者的肝功损害程度等优点[7]。虽然基本可以有效检测患者的肿瘤情况，但是检测结果详细情况和准确率仍有待提高。

1 HCC血清诊断分子

1.1 甲胎蛋白（AFP）

AFP在结构上与人类的血清蛋白十分相似，是由胎儿发育早期肝脏与卵黄囊组成的一种血清蛋白，在肝细胞受损后，肝功能下降，其数值也会出现增高，肝癌细胞产生的AFP具有促进肿瘤生长的作用，并抑制免疫系统作用，因此AFP水平可反映肿瘤生长情况是临床诊断肝癌重要参考指标[8-9]。目前AFP是国际上公认的用于筛查肝癌的最好的肿瘤标记物，若患者的AFP水平长时间持续高于400～500 ug/L时，采用肝脏超声与AFP的联合检测可以有效地早期诊断早期肝癌[10]。

1.2 血清谷氨酰转肽酶（GGT）

血清GGT与AFP均有癌胚特性，GGT是一种质膜糖蛋白，血清中的GGT主要来自肝脏，主要存在于人体肝肾肠道等组织中，当肝内阻塞时，能诱导肝细胞分泌大量的GGT[11-12]。当肝脏实体肿瘤组织生长时，细胞肿胀、压迫肝细胞，肝细胞受到挤压的刺激，使得正常肝细胞受激产生大量GGT，合成和分泌GGT增加，同时肝癌细胞本身也能产生大量GGT，释放到外周血液中，故血清GGT水平明显增加，有时甚至高达600IU/L以上[13]。

1.3 透明质酸

透明质酸是一种氨基葡萄糖聚糖，它由一系列重复的二糖组成，β-dN-乙酰葡糖胺和β-d-葡萄糖醛酸通过β-1,4和β-1,3糖苷结合连接，肝脏是合成透明质酸的重要器官。在肝脏中，透明质酸被窦状内皮细胞降解，血清透明质酸水平可能受肝细胞损伤和炎症反应诱导的星状细胞转化为肌成纤维细胞的影响，因此透明质酸在肝内的半衰期非常短（2-5分钟），当发生肝癌时，肝细胞清除及降解透明质酸的能力下降，血清透明质酸浓度升高，因此透明质酸浓度升高可能和肝细胞受损相关。

2 HCC候选组织诊断分子

2.1 热休克蛋白70(Heat Shock Protein 70，HSP70)

HSP70在正常细胞中表达较低，但在应激后表达明显增加。寡核苷酸芯片被用于检测人类肝细胞癌及其邻近组织，结果显示，95个基因可区分早期肝癌及其周围组织，92个基因可区分早期肝癌和晚期肝癌，实时RT-PCR和免疫组化证实HSP70表达上调，因此，HSP70可能是鉴别肝脏良恶性疾病一个潜在的组织分子标志物[14]。

2.2 谷氨酰胺合成酶(Glutamine Synthetase，GS)

GS催化肿瘤细胞主要能量来源于谷氨酰胺的合成，GS在癌前病变、早期肝癌和晚期肝癌中的阳性率分别为1/23、4/31、19/149。GS、HSP70的敏感性和特异性分别为72%和100%。因此，联合检测GS、HSP70是肝癌早期诊断的理想指标[15]。

3 其他相关分子

3.1 DNA甲基化

DNA甲基化是肿瘤中最常见的分子改变之一，采用甲基化敏感性随机扩增PCR技术对92个HCC基因的甲基化谱进行研究后发现，有32个基因的甲基化频率有变化，其中与早期肝癌相关的基因有14个，如CSPG2、OXCT、cyclin和RASSF1A等；与晚期肝癌相关的基因有9个，如DBCCR1、PENK、IRF7等[16]。这些基因的甲基化变化有待进一步验证，其中一些可能是诊断肝癌的潜在分子。

3.2 微RNA(microRNA，miRNA)

MiRNA作为单链非编码的小分子RNA，能够与靶基因mRNA发生结合，从而引发降解或者翻译抑制效果，进一步对靶蛋白表达水平进行影响，同时在信号通路中具有意义。MiRNA异常的表达水平与多种肿瘤的发生密切相关，研究发现MiRNA与肿瘤的发生、转移微环境形成、浸润甚至治疗耐受等有密切关系[17]。近年来，众多研究表明MiRNA与肿瘤发生关系密切，主要是通过下调抗肿瘤免疫反应而发挥作用，由于相关的靶基因对肿瘤的作用不同，不同MiRNA在肿瘤中表达情况也存在差异，因而可以根据这种表达差异来判断MiRNA对肿瘤的调控作用[18]。

4 小结

新的分子标记物在研究人员的不懈努力下不断被发现，分子标记物作为在肝细胞肝癌中起调控作用的非编码小分子，在肝癌的诊断、治疗和预后中都有一定的价值[19-20]，可以为肿瘤的早期诊断、靶向治疗、预后评估等提供新思路和新方法，已成为研究热点[21-22]。但每种肿瘤标记物在具体的临床应用当中均会受到不同条件的限制，因此，需要对多种肿瘤标记物进行临床检测，联合检测可在一定程度上提高诊断准确率，进而指导临床的针对性治疗，改善预后[23-25]。