妊娠期高血压患者血清miR-218、miR-155和ET-1水平变化及其与病情严重程度之间的关系*

韩 琪

(郑州大学附属洛阳中心医院 产科，河南洛阳 471000)

妊娠期高血压(hypertensive disorder complicating pregnancy，HDCP)是一种临床常见的妊娠并发症，主要表现为血压升高、水肿等，可以导致早产、低出生体重等母婴不良结局的产生[1]。目前，妊娠期高血压的发病机制尚不清楚，临床主要采用预防抽搐、有指征地降压等方法治疗，但其治疗效果并不理想[2]。分析HDCP发生发展的机制，寻找关键的分子标志物，评估病情进展，指导临床治疗具有重要意义。miRNA是一类具有调控作用的单链非编码RNA，可以与靶RNA结合，在转录或翻译水平上调节靶基因表达，在多种疾病的进展中发挥重要作用[3]。miR-218属于miRNA家族，在HDCP患者血清中水平显著下降，可以靶向抑制性别决定区域转录因子4(sex determining region Y-box 4，SOX4)表达，抑制滋养层细胞的迁移和侵袭，在HDCP患者中表达明显下降[4]。miR-155是近年来发现的与免疫系统、心血管系统、妇科生殖系统等多种疾病有关的miRNA，可以靶向调节叉头蛋白O3A(fork head protein O3A，FOXO3a)蛋白表达，调节HDCP大鼠的血压变化[5]。内皮素(endothelin-1，ET-1)是一种存在于各组织细胞的血管活性物质，可以收缩血管，调节血压和血流变化，参与HDCP的发生发展[6]。但HDCP患者血清miR-218、miR-155和ET-1水平变化研究报道较少，且其水平变化与患者病情严重程度之间的关系尚不清楚。因此，本研究分析了HDCP患者血清miR-218、miR-155和ET-1水平变化，并进一步分析了其水平变化与患者病情严重程度之间的相关性，旨在为临床HDCP的治疗提供一定的理论基础。

1 对象与方法

1.1对象 选择2018年6月～2020年6月本院收治的148例HDCP患者，年龄21～35岁，平均(28.51±3.24)岁，孕周35～39周，平均(37.61±2.56)周。根据病情严重程度分为单纯性妊娠期高血压(gestational hypertension，GHP)63例、轻度子痫前期(Mild preeclampsia，MPE)51例和重度子痫前期(severe preeclampsia，SPE)34例。另选择100例同期于本院体检的健康孕妇为对照组，年龄21～35岁，平均(27.96±3.36)岁，孕周35～40周，平均(37.26±2.85)周。两组患者的年龄和孕周无明显差异(P>0.05)。

1.2纳入与排除标准 纳入标准：符合《妊娠期高血压疾病诊治指南(2015)》中HDCP的诊断标准[7]，均为单胎，均获得患者及其家属知情同意，经医院伦理委员会通过。排除标准：妊娠前存在高血压、糖尿病疾病等疾病患者；合并心、肝、肾等脏器疾病者；合并自身免疫性疾病者；合并恶性肿瘤、结核者；合并妊娠期糖尿病患者。

1.3观测指标 记录所有研究对象入组时的体重指数(body mass index，BMI)，采用无创血压监测仪检测各组患者的收缩压(systolic blood pressure，SBP)和舒张压(diastolic blood pressure，DBP)。清晨采集孕妇空腹静脉血，离心(3500 rpm，10 min)，分离血清，采用双抗体一步夹心法ELISA检测血清ET-1蛋白水平，严格按照试剂盒说明操作(上海江莱生物科技有限公司)，全自动酶标仪(iMark680，购自美国Bio-rad公司)检测450 nm下各孔的吸光度值，根据标准曲线，计算血清中ET-1水平。采用荧光定量PCR检测血清miR-218、miR-155水平，先经miRNeasy Mini Kit 试剂盒提取血清总RNA，经反转录试剂盒反转录为cDNA，进行定量PCR反应，miR-218(上游引物：5’-ACATGGTTAGATCAAGCACAA-3’，下游引物：5’-TTGTGCTTGATCTAACCATGT-3’)，miR-155(上游引物：5’-CGCGCTTAATGCTAATCGTGA-3’，下游引物：5’-GTGCAGGGTCCGAGGT-3’)，以U6为内参，采用2-△△CT计算相对表达量。

2 结果

2.1HDCP患者的血压 一般资料统计显示，HDCP组患者的BMI与对照组无明显差异(P>0.05)；无创血压监测仪检测结果显示，HDCP组患者的SBP和DBP水平明显高于对照组(P<0.05)，见表1。

表1 HDCP患者的血压

2.2HDCP患者的血清miR-218、miR-155和ET-1水平 RT-PCR检测结果显示，HDCP组患者的血清miR-155相对表达水平明显高于对照组(P<0.05)，血清miR-218相对表达水平明显低于对照组(P<0.05)，ELISA检测结果显示，HDCP组患者的血清ET-1蛋白表达水平明显高于对照组(P<0.05)，见图1。

图1 HDCP患者的血清miR-218、miR-155和ET-1水平

2.3不同严重程度HDCP患者血清miR-218、miR-155和ET-1水平 RT-PCR检测结果显示，GHP组患者血清miR-218相对表达水平明显高于MPE组和SPE组(P<0.05)，血清miR-155相对表达水平明显低于MPE组和SPE组(P<0.05)；MPE组患者血清miR-218相对表达水平水平明显高于SPE组(P<0.05)，血清miR-155相对表达水平明显低于SPE组(P<0.05)。ELISA检测结果显示，GHP组患者血清ET-1蛋白表达水平明显低于MPE组和SPE组(P<0.05)，MPE组患者血清ET-1蛋白表达水平明显低于SPE组(P<0.05)。见图2。

图2 不同严重程度HDCP患者血清miR-218、miR-155和ET-1水平

2.4血清miR-218、miR-155和ET-1与HDCP患者疾病严重程度之间的关系 采用变量赋值，GHP组=1，MPE组=2，SPE组=3，采用Pearson相关性分析显示，HDCP患者血清miR-218水平与患者病情严重程度呈显著负相关(P<0.05)，miR-155和ET-1水平与患者病情严重程度呈显著正相关(P<0.05)。HDCP患者血清miR-218与miR-155、ET-1呈负相关关系(r=-0.412，r=-0.341，P<0.05)，血清miR-155与ET-1呈正相关关系(r=-0.328，P<0.05)。见表2。

表2 血清miR-218、miR-155和ET-1与HDCP患者疾病严重程度之间的关系

3 讨论

HDCP是妇产科常见病，根据病情进展可分为GHP、MPE和SPE等，是导致母婴不良结局的主要原因之一[8-9]。分析HDCP发生发展的机制，指导临床防治工作的进行具有重要意义。本研究中，HDCP患者的SBP和DBP明显高于健康人群，提示临床需密切关注妊娠期的血压变化，及时做好相关的预防治疗措施。本研究中，HDCP患者血清ET-1明显高于健康人群，且随病情进展ET-1的水平明显升高，提示血清ET-1水平变化与HDCP的病情发展有关。ET-1是一种强效的血管收缩因子，可以促进血管收缩，增加血管外周阻力，引起血压升高[10]，提示HDCP患者的血清ET-1水平变化，可评估病情进展，指导临床治疗。

本研究中，HDCP患者血清miR-218明显低于健康人群，miR-155明显高于健康人群，且随着病情进展，血清miR-218水平明显下降，miR-155水平明显升高。miR-218和miR-155均属于miRNA，可以调节靶基因SOX4、FOXO3a等表达，参与调节机体的重要信号通路，参与HDCP的进展[11-12]。Kim等[13]研究显示，miR-155还可以调节内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase，eNOS)的表达，诱导内皮细胞功能紊乱，参与子痫前期的发生发展[13]，提示miR-218的水平变化与HDCP的发生和进展有关，但其具体机制尚需进一步深入研究探索。卢健翔等[14]研究显示，miR-155可以调节滋养层细胞中炎症因子的表达，影响妊娠期胎盘血流供应，促进HDCP的进展。研究结果表明，miR-218和miR-155均可以调节多种基因的表达，参与HDCP的发生的进展。本研究中，HDCP患者血清miR-218、miR-155和ET-1水平均与患者病情严重程度具有显著的相关性，其血清miR-218、miR-155、ET-1之间亦有显著的相关性。杨丽等[15]研究显示，miR-155与血清ET-1水平呈显著的正相关，具有潜在调控内皮功能作用，提示血清miR-218、miR-155和ET-1可以相互作用，共同调节HDCP的发生发展，但其具体的机制尚不清楚，需进一步探索。

综上所述，HDCP患者血清miR-218水平明显下降，miR-155和ET-1水平明显升高，且其水平变化与患者病情严重程度具有显著的相关性。