溶菌酶牙膏美白牙齿的临床试验研究

徐天生 褚夫江 耿帅峰

(1.好易康生物科技(广州)有限公司，广东 广州 510700；2.广东药科大学，广东广州 510006)

牙齿表面存在多种细菌群体，形成细菌性生物膜[1]，其表面分泌许多黏性物质，日常饮食如喝茶、饮咖啡、吸烟等外源性色素常粘附在这些黏性物质上，逐步使牙齿表面变黄或变黑，形成色斑，不仅影响美观，对患者的容貌、心理和生活带来诸多不利影响，又能引起牙体组织和牙周组织的疾病。目前市面上去除牙齿外源性色素的牙膏主要通过三种途径起效。第一种为物理美白法，使用高清洁类磨料美白牙齿，其机理是通过增强磨料与牙齿表面的磨擦，从而去除色素，但该方法为较为单一的物理去除方法，能起到一定的功效，但效果往往在复配化学美白物会更佳，例如复配磷酸盐类化合物，协同增效。第二种为化学美白法，主要通过使用磷酸盐类化合物和过氧化物类化合物美白牙齿，磷酸盐类化合物作用机理是通过磷酸根抑制生物膜的形成，从而抑制色素的附着，同时络合钙离子，进一步降低茶渍、咖啡渍等色素吸附到牙齿表面的概率；过氧化物类化合物的作用机理是通过过氧化物的强氧化性，氧化去除色素。胡德渝等人研究了含有磷酸盐、氟化钠和高清洁二氧化硅的牙膏去除外源性色斑的八周效果，结果可以有效减少外源性色斑[2]。赵晓一等人研究了一种含过氧化物的美白牙膏对外源性色素的去除效果，结果在一定程度上可以去除外源性色素，并且与使用时间成正相关[3]。第三种为生物美白法，以应用酶技术为主，酶是一种安全、高活性生物制剂，近年来，已被逐渐应用于许多牙膏产品，起杀菌消炎、防龋齿、减轻牙龈出血、美白等作用，但目前应用的报告较少。李娜等人研究了右旋糖酐酶、月桂醇硫酸钠和柠檬酸锌抑制牙齿色斑附着效果，结果为右旋糖酐酶有一定的效果，但是没有同比的柠檬酸锌溶液效果好[4]。

溶菌酶(Lysozyme)是唾液中的一种非特异性物质成分，可以抑制微生物生长，与抗生素或其他抑菌物质对比，长期使用溶菌酶不易出现抗药性[5]。溶菌酶能有效地水解细菌细胞壁的肽聚糖，其水解位点是N-乙酰胞壁酸(NAM)的1位碳原子和N-乙酰葡萄糖胺(NAG)的4位碳原子间的β-1.4糖苷键。肽聚糖是细菌细胞壁的主要成份，它是由NAM、NAG和肽“尾”(一般是4个氨基酸)组成，NAM与NAG通过β-1.4糖苷键相连，肽“尾”则是通过D-乳酰羧基连在NAM的第3位碳原子上，肽尾之间通过肽“桥”(肽键或少数几个氨基酸)连接，NAM、NAG、肽“尾”与肽“桥”共同组成了肽聚糖的多层网状结构，作为细胞壁的骨架，上述结构中的任何化学键断裂，皆能导致细菌细胞壁的损伤[6]。

基于溶菌酶有良好的溶菌能力，是人体唾液中的成分之一，具有天然，安全的特性，可以有效溶解牙菌斑中的细菌，瓦解牙菌斑的构造从而使其易于被清除，进而达到美白牙齿的功效。着重研究含我司特制溶菌酶的牙膏在去除牙齿外源性色素上的功效情况。

1 方法

1.1 病例选择

本研究采用随机、平行对照、双盲的临床研究方法。筛选80例符合纳入标准、不属排除标准的受试者。

纳入标准：①同意参加本临床试验并签署书面知情同意书者；②身体健康，年龄在18周岁～65周岁(含18周岁和65周岁)，性别不限，对市售口腔产品或化妆品无过敏史；③口内有12颗天然前牙，且无大面积的充填或冠等修复体；④牙齿有外源性色斑存在。

排除标准：①已知或怀疑对试验药及其辅料由过敏史或严重不良反应，或过敏体质者；②受试者有严重的口腔疾病、慢性病；③目前正参加其他的临床试验；④正在进行正畸治疗或戴有可摘式局部义齿；⑤有晚期的牙周疾病；⑥妊娠或准备妊娠妇女，哺乳期妇女。

1.2 试验方法

本试验采用随机双盲平行对照设计方法，受试者在基线、使用4周、使用8周回访进行口腔情况评估。

1.2.1 试验分组：筛选80例符合要求的受试者，试验组和对照组各40例。

1.2.2 盲法：采用同样白色管进行包装。两组牙膏在外观上一致，用不同的编号区分。牙膏编号由Microsoft Excel软件“=Rand()”函数方法得到的随机数字产生。

1.2.3 牙膏：试验组牙膏为好易康生物溶菌酶牙膏；对照组为不含生物溶菌酶普通牙膏。

1.2.4 使用方法

整个实验期间要求受试者只能用提供的牙膏和牙刷刷牙，根据医生知道的方法每天进行口腔护理，不得使用其他牙膏、牙刷或口腔卫生用品，如漱口水、牙线等。受试者均发给同样的软毛牙刷。要求受试者每天刷牙两次(早晚各1次)，每次刷牙至少3分钟，每次刷牙挤约1cm长牙膏。并要求受试者保持平时日常饮食、饮茶、喝咖啡及吸烟等习惯。临床检查于基线、第4周及第8周进行，并由同一名检查者完成。

1.3 评价指标

牙齿色斑采用Lobene色斑指数(Lobene stain index method)进行评价，用0～3数字来评价牙面色斑面积和色斑程度，如表1。

表1 Lobene色斑指数计分原则

检查牙位为下颌前牙的唇、舌面及上颌前牙的唇面。每个牙面色斑指数计分为该牙面的色斑面积计分和色斑程度计分的乘积。每个受试者的色斑指数计分为各牙面色斑指数计分的平均值，即：

1.4 统计方法

采用SPSS统计软件进行统计分析。所有统计推断均采用双侧检验，具有统计学意义的检验水准定为0.05，参数的置信区间估计采用95%置信区间。

2结果

80例受试者参与试验，其中3人失访，中途退出试验(试验组2例，对照组1例)。完成试验的77例受试者中有6例与方案偏离，这6例参与人口学资料分析、安全性分析，不参与疗效指标分析，其中试验组2例，对照组4例。

2.1 两组基线比较

80例受试者参与试验，77例受试者完成试验，试验组38例，对照组39例。所有参与试验的受试者未发现由牙膏引起不良反应或严重事件。研究人群基本信息如表2以及基线期疗效指标如表3。

表2 研究人群的基线检查情况

表3 试验组和对照组疗效指标基线期分布情况(n=40)

基线期试验组与对照组相比较，牙齿色斑指数不具有显著性差异(P>0.05)。

2.2 临床效果

表4 基线、4周、8周色斑指数比较

基线检查中，试验组和对照组间无统计学差异。4周后，试验组牙齿色斑指数明显低于对照组，相对于对照组色斑指数减少了51.04%，且具有统计学差异(P<0.05)；8周后，试验组牙齿色斑指数显著低于对照组，相对于对照组色斑指数减少了76.03%，且具有统计学差异(P<0.05)。

2.3 依从性

80例受试者参与试验，77例完成试验，有4例未按要求使用牙膏，其中对照组2例，试验组2例。对照组依从性为94.87%，试验组依从性为94.74%。有4例受试者访视超窗，对比4例受试者的疗效指标数据进行了剔除前后的统计分析，发现剔除后与剔除前的统计结论一致

2.4 临床安全性分析

完成试验的77例受试者中发生不良事件4例、严重事例0例，其中对照组4例，试验组0例。经分析评价，此4例不良事件与所使用牙膏可能无关。

3 讨论

3.1 临床试验显示:基线检查中，试验组和对照组间无统计学差异。4周后，试验组牙齿色斑指数明显低于对照组，相对于对照组色斑指数减少了51.04%，且具有统计学差异(P<0.05)；8周后，试验组牙齿色斑指数显著低于对照组，相对于对照组色斑指数减少了76.03%，且具有统计学差异(P<0.05)。因此，好易康生物溶菌酶牙膏与不含溶菌酶的普通牙膏相比， 具有去除牙齿外源性色斑的效果，使用简单方便，有良好的临床适用性。

3.2 溶菌酶作为一种天然蛋白质，存在于人的眼泪、唾液和乳汁中[7]，安全性高，对人体无毒性，也不会在体内残留。随着社会的不断进步以及人们对健康生活的追求越来越高的今天，我们从最初的疾病治疗，亦已慢慢转变为对疾病的预防，所以倡导绿色、安全的功效物质是社会发展所趋，相信生物溶菌酶的应用前景是相当广阔的。