葛根提取物对CCl4致小鼠急性肝损伤的保护作用

陈苑红 陈国权

【摘要】目的：探讨葛根提取物对四氯化碳（CCl4）致小鼠急性肝损伤的保护作用。方法：将60只昆明小鼠随机分为正常对照组、模型组，葛根提取物高、中、低剂量组（400、200、100mg/kg），联苯双酯组（100mg/kg）。连续灌胃给药14 d后腹腔注射0.2% CCl4溶液诱发急性肝损伤，24h后处死小鼠，检测血清中丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、总胆汁酸（TBA）、总胆红素（TBIL）、碱性磷酸酶（ALP）、γ-谷氨酰转移酶（γ-GT）含量和肝组织中总超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px），总抗氧化能力（T-AOC）、丙二醛（MDA）、白介素-1β（IL-1β）、白介素-6（IL-6）、转化生长因子-β（TGF-β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量。结果：与模型组比较，各给药组小鼠ALT、AST、TBA、TBIL、ALP、γ-GT、MDA、IL-1β、IL-6、TGF-β、TNF-α的含量降低（P<0.05或0.01），SOD、T-AOC、GSH-Px含量升高（P<0.05或0.01）。结论：葛根提取物对CCl4致小鼠急性肝损伤具有较好的保护作用，其机制可能与增强抗氧化能力及抗炎作用相关。

【关键词】葛根提取物;急性肝损伤;抗氧化;抗炎

【中图分类号】R285.5【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2021）18-0008-04

Protective Effect of Pueraria Lobata Extract on CCl4-induced Liver Eamage in MiceCHEN YuanhongCHEN Guoquan*

The Third Peoples Hospital of Shunde（Beijiao hospital）， Foshan  528000，ChinaAbstract：Objective To explore the effect of Pueraria lobata extractt on CCl4-induced liver damage in mice.Methods 60 mice were randomly divided into normal control group，model group，Pueraria lobata extract high，medium and low dose groups （400，200，100 mg/kg），and bifendate group （100 mg/kg）. After continuous intragastric administration for 14 days. Acute liver injury model was established by intraperitoneal injection of 0.2% CCl4 olive oil solution. After 24 hours of modeling，the contents of alanine aminotransferase （ALT），aspartate aminotransferase （AST），total bile acid （TBA），total bilirubin （TBIL），alkaline phosphatase （ALP），gamma glutamyltransferase （γ- GT） in serum and total superoxide dismutase （SOD），malondialdehyde （MDA），total antioxidant capacity （T-AOC） glutathione peroxidase （GSH-Px），interleukin-1β （IL-1β），interleukin-6 （IL-6），transforming growth factor-β （TGF-β） and tumor necrosis factor-α （TNF-α） in liver tissue were detected.Results Compared with the group，pueraria extract significantly reduced ALT、AST、TBA、TBIL、ALP、γ-GT、MDA、IL-1β、IL-6、TGF-βand TNF-α levels in mice with acute liver injury（P<0.05 or 0.01），significantly increased SOD，T-AOC，GSH-Px levels（P<0.05 or 0.01）.Conclusion Pueraria lobata extract has a significant protective effect against acute liver injury induced by CCl4 in mice，the mechanism may be related to the enhancement of antioxidant capacity and anti-inflammatory effect.

Keywords：Pueraria lobata Extract; Acute Live Injury; Anti-oxidation; Anti-inflammatory

急性肝損伤是临床上常见的肝脏疾病，许多因素如化学物质、感染、缺血、药物及酒精等均会造成急性肝脏损伤，引发肝功能的不全[1]。临床上，急性肝损伤患者有着血清转氨酶的升高、胆红素升高等表现。长期肝损伤则会导致肝纤维化、肝硬化、肝癌甚至肝衰竭，严重危害人类的身体健康。目前临床上主要使用核苷类似物、维生素类以及保肝降酶等药物进行对症治疗，可供选着的针对性药物较少，并且在治疗过程往往伴随着一定的不良反应的发生[2]。因此，目前仍需寻找安全有效的治疗药物。

葛根是豆科植物野葛或甘葛藤干燥的根，具有透疹、解肌退热、升阳止泻、生津止渴等功效。临床上主要用于阴虚消渴、麻疹不透、脾虚泄泻等疾病的治疗。现代研究[3-4]发现，葛根具有降血压、降血糖、保护心肌缺血再灌注损伤、抗肿瘤、抗脂质过氧化等药理作用，并在保护肝脏方面也具有一定作用。为了进一步研究葛根的肝脏保护作用，研究采用CCl4诱导急性肝损伤模型，探讨葛根对化学毒性物诱导的急性肝损伤的保护研究。

1材料

1.1实验动物昆明小鼠60只，雄性，SPF级，体质量18～22g，购自广东省医学动物实验中心，许可证号：SCXK（粤）2013-0002。

1.2药品与试剂葛根提取物（葛根总黄酮≥60%，批号20180412，西安赛邦生物技术有限公司），联苯双酯滴丸（批号：17070103，北京协和药厂），分析纯四氯化碳（批号：201407，天津市富宇细化工有限公司），丙氨酸氨基转移酶试剂盒（ALT，批号：20180506）、天门冬氨酸氨基转移酶试剂盒（AST，批号：20180516），总胆汁酸试剂盒（TBA，批号：20180412）、总胆红素试剂盒（TBIL，批号：20180604）、碱性磷酸酶试剂盒（ALP，批号：20180203），γ-谷氨酰转移酶试剂盒（γ-GT，批号：20180405）、总超氧化物歧化酶试剂盒（SOD，批号：20180522）、丙二醛试剂盒（MDA，批号：20180325）、总抗氧化能力试剂盒（T-AOC，批号：20180221）、谷胱甘肽过氧化物酶试剂盒子（GSH-Px，批号：20180425）等均购自南京建成生物工程研究所。白介素-1β（IL-1β，批号：EK0394）、白介素-6（IL-6，批号：EK0411）、转化生长因子-β（TGF-β，批号：EK0515）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α，批号：EK0527）检测试剂盒等均购自博士德生物工程有限公司。

1.3仪器全波长酶标仪（Thermo Fisher Scientific公司），紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司），HH-S8数显恒温水浴锅（金坛市医疗仪器厂），台式高速离心机（长沙湘智离心机仪器有限公司）。

2方法

2.1分组、给药及模型制备小鼠适应性喂养1周后进行实验，随机分成正常对照组、模型组、葛根提取物高、中、低剂量组、联苯双酯组，每组10只。采取灌胃给药，正常对照组和模型组灌胃等体积的生理盐水。参考文献剂量[5-6]，葛根提取物高、中、低剂量组给药剂量为400、200、100mg/kg，联苯双酯组给药剂量为100mg/kg。每天一次，連续进行14 d。末次给药2h后，除正常对照组外，其余各组小鼠按10mL/kg的剂量腹腔注射0.2% CCl4橄榄油溶液，正常对照组注射等体积橄榄油。造模24h后，小鼠后眼眶静脉丛取血，颈椎脱臼处死，剥离肝脏。

2.2指标检测血液室温静置1h后，3000r/min离心10min，分离血清，按试剂盒检测方法分别检测血清中ALT、AST、TBA、TBIL、ALP、γ-GT的含量;取同部位肝组织，加入预冷后的生理盐水，冰上进行匀浆，3500r/min离心10min，吸取上清液，按试剂盒的检测方法分别检测肝组织中的SOD、MDA、T-AOC、GSH-Px、IL-1β、IL-6、TGF-β、TNF-α的含量。

2.3统计学方法使用 SPSS 20.0 软件对数据进行统计分析，组间比较采用单因素方差分析或非参数检验，数据采取（x±s）方式进行表示，以P<0.05作为差异有统计学意义。

3结果

3.1各给药组小鼠血清中ALT、AST含量变化与正常对照组比较，造模后，模型组小鼠血清中ALT、AST含量显著性增高（P<0.01）;与模型组比较，葛根提取物高、中、低剂量组和联苯双酯组小鼠血清中ALT、AST含量显著性降低（P<0.05或0.01）。结果见表1。

低剂量组100.0402.02±57.02*249.15±60.86*联苯双酯组100.0321.02±96.16**217.49±62.11**注：与正常对照组比较，#P<0.05，##P<0.01;与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01。3.2各给药组小鼠血清中TBA、TBIL含量变化与正常对照组比较，模型组小鼠血清中TBA、TBIL含量显著性增高（P<0.01）;与模型组比较，葛根提取物高、中、低剂量组和联苯双酯组小鼠血清中TBA、TBIL含量显著性降低（P<0.05或0.01）。结果见表2。

低剂量组100.032.99±6.63*5.11±1.01*联苯双酯组100.030.59±5.07**5.06±0.85*注：与正常对照组比较，#P<0.05，##P<0.01;与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01。3.3各给药组小鼠血清中ALP、γ-GT含量变化与正常对照组比较，模型组小鼠血清中ALP、γ-GT含量显著性增高（P<0.01）;与模型组比较，葛根提取物高、中、低剂量组和联苯双酯组小鼠血清中ALP、γ-GT含量显著性降低（P<0.05或0.01）。结果见表3。

低剂量组100.0143.21±20.02*6.46±1.32*联苯双酯组100.0128.40±26.39**5.67±0.92**注：与正常对照组比较，#P<0.05，##P<0.01;与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01。3.4各给药组小鼠肝组织中SOD、MDA含量变化与正常对照组比较，模型组小鼠肝组织中SOD含量显著性降低（P<0.01），MDA含量显著性增高（P<0.01）;与模型组比较，葛根提取物高、中、低剂量组和联苯双酯组小鼠肝组织中SOD含量显著性升高（P<0.05或0.01），MDA含量显著性降低（P<0.05或0.01）。结果见表4。

3.5各给药组小鼠肝组织中T-AOC、GSH-Px含量变化与正常对照组比较，模型组小鼠肝组织中T-AOC和GSH-Px显著性减低（P<0.01）;与模型组比较，葛根提取物高、中、低剂量组和联苯双酯组小鼠肝组织中T-AOC和GSH-Px显著性升高（P<0.05或0.01）。结果见表5。

低剂量组100.0245.55±30.94**6.38±0.97*联苯双酯组100.0250.87±23.59**6.08±1.05**注：与正常对照组比较，#P<0.05，##P<0.01;与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01。

低剂量组100.01.23±0.22*134.93±12.59**联苯双酯组100.01.44±0.18**141.30±11.27**注：与正常对照组比较，#P<0.05，##P<0.01;与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01。3.6各给药组小鼠肝组织中IL-1β、IL-6含量变化与正常对照组比较，模型组小鼠肝组织中IL-1β和IL-6含量显著性升高（P<0.01）;与模型组比较，葛根提取物高、中、低剂量组和联苯双酯组小鼠肝组织中IL-1β和IL-6含量显著性降低（P<0.05）。结果见表6。

3.7各给药组小鼠肝组织TGF-β、TNF-α含量变化与正常对照组比较，模型组小鼠肝组织中TGF-β和TNF-α含量显著性升高（P<0.01）;与模型组比较，葛根提取物高、中、低剂量组和联苯双酯组小鼠肝组织中TGF-β和TNF-α含量显著性降低（P<0.05或0.01）。结果见表7。

低剂量组100.079.08±17.87*67.57±13.34*联苯双酯组100.068.40±30.61*63.22±19.95*注：与正常对照组比较，#P<0.05，##P<0.01;与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01。

低剂量组100.0146.28±30.03*134.04±33.06*联苯双酯组100.0140.11±32.58**128.56±39.15**注：与正常对照组比较，#P<0.05，##P<0.01;与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01。

4讨论

正常情况下，ALT和AST主要存在肝细胞当中，当肝细胞受损或者发生变性坏死时，二者就会释放入血，引起血液中含量升高。此外，当肝脏发生损伤或者病变时，血液中TBA、TBIL、ALP、γ-GT含量也会显著升高。因此，ALT、AST、TBA、TBIL、ALP和γ-GT均是反映肝细胞损伤程度，评价肝功能的重要指标[7-8]。实验结果显示，葛根提取物能够降低血清中升高的ALT、AST、TBA、TBIL、ALP和γ-GT的含量。提示葛根提取物具有保肝作用。

脂质过氧化反应、炎症反应是急性肝损伤发生的重要机制之一[9-10]。抗脂质过氧化，减轻炎症反应能有效的缓解肝损伤。SOD和GSH-Px是体内抗氧化系统中重要的两种抗氧化酶，起到保护细胞膜結构和功能完整的作用，其含量的多少反映了体内抗氧化能力的高低。MDA作为脂质过氧化的最终产物之一，容易导致细胞的变性坏死，其含量高低可以反映体内过氧化损伤程度。实验结果显示，葛根提取物能提高肝组织中T-AOC、SOD、GSH-Px含量，降低MDA含量，提示葛根提取物具有较好的抗脂质过氧化作用。IL-1β、IL-6、TNF-α和TGF-β是体内重要的细胞因子，正常情况下，其含量处于较低水平。当体内受到危险因素攻击时，其表达升高，则会引发炎症反应，引起肝细胞的坏死，诱导肝实质细胞凋亡。实验结果显示，葛根提取物能降低肝组织升高的IL-1β、IL-6、TGF-β、TNF-α含量，提示葛根提取物具有抗炎作用。

综上，葛根提取物对CCl4致小鼠急性肝损伤具有较好的保护作用，其机制可能与抗脂质过氧化、抗炎相关。参考文献

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1.统计学符号：本刊执行GB3358 1982《统计学名词及符号》的有关规定。统计学符号一律采用斜体表示。

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作者简介：陈苑红（1985-），女，汉族，本科，主管中药师，研究方向为中药学-中药现代化。E-mail：zscyh2006 0518@126.com

通信作者：陈国权（1984-），男，汉族，本科，主治医师，研究方向为临床医学-麻醉学。E-mail：c1g1q1@163.com