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葛根提取物对CCl4致小鼠急性肝损伤的保护作用

2021-11-17陈苑红陈国权

中国民族民间医药·下半月 2021年9期
关键词:抗炎抗氧化

陈苑红 陈国权

【摘要】目的:探讨葛根提取物对四氯化碳(CCl4)致小鼠急性肝损伤的保护作用。方法:将60只昆明小鼠随机分为正常对照组、模型组,葛根提取物高、中、低剂量组(400、200、100mg/kg),联苯双酯组(100mg/kg)。连续灌胃给药14 d后腹腔注射0.2% CCl4溶液诱发急性肝损伤,24h后处死小鼠,检测血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆汁酸(TBA)、总胆红素(TBIL)、碱性磷酸酶(ALP)、γ-谷氨酰转移酶(γ-GT)含量和肝组织中总超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px),总抗氧化能力(T-AOC)、丙二醛(MDA)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、转化生长因子-β(TGF-β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量。结果:与模型组比较,各给药组小鼠ALT、AST、TBA、TBIL、ALP、γ-GT、MDA、IL-1β、IL-6、TGF-β、TNF-α的含量降低(P<0.05或0.01),SOD、T-AOC、GSH-Px含量升高(P<0.05或0.01)。结论:葛根提取物对CCl4致小鼠急性肝损伤具有较好的保护作用,其机制可能与增强抗氧化能力及抗炎作用相关。

【关键词】葛根提取物;急性肝损伤;抗氧化;抗炎

【中图分类号】R285.5【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517(2021)18-0008-04

Protective Effect of Pueraria Lobata Extract on CCl4-induced Liver Eamage in MiceCHEN YuanhongCHEN Guoquan*

The Third Peoples Hospital of Shunde(Beijiao hospital), Foshan  528000,ChinaAbstract:Objective To explore the effect of Pueraria lobata extractt on CCl4-induced liver damage in mice.Methods 60 mice were randomly divided into normal control group,model group,Pueraria lobata extract high,medium and low dose groups (400,200,100 mg/kg),and bifendate group (100 mg/kg). After continuous intragastric administration for 14 days. Acute liver injury model was established by intraperitoneal injection of 0.2% CCl4 olive oil solution. After 24 hours of modeling,the contents of alanine aminotransferase (ALT),aspartate aminotransferase (AST),total bile acid (TBA),total bilirubin (TBIL),alkaline phosphatase (ALP),gamma glutamyltransferase (γ- GT) in serum and total superoxide dismutase (SOD),malondialdehyde (MDA),total antioxidant capacity (T-AOC) glutathione peroxidase (GSH-Px),interleukin-1β (IL-1β),interleukin-6 (IL-6),transforming growth factor-β (TGF-β) and tumor necrosis factor-α (TNF-α) in liver tissue were detected.Results Compared with the group,pueraria extract significantly reduced ALT、AST、TBA、TBIL、ALP、γ-GT、MDA、IL-1β、IL-6、TGF-βand TNF-α levels in mice with acute liver injury(P<0.05 or 0.01),significantly increased SOD,T-AOC,GSH-Px levels(P<0.05 or 0.01).Conclusion Pueraria lobata extract has a significant protective effect against acute liver injury induced by CCl4 in mice,the mechanism may be related to the enhancement of antioxidant capacity and anti-inflammatory effect.

Keywords:Pueraria lobata Extract; Acute Live Injury; Anti-oxidation; Anti-inflammatory

急性肝損伤是临床上常见的肝脏疾病,许多因素如化学物质、感染、缺血、药物及酒精等均会造成急性肝脏损伤,引发肝功能的不全[1]。临床上,急性肝损伤患者有着血清转氨酶的升高、胆红素升高等表现。长期肝损伤则会导致肝纤维化、肝硬化、肝癌甚至肝衰竭,严重危害人类的身体健康。目前临床上主要使用核苷类似物、维生素类以及保肝降酶等药物进行对症治疗,可供选着的针对性药物较少,并且在治疗过程往往伴随着一定的不良反应的发生[2]。因此,目前仍需寻找安全有效的治疗药物。

葛根是豆科植物野葛或甘葛藤干燥的根,具有透疹、解肌退热、升阳止泻、生津止渴等功效。临床上主要用于阴虚消渴、麻疹不透、脾虚泄泻等疾病的治疗。现代研究[3-4]发现,葛根具有降血压、降血糖、保护心肌缺血再灌注损伤、抗肿瘤、抗脂质过氧化等药理作用,并在保护肝脏方面也具有一定作用。为了进一步研究葛根的肝脏保护作用,研究采用CCl4诱导急性肝损伤模型,探讨葛根对化学毒性物诱导的急性肝损伤的保护研究。

1材料

1.1实验动物昆明小鼠60只,雄性,SPF级,体质量18~22g,购自广东省医学动物实验中心,许可证号:SCXK(粤)2013-0002。

1.2药品与试剂葛根提取物(葛根总黄酮≥60%,批号20180412,西安赛邦生物技术有限公司),联苯双酯滴丸(批号:17070103,北京协和药厂),分析纯四氯化碳(批号:201407,天津市富宇细化工有限公司),丙氨酸氨基转移酶试剂盒(ALT,批号:20180506)、天门冬氨酸氨基转移酶试剂盒(AST,批号:20180516),总胆汁酸试剂盒(TBA,批号:20180412)、总胆红素试剂盒(TBIL,批号:20180604)、碱性磷酸酶试剂盒(ALP,批号:20180203),γ-谷氨酰转移酶试剂盒(γ-GT,批号:20180405)、总超氧化物歧化酶试剂盒(SOD,批号:20180522)、丙二醛试剂盒(MDA,批号:20180325)、总抗氧化能力试剂盒(T-AOC,批号:20180221)、谷胱甘肽过氧化物酶试剂盒子(GSH-Px,批号:20180425)等均购自南京建成生物工程研究所。白介素-1β(IL-1β,批号:EK0394)、白介素-6(IL-6,批号:EK0411)、转化生长因子-β(TGF-β,批号:EK0515)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α,批号:EK0527)检测试剂盒等均购自博士德生物工程有限公司。

1.3仪器全波长酶标仪(Thermo Fisher Scientific公司),紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司),HH-S8数显恒温水浴锅(金坛市医疗仪器厂),台式高速离心机(长沙湘智离心机仪器有限公司)。

2方法

2.1分组、给药及模型制备小鼠适应性喂养1周后进行实验,随机分成正常对照组、模型组、葛根提取物高、中、低剂量组、联苯双酯组,每组10只。采取灌胃给药,正常对照组和模型组灌胃等体积的生理盐水。参考文献剂量[5-6],葛根提取物高、中、低剂量组给药剂量为400、200、100mg/kg,联苯双酯组给药剂量为100mg/kg。每天一次,連续进行14 d。末次给药2h后,除正常对照组外,其余各组小鼠按10mL/kg的剂量腹腔注射0.2% CCl4橄榄油溶液,正常对照组注射等体积橄榄油。造模24h后,小鼠后眼眶静脉丛取血,颈椎脱臼处死,剥离肝脏。

2.2指标检测血液室温静置1h后,3000r/min离心10min,分离血清,按试剂盒检测方法分别检测血清中ALT、AST、TBA、TBIL、ALP、γ-GT的含量;取同部位肝组织,加入预冷后的生理盐水,冰上进行匀浆,3500r/min离心10min,吸取上清液,按试剂盒的检测方法分别检测肝组织中的SOD、MDA、T-AOC、GSH-Px、IL-1β、IL-6、TGF-β、TNF-α的含量。

2.3统计学方法使用 SPSS 20.0 软件对数据进行统计分析,组间比较采用单因素方差分析或非参数检验,数据采取(x±s)方式进行表示,以P<0.05作为差异有统计学意义。

3结果

3.1各给药组小鼠血清中ALT、AST含量变化与正常对照组比较,造模后,模型组小鼠血清中ALT、AST含量显著性增高(P<0.01);与模型组比较,葛根提取物高、中、低剂量组和联苯双酯组小鼠血清中ALT、AST含量显著性降低(P<0.05或0.01)。结果见表1。

低剂量组100.0402.02±57.02*249.15±60.86*联苯双酯组100.0321.02±96.16**217.49±62.11**注:与正常对照组比较,#P<0.05,##P<0.01;与模型组比较,*P<0.05,**P<0.01。3.2各给药组小鼠血清中TBA、TBIL含量变化与正常对照组比较,模型组小鼠血清中TBA、TBIL含量显著性增高(P<0.01);与模型组比较,葛根提取物高、中、低剂量组和联苯双酯组小鼠血清中TBA、TBIL含量显著性降低(P<0.05或0.01)。结果见表2。

低剂量组100.032.99±6.63*5.11±1.01*联苯双酯组100.030.59±5.07**5.06±0.85*注:与正常对照组比较,#P<0.05,##P<0.01;与模型组比较,*P<0.05,**P<0.01。3.3各给药组小鼠血清中ALP、γ-GT含量变化与正常对照组比较,模型组小鼠血清中ALP、γ-GT含量显著性增高(P<0.01);与模型组比较,葛根提取物高、中、低剂量组和联苯双酯组小鼠血清中ALP、γ-GT含量显著性降低(P<0.05或0.01)。结果见表3。

低剂量组100.0143.21±20.02*6.46±1.32*联苯双酯组100.0128.40±26.39**5.67±0.92**注:与正常对照组比较,#P<0.05,##P<0.01;与模型组比较,*P<0.05,**P<0.01。3.4各给药组小鼠肝组织中SOD、MDA含量变化与正常对照组比较,模型组小鼠肝组织中SOD含量显著性降低(P<0.01),MDA含量显著性增高(P<0.01);与模型组比较,葛根提取物高、中、低剂量组和联苯双酯组小鼠肝组织中SOD含量显著性升高(P<0.05或0.01),MDA含量显著性降低(P<0.05或0.01)。结果见表4。

3.5各给药组小鼠肝组织中T-AOC、GSH-Px含量变化与正常对照组比较,模型组小鼠肝组织中T-AOC和GSH-Px显著性减低(P<0.01);与模型组比较,葛根提取物高、中、低剂量组和联苯双酯组小鼠肝组织中T-AOC和GSH-Px显著性升高(P<0.05或0.01)。结果见表5。

低剂量组100.0245.55±30.94**6.38±0.97*联苯双酯组100.0250.87±23.59**6.08±1.05**注:与正常对照组比较,#P<0.05,##P<0.01;与模型组比较,*P<0.05,**P<0.01。

低剂量组100.01.23±0.22*134.93±12.59**联苯双酯组100.01.44±0.18**141.30±11.27**注:与正常对照组比较,#P<0.05,##P<0.01;与模型组比较,*P<0.05,**P<0.01。3.6各给药组小鼠肝组织中IL-1β、IL-6含量变化与正常对照组比较,模型组小鼠肝组织中IL-1β和IL-6含量显著性升高(P<0.01);与模型组比较,葛根提取物高、中、低剂量组和联苯双酯组小鼠肝组织中IL-1β和IL-6含量显著性降低(P<0.05)。结果见表6。

3.7各给药组小鼠肝组织TGF-β、TNF-α含量变化与正常对照组比较,模型组小鼠肝组织中TGF-β和TNF-α含量显著性升高(P<0.01);与模型组比较,葛根提取物高、中、低剂量组和联苯双酯组小鼠肝组织中TGF-β和TNF-α含量显著性降低(P<0.05或0.01)。结果见表7。

低剂量组100.079.08±17.87*67.57±13.34*联苯双酯组100.068.40±30.61*63.22±19.95*注:与正常对照组比较,#P<0.05,##P<0.01;与模型组比较,*P<0.05,**P<0.01。

低剂量组100.0146.28±30.03*134.04±33.06*联苯双酯组100.0140.11±32.58**128.56±39.15**注:与正常对照组比较,#P<0.05,##P<0.01;与模型组比较,*P<0.05,**P<0.01。

4讨论

正常情况下,ALT和AST主要存在肝细胞当中,当肝细胞受损或者发生变性坏死时,二者就会释放入血,引起血液中含量升高。此外,当肝脏发生损伤或者病变时,血液中TBA、TBIL、ALP、γ-GT含量也会显著升高。因此,ALT、AST、TBA、TBIL、ALP和γ-GT均是反映肝细胞损伤程度,评价肝功能的重要指标[7-8]。实验结果显示,葛根提取物能够降低血清中升高的ALT、AST、TBA、TBIL、ALP和γ-GT的含量。提示葛根提取物具有保肝作用。

脂质过氧化反应、炎症反应是急性肝损伤发生的重要机制之一[9-10]。抗脂质过氧化,减轻炎症反应能有效的缓解肝损伤。SOD和GSH-Px是体内抗氧化系统中重要的两种抗氧化酶,起到保护细胞膜結构和功能完整的作用,其含量的多少反映了体内抗氧化能力的高低。MDA作为脂质过氧化的最终产物之一,容易导致细胞的变性坏死,其含量高低可以反映体内过氧化损伤程度。实验结果显示,葛根提取物能提高肝组织中T-AOC、SOD、GSH-Px含量,降低MDA含量,提示葛根提取物具有较好的抗脂质过氧化作用。IL-1β、IL-6、TNF-α和TGF-β是体内重要的细胞因子,正常情况下,其含量处于较低水平。当体内受到危险因素攻击时,其表达升高,则会引发炎症反应,引起肝细胞的坏死,诱导肝实质细胞凋亡。实验结果显示,葛根提取物能降低肝组织升高的IL-1β、IL-6、TGF-β、TNF-α含量,提示葛根提取物具有抗炎作用。

综上,葛根提取物对CCl4致小鼠急性肝损伤具有较好的保护作用,其机制可能与抗脂质过氧化、抗炎相关。参考文献

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1.统计学符号:本刊执行GB3358 1982《统计学名词及符号》的有关规定。统计学符号一律采用斜体表示。

2.参考文献:按GB/T 7714-2015《信息与文献  参考文献著录规则》中的顺序编码制著录,依照其在文中出现的先后顺序用阿拉伯数字加方括号角标标出,并将序号置于方括号中,排列于文末。综述类文章参考文献应尽量在25条/篇以上。实验研究

作者简介:陈苑红(1985-),女,汉族,本科,主管中药师,研究方向为中药学-中药现代化。E-mail:zscyh2006 0518@126.com

通信作者:陈国权(1984-),男,汉族,本科,主治医师,研究方向为临床医学-麻醉学。E-mail:c1g1q1@163.com

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