应用SE-μPADs法检测库尔勒市动物源食品中沙门菌的效果评价

◎ 余佳敏，周 瑄，杨焕焕，吴丽丽，张余俊

（1.武汉尚码生物科技有限公司，湖北 武汉 430000；2.湖北省阿克瑞德检验检测有限公司，湖北 武汉 430000；3.湖北中检检测有限公司，湖北 武汉 430000）

沙门菌广泛分布在人与动物的肠道中，属革兰阴性直杆菌，其菌型较为复杂，已成为人畜共患的病原菌，对猪沙门菌病、鸡白痢、流产、副伤寒等疾病的发生与发展具有重要意义，受到临床重点关注[1-2]。相关数据显示[3]，由沙门菌引起的食源性疾病占全部动物源疾病的首位，随着沙门菌感染的患病率不断升高，由此造成的食物中毒事件不断增多。基于此，临床选择快速有效且准确的检测方式，对沙门菌感染的预防和控制具有重要作用[4]。本文利用SE-μPADs法测定样品中沙门菌情况，并对此展开试验，以快速检测动物性食品中沙门菌的污染。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

样品：收集库尔勒市羊肉22份、牛肉30份、鸡蛋20份作为观察对象。

材料：营养肉汤、四硫磺酸钠煌绿增菌液、亚硫酸铋培养基、木糖赖氨酸脱氧胆盐琼脂、营养琼脂、沙门菌显色培养基、蛋白胨缓冲液、亚硒酸盐胱氨酸增菌液、无水乙醇、SE-μPADs试纸和沙门菌菌株等。

仪器：恒温培养箱、压力蒸汽灭菌器、电子天平、电泳仪、多功能振荡器和水平电泳槽。

1.2 方法

样本处理：分别称取5 g羊肉、牛肉、鸡蛋，切碎（或打散）后放入营养肉汤内，均匀摇晃3 min，添加蛋白胨缓冲液，密封后置于37 ℃培养箱，时间15 h。

沙门菌检测：在处理后的样本内添加亚硒酸盐胱氨酸及四硫磺酸钠煌绿增菌液，放入培养箱中，18 h后接种于琼脂培养基上。利用水煮法提取沙门菌培养基上的疑似菌株的菌落DNA，并实施PCR检测，其中invA-F引物序列为GTGAAATTATCGCCACGTTCGGGCAA，invA-R引物序列为TCATCGCACCGTCAAAGGAACC，16S-F为AGAGTTTGATCCTGGCTCAG，16S-R为GGTTACCTTGTTACGACTT。invA基因PCR参数94 ℃、5 min，95 ℃、30 s，55 ℃、30 s，70 ℃、30 s，70 ℃、10 min，重复30次。阳性对照模板设置成沙门菌标准菌株的DNA。

选择样本（1 mL）放入离心管内，37 ℃条件下以180～200 r·min-1速度培养，5 h后将其置于SE-μPADs点样区，再将其置于37 ℃培养箱培养90 min。各组选择不添加菌液的蛋白胨缓冲液。在沙门菌底物区域加入固蓝B盐，显色后检查SE-μPADs显色结果，试纸双侧显色结果与阳性均为紫色即为阳性；而显色区域与对照组均为粉色即为阴性。随后对SE-μPADs区域进行扫描，利用专用软件测定试纸的灰度。显色区域的灰度超出对照组即为检出沙门菌；若灰度值低于对照组则未检出。

1.3 观察指标

统计羊肉、牛肉以及鸡蛋的SE-μPADs检测结果，并对比SE-μPADs与国家标准方式的灵敏度与特异度，设定真阳性为a，假阴性为b，真阴性为c，假阳性为d，灵敏度=a/（a+b）×100%，特异度=c/（c+d）×100%[5]。

1.4 统计学处理

选取SPSS19.0系统计算数据，其中x—±s表达计量数据，选择t检查，而百分比表达计数数据，选择χ2检查，两组数据存在差异后选用P＜0.05表达。

2 结果与分析

2.1 SE-μPADs的检测结果

经SE-μPADs检测，发现羊肉阳性率为13.64%，牛肉阳性率为13.33%，鸡蛋阳性率为10.00%，见表1。

表1 SE-μPADs的检测结果表

2.2 SE-μPADs的灵敏度与特异度

SE-μPADs的灵敏度为80.00%（4/5），特异度为100.00%（67/67）；国家标准方式的灵敏度为100.00%（4/4），特异度为98.53%（67/68），两者相比无显著差异（P＞0.05），见表2。

表2 SE-μPADs的灵敏度与特异度表

3 结论与讨论

临床针对沙门菌感染多选择常规培养方式，其虽然取得过一定的应用价值，但检验时间通常为5 d左右，检验时间较长，从而限制其在临床的应用，此外，复杂的生化反应可提升常规培养的复杂程度，同时加重检验部门的工作负担与压力，甚至延长产品转运及储存时间，显著增加检验费用[6]。

近年来，随着检验技术的完善发展，SE-μPADs检测方式被提出，其在动物性食品的检测中效果显著[7]。本次研究结果表明，SE-μPADs检测的羊肉阳性率为13.64%，牛肉阳性率为13.33%，鸡蛋阳性率为10.00%；SE-μPADs灵敏度为80.00%，特异度为100.00%；与国家标准方式相比无显著差异（P＞0.05），证实SE-μPADs的灵敏度与特异度较高，可成为动物源食物中检出沙门菌的重要方式。

经分析发现，沙门菌广泛存在于环境中，尤其是库尔勒市养殖场以及菜市场周边土壤、水质中较多见，极易使畜禽受到感染，而畜禽作为菜市场肉制品的主要来源，若未能够积极控制其污染源，易导致污染传播扩散，因此，相关部门应进一步提高重视程度，加大对肉制品的监管力度，以此避免或降低食物中毒的发生概率[8]。此外，SE-μPADs法通过试纸进行检查，可有效缩短检验时长，试纸成本较低，存在费用低廉的优势。且检测期间无需利用荧光仪器，通过肉眼观察试纸颜色，按照比色方式即可检出食品中沙门菌[9]。由此看出，SE-μPADs法通过富集培养基，并抑制微生物生长的方式，显著提升了检测结果的准确性，并缩短检测时间，避免假阳性出现，值得推广。

综上，SE-μPADs法测定动物源食品中沙门菌的效果显著，其灵敏度与特异度较高。