林可霉素在安格斯牛体内药代动力学研究

陈 亮，刘雪松，张 蕾，沈思思，兰世捷，李 丹，苗 艳，冯万宇，黄宝银，史同瑞

(黑龙江省农业科学院畜牧兽医分院，黑龙江齐齐哈尔 161000)

林可霉素(lincomycin)是由链霉菌产生的一种林可胺类碱性抗生素，分子式为C18H34N2O6S[1]。林可霉素对于细菌产生抗菌效果的作用机理是林可霉素与细菌的核蛋白体50 S亚基结合，抑制肽酰基转移酶，阻碍了蛋白质的合成，从而达到相应的抗菌效果[2-3]。林可霉素属于窄谱抗菌药物，主要对化脓性链球菌、金黄色葡萄球菌以及肺炎链球菌等革兰氏阳性菌的抗菌效果较强。对于部分厌氧菌，如破伤风梭菌、产气荚膜梭菌以及双歧杆菌等有良好的效果。但对革兰氏阴性菌无抗菌效果[4]。林可霉素在安格斯牛体内的药动学数据还没有报道过。因此，本文探究了林可霉素在安格斯牛体内的药动学数据，以期为林可霉素在安格斯牛上的使用提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试验用动物 安格斯牛5头，160 kg～200 kg，购于齐齐哈尔周边牧场。

1.1.2 药品及试剂 林可霉素对照品，中国兽药监察所产品；硼砂以及色谱级磷酸，上海阿拉丁生化科技股份有限公司产品；色谱级甲醇以及乙腈，北京迪科马科技有限公司产品。

1.1.3 主要仪器 LC20-AT液相色谱仪、SPD-M20A二级阵列管检测器、InertSustainC18色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，日本岛津公司产品。

1.2 方法

1.2.1 色谱条件 结合相关文献，确定了高效液相色谱测定林可霉素的检测方法。0.05 mol/L硼砂溶液(用85%磷酸溶液调节pH至6.1)-甲醇(1∶1)为流动相，流速为1 mL/min，柱温为30℃，检测波长为214 nm[4]。

1.2.2 血浆样品处理 精密吸取1 mL血浆，向其加入2 mL乙腈，充分涡旋1 min。12 000 r/min离心10 min，移取上清液到10 mL离心管中，60℃氮气吹干，用1 mL流动相进行定容，过膜后检测。

1.2.3 血浆标准曲线的制作 试验标准曲线制作采用外标法。将不含药物的血浆按照1.2.2的方法进行前处理，以获得空白血浆基质。取5根离心管，各管内加入900 μL空白血浆基质。将林可霉素稀释成适当浓度，各管分别加入100 μL相应浓度的药物，涡旋均匀，使基质加标浓度为5 ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL、200 ng/mL、500 ng/mL。按照1.2.1的方法进行测定。求得标准曲线回归方程和相关系数(R)。

1.2.4 方法学验证 将林可霉素加入到空白血浆中，使空白血浆中含有林可霉素浓度为5 ng/mL、50 ng/mL、500 ng/mL。按照1.2.2的方法进行前处理。按照1.2.1的方法进行浓度测定。将经过前处理的血浆样品的分析峰面积与标准曲线中的药物峰面积进行比较。做5个重复，共做3个批次，不同批次间隔1 d，分别计算回收率和批内、批间变异系数。

1.2.5 药物代谢动力学试验设计 本试验以5 mg/kg的剂量进行肌肉注射给药。给药后分别于0.17 h、0.25 h、0.5 h、0.75 h、1 h、3 h、6 h、9 h、12 h、24 h静脉采血3 mL置于肝素钠采血管中，以3 500 r/min离心10 min，取血浆于-20℃中保存。

1.2.6 数据处理以及统计分析 数据统计分析用SPSS软件中的方差分析处理，药物代谢动力学模拟及参数计算采用Winnonlin 5.2.1软件进行处理。

2 结果

2.1 方法专属性

根据1.2.1的检测方法和1.2.2的血浆前处理方法，林可霉素在标液、基质加标以及采集的样品中能在色谱柱上得到良好的分离、保留。该方法对林可霉素响应值高，药物周围无杂质峰干扰。林可霉素出峰时间为10.65 min～10.75 min，在不同批次间分析物出峰时间有细微差别。

图1 林可霉素标准品色谱图

图2 空白血浆色谱图

2.2 标准曲线

以定量色谱峰面积为纵坐标，以药物浓度为横坐标，建立标准曲线。林可霉素的标准曲线方程为：y=1.060 5x-2.157 6，相关系数为0.998 3。表明林可霉素在5 ng/mL～500 ng/mL范围内线性关系良好。

图3 血浆样品色谱图

2.3 方法学验证

试验数据表明林可霉素在血浆中回收率为91%～101%。批间精密度为2.34%～3.56%，批内精密度为1.57%～3.69%。检测限(LOD)、定量限 (LOQ)分别为5 ng/mL和10 ng/mL。

2.4 药物代谢动力学

经过高效液相色测定药物浓度后，药时曲线如图4以所示。血浆中药物浓度如表1所示，经过Winnonlin软件分析后的药物代谢动力学参数如表2所示。结果分析表明，林可霉素在安格斯牛体内吸收较快，代谢较慢，达峰浓度较高。

表1 血浆中药物浓度

表2 林可霉素药动学参数

图4 药时曲线

3 讨论

林可霉素在不同基质中的检测方法众多，其中包括了高效液相色谱法、胶体金免疫层析法、气相色谱法、质谱法以及光谱法等[5]。本试验方法采用了HPLC-DAD方法，并且简化了样品前处理的方法。通过本方法得出的标准曲线线性关系良好、方法专属性强，并且林可霉素周围无杂质峰干扰。应用该方法可以有效测定血液中林可霉素的含量。

本次试验测定的林可霉素在安格斯牛体内的药动学参数中，达峰时间(Tmax)为0.37 h，表明达峰时间较快，林可霉素在安格斯牛体内的吸收较快。达峰浓度(Cmax)为6.12 μg/mL，说明林可霉素在安格斯牛体内的浓度较高。本次试验中，林可霉素在安格斯牛体内的消除半衰期(T1/2β)为3.75 h，与范惠敏等测定的在猪体内的3.38 h、Sreedharan等测定的在水牛体内的3.3 h、Albarellos等在猫体内测定的3.56 h相近，低于吴海港等测定的环丙沙星-林可霉素长效注射液在猪体内的10.74 h，高于Abo-EL-Sooud等测定的在山羊体内的1.44 h。本次试验测得林可霉素在安格斯牛体内的平均滞留时间(MRT)为3.78 h，与在猪体内的3.52 h相似，低于在水牛体内的4.32 h，但高于山羊的1.19 h。这些数据说明林可霉素在不同动物体内的药动学数据具有种属差异性。林可霉素的抗菌谱与大环内酯类药物的抗菌谱相似，国外的一项研究表明，林可霉素血药浓度达到2～2.8 μg/mL时，对细菌有较为明显的抗菌效果[11]。在临床应用时，林可霉素经常与其他药物联合配伍使用，既是为了防止细菌耐药性的产生，也是为了抗混合感染中对林可霉素敏感性低或无敏感性的细菌。林可霉素与大观霉素的配伍较常见。许多研究报道称，这两种药的配伍使用可以补充两种药物的短板，对治疗细菌以及支原体疾病有着良好的效果，两种药物联合使用的抗菌效果要优于单药的使用[4,12-13]。

药动-药效学同步模型是一种可以通过科学计算得出某种药物对于不同的动物的合理用药剂量的模型[14-15]。这个模型主要包括了两个部分，一个是药动学研究部分，另一个是药效学研究部分。本试验首次测出了林可霉素在安格斯牛体内的药动学数据，为林可霉素治疗安格斯牛疾病提供了依据，也可以应用相应的药动学数据为林可霉素的合理用药提供参考数据，防止耐药性的产生。