鸡饲料中添加红景天预防柔嫩艾美尔球虫的效果

张 健，乔尚怡，潘晨帆，张榕珍，郭许情，周 爽，安 健，张建军

(北京农学院 动物科学技术学院，北京 102206)

鸡球虫病(Coccidiosis)是世界性的寄生虫原虫病之一[1]，自从鸡球虫被发现以来，其对禽畜牧业造成了非常严重的危害[2]。一旦规模较大的养殖场爆发球虫病，它将导致大量雏鸡生长不良甚至死亡。在增加生产成本的同时，还影响生产性能[3]。作为对禽类最有害的五大疾病之一的鸡球虫病，需要引起人们更多的重视[4]。12至50日龄的鸡为易感群体，超过50%发病率，死亡率也很高[5]。目前养殖业大多是集约化养鸡，高密度的饲养方式使得鸡球虫病在鸡群中的传播更为广泛，鸡球虫病的发病率增长迅速。所以，防治好鸡球虫病对于家禽养殖业非常重要。

中草药在国际上被称为传统植物药，特性是天然、毒性低、无停药期、药物残留量低和副作用小。研究证实，红景天作为饲料添加剂，它可以改善动物生长或生产性能，提高产品质量和降低死亡率、增加经济效益。当前，对于红景天应用于预防鸡球虫病的方面较少相关研究报道。因此，本研究通过测定红景天对抗球虫指数ACI、细胞因子、体液免疫和肠道病理组织学变化的影响，来探明其对柔嫩艾美尔球虫预防效果，从而为养鸡业提供一定的指导意义。

1 材料与方法

1.1 试验材料

E.tenellaBJ4株孢子化卵囊保存于北京农学院兽药与疫病防控实验室。

红景天全株干燥物(购自北京博尔优生物科技有限公司)，粉碎添加，粒度为15～30 μm；IL-2酶联免疫吸附分析(ELISA)试剂盒、TNF-α酶联免疫吸附分析(ELISA)试剂盒和IgG的酶联免疫吸附分析(ELISA)试剂盒(购自南京建成)。饲料为无抗球虫药及其他任何抗生素的特制雏鸡饲料，由华都饲料有限公司提供。

1.2 试验方法

1.2.1 试验动物及分组 100只1日龄健康蛋雏鸡，购自房山某鸡场。饲养于无球虫环境，自由采食。在12日龄时，分为5组，每组6只，每组3个重复：阳性对照组：攻虫不给药；阴性对照组：不攻虫不给药；0.5%红景天组：饲料中混入0.5%红景天粉末；1.0%红景天组：饲料中混入1.0%红景天粉末；1.5%红景天组：饲料中混入1.5%红景天粉末。

14日龄时，除阴性对照组不攻虫外，其余4组口服接种4 000个Eimeria tenella孢子化卵囊。21日龄(攻虫后第7天)采血后剖杀。剖杀后打开腹腔，取出盲肠。记录盲肠病变。盲肠处理为匀浆记录卵囊产量。统计成活率、相对增重率、盲肠病变积分和卵囊产量，计算抗球虫指数(ACI)；将鸡盲肠组织固定于10%福尔马林溶液中，HE染色进行组织学观察。

盲肠病变评分[6]由轻到重记为0,1,2,3,4。病变值=各组鸡的平均病变评分×10。

1.2.2 血清制备及IL-2、TNF-α和IgG含量的测定 将采出的血放于10 mL离心管(不加抗凝剂)中倾斜放置，将离心管放置于37 ℃温箱1～2 h让血液凝固。采集的血放置于4 ℃冰箱过夜，让血块固缩。当血清自然析出后，将血清吸出转移至1 mL的离心管中，在4 ℃的离心机中800～1 000 r/min，离心10 min，弃去沉淀。将血清转移至0.5 mL干净的离心管中，储藏在-80 ℃冰箱。IL-2、TNF-α和IgG的ELISA试剂盒测定鸡血清中IL-2、TNF-α和IgG的含量。

用Excel软件的方差齐性检验和单因素方差分析对多组数据之间的差异进行分析比较，以P<0.05 表示差异有统计学意义，P<0.05，差异显著；P<0.01，差异极显著。

2 结果与分析

2.1 红景天预防球虫效果

给药后低剂量组采食明显增多，高剂量组采食轻微减少，其他组饮食均正常。攻虫后第3天开始，攻虫各组鸡只都出现不同程度食欲减退的现象。21日龄剖杀进行盲肠病变评分显示0.5%红景天组的鸡只无盲肠病变；1.0%红景天组和1.5%红景天组的病变值低于阳性対照组。各组存活率为100%，无死亡现象。0.5%红景天组的抗球虫指数为137，大于120，为有效。1.0%红景天组和1.5%红景天组抗球虫指数低于120，但均高于阳性对照组(表1)。

2.2 盲肠病理组织学观察结果

本试验中阴性对照组的盲肠病理组织学变化：黏膜结构完整，肠绒毛没有损伤，黏膜上皮无脱落，细胞核清晰(图1-A)。阳性对照组的盲肠损伤最为严重：盲肠黏膜结构完整性遭到破坏，肠绒毛损伤严重，黏膜上皮细胞脱落，且固有层红细胞增多，肠腺增生；阳性对照组放大400倍后观察到盲肠黏膜固有层有大量红细胞浸润，且能观察到较多卵囊，黄色三角所指(图1-B和图1-F)。0.5%红景天组的盲肠黏膜固有层有少量红细胞，损伤轻微，肠绒毛相对阴性对照组来说，结构较完整(图1-C)。1.0%红景天组盲肠黏膜固有层有一些红细胞，整体结构较完整，肠绒毛轻微增生，且没有阴性对照组紧密，黏膜上皮细胞完整(图1-D)。1.5%红景天组盲肠病理组织学变化显示，黏膜结构模糊，有一定程度的损伤，黏膜上皮细胞体积缩小，有些破裂(图1-E)。结果表明，阳性组盲肠黏膜损伤情况最为严重，0.5%红景天组较1.0%红景天组、1.5%红景天组损伤较轻，阴性对照组盲肠黏膜没有损伤。

表1 预防球虫效果Tab.1 Prevention of coccidiosis effect

2.3 鸡血清中IL-2、TNF-α和IgG含量

本试验中攻虫后阳性组的鸡血清中IL-2浓度比阴性组的高，差异显著(P<0.05)。而攻虫给药组与阳性对照组相比，IL-2水平明显降低，差异极显著(P<0.01)。给药攻虫组中0.5%红景天组血清中IL-2水平最高，1.5%红景天组血清中IL-2水平最低(图2)。结果表明，在日粮中添加红景天能显著降低感染柔嫩艾美尔球虫后雏鸡血清中IL-2水平。

本试验中攻虫后阳性对照组的鸡血清中TNF-α浓度比阴性对照组高，差异极显著(P<0.01)。攻虫给药组与阳性对照组对比，TNF-α水平明显降低，其中0.5%红景天组鸡血清中TNF-α相对质量浓度阳性对照组相比差异显著(P<0.05)。1.0%红景天组和1.5%红景天组鸡血清中TNF-α相对质量浓度与阳性对照组相比差异极显著(P<0.01)。其中0.5%红景天给药组血清中TNF-α浓度最高，1.5%红景天给药组血清中TNF-α浓度最低(图2)。结果表明，在日粮中添加一定剂量的红景天能显著降低感染柔嫩艾美尔球虫后雏鸡血清中TNF-α水平。

本试验中阳性对照组的鸡血清中IgG质量浓度比阴性对照组低，差异显著(P<0.05)。而攻虫给药组与阳性对照组相比，IgG水平明显升高，差异极显著(P<0.01)。其中低剂量0.5%红景天给药组鸡血清中IgG含量最高(图2)。结果表明，在日粮中添加一定比例的红景天能显著提高感染柔嫩艾美尔球虫后雏鸡血清中IgG水平。结果表明，在日粮中添加一定比例的红景天能显著提高感染柔嫩艾美尔球虫后雏鸡血清中IgG水平。

3 讨 论

鸡球虫病(coccidiosis)是由一种或者多种球虫寄生于鸡的肠黏膜上皮细胞引起的一种原虫病，它是一种以鸡的下痢、血便、生长迟缓、饲料转化率高，甚至引起鸡死亡为特征的寄生虫性疾病[7]。本研究中，阳性对照组的相对体重增长率最低，而0.5%红景天组，1.0%红景天组以及1.5%红景天组的相对体重增长率都较阳性对照组高，其中0.5%红景天组最高。推测可能是红景天通过减轻球虫对肠道的损害，并改善宿主的采食量，影响了饲料转化率。本试验中，0.5%红景天组采食量最高，这与李龙[8]研究结果相符，与崔晓娜[4]的研究结果不符。可能是红景天的产地及种类不同而造成，也与季节及试验过程中鸡的应激反应有关。

本研究中，各组存活率都为百分之百。从肠道病变和血便情况来看， 0.5%红景天组，1.0%红景天组以及1.5%红景天组与阳性对照组相比，其对肠道病变和血便有不同程度的抑制效果，以0.5%红景天组的效果最好。有研究报道，红景天有一定的抗炎止血作用，而本试验数据表明给药攻虫组中，低剂量红景天组的鸡肠道粘膜损伤最小。本试验在饲料中添加低剂量红景天可以减少球虫对机体造成的肠道粘膜损伤。0.5%低剂量给药组的抗球虫指数为137，一般来说ACI大于120表明部分有效。表明在饲料中添加0.5%的红景天有一定的预防鸡球虫病的效果。中高剂量攻虫给药组抗球虫指数不到120，但是均高于阳性对照组，后续需进一步研究其最佳应用剂量和作用机理。

相关研究发现，在饲粮中添加红景天, 可提高鸡的免疫力。近年来人们逐渐把红景天研究重点转移到对细胞因子的作用方面[9]。细胞因子属于一种具有广泛生物学活性的低分子量可溶性蛋白质，细胞因子及细胞因子之间形成的复杂网络系统在疾病的发生、发展过程中扮演着重要角色。白细胞介素(IL)就是重要的代表之一。其中IL-1、IL-2和IL-6在许多炎症和免疫过程中发挥重要作用。Guan等研究经LPS诱导小鼠产生急性肺损伤，通过给予红景天苷后能显著增强 LPS刺激诱导产生更多的IL-2和 IL-4[10]。研究表明，红景天刺激人外周血淋巴细胞增殖和其潜在的免疫调节作用可能是通过调节Th1细胞的IL-2和Th2细胞的IL-4、IL-6、IL-10的水平[11]。本试验中，在饲料中添加红景天可以显著降低感染鸡球虫后雏鸡血清中的IL-2的含量。而高剂量1.5%组别的效果最好，IL-2降低的最明显。

肿瘤坏死因子α(TNF-α)是机体免疫反应中最早产生且非常重要的特殊炎性介质，可诱导产生IL-2等多种炎性因子，并促进中性粒细胞在内皮细胞上粘附，随后发生炎症反应[12]。TNF-α主要是由脂多糖刺激巨噬细胞而分泌的一种蛋白质，具有多种生物活性的炎性细胞因子，与其他细胞因子共同作用参与激活免疫反应[13]。而本试验中，TNF-α在低剂量组的血清中含量最高。说明红景天可以显著提高感染球虫后雏鸡血清中的TNF-α含量，从而发挥抗球虫作用。

血清抗体水平是从体液免疫的角度来评价机体免疫状态的指标，反映了机体对疾病的抵抗能力[14]。鸡血清中的免疫球蛋白IgG发挥作用较持久，存在免疫记忆，是鸡抗球虫感染时主要的体液免疫因子[15]。郑明学应用酶联免疫分析鸡血液中的特异性的IgG后发现，雏鸡感染第6天后可检测到血清中含有IgG，并且在之后每天抗体水平逐渐上升[16]。本研究表明，添加0.5%红景天可显著提高肉鸡血清中的IgG浓度，此结果表明添加红景天可提高鸡的体液免疫能力。总之，在饲料中添加0.5%的红景天可以一定程度上预防鸡柔嫩艾美尔球虫病。