R26-hSCARB2小鼠生理生化指标的测定与分析*

周佳琪 魏 杰 王 洪 刘甦苏 光姣娜 熊 芮 王辰飞 范昌发 岳秉飞

(中国食品药品检定研究院，北京 102629)

清道夫受体B2蛋白(SCARB2)又称为2型溶酶体整合膜蛋白(lysosomal integral membrane protein type 2，LIMP2)，是一种溶酶体膜糖蛋白，属于B族清道夫受体家族，分布于人体大多数组织，主要参与膜泡运输及溶酶体成熟过程，也可作为EV71和CVA16的受体导致儿童患手足口病[1-3]。近年来，手足口病作为小儿急性传染病严重威胁儿童的健康，肠道病毒中的 EV71 和 CVA16为手足口主要的病毒型别，感染者严重可以危害生命[4]。由于hSCARB2基因可以在小鼠的肌肉和脑组织中高表达，促进病毒对小鼠的感染和复制能力[5]。因此，对R26-hSCARB2小鼠的研究是认识与研究儿童手足口病的模型基础。

在一定范围内波动的血液生理生化指标是每种实验动物特有的生物学指标，这些指标可以反映动物的生理状态和健康状态，可以为病理学、毒理学、探讨发病机理等研究选择合格的实验动物提供参考[6-8]。

目前，对于R26-hSCARB2小鼠的生理生化等部分生物学特性未有相关报道，本研究通过对不同周龄和性别的R26-hSCARB2小鼠的生理生化指标进行测定，为深入研究该小鼠提供了基础材料。

1 材料和方法

1.1 实验动物及处理

取4周龄和8周龄的R26-hSCARB2小鼠各20只，雌雄各半，SPF级，体质量分别为：4周龄(15.14±0.93)g，8周龄(20.43±0.85)g，均来自本单位实验动物资源研究所，实验动物生产许可证号：SYXK(京)2017-0005。利用电转染技术将同源重组产生的靶向载体导入C57BL/6小鼠胚胎干细胞的rosa26位点，在屏障环境中完成囊胚显微注射、胚胎移植等操作，PCR检测阳性即为阳性转基因鼠。4周龄和8周龄R26-hSCARB2小鼠均饲养于屏障环境，环境设施合格证：SYXK(京)2017-0013。

空腹12 h后的小鼠，采集静脉血加入稀释液后用来测定生理指标，取全血分离血清后用来测定生化指标。

实验动物的饲养和相关操作均按照实验动物福利伦理“3R”原则规程进行，并由中国食品药品检定研究院实验动物福利伦理审查委员会审批[中检动(福)第(B)021号]。

1.2 主要仪器

日本光电Mek7222血细胞分析仪；奥林巴斯AU400全自动生化分析仪。

1.3 试剂

检测生理指标所用的试剂、稀释液和溶血剂购自上海东湖生物医学有限公司；检测生化指标所用的试剂购自中生北控生物科技股份有限公司。

1.4 测定项目及方法

采用日本光电Mek-7222血球分析仪测定嗜碱性粒细胞绝对值(BAS)、嗜碱性粒细胞百分率(BAS%)、嗜酸性粒细胞绝对值(EOS)、嗜酸性粒细胞百分率(EOS%)、红细胞压积(HCT)、血红蛋白浓度(HGB)、淋巴细胞绝对值(LYM)、淋巴细胞百分率(LYM%)、平均红细胞血红蛋白(MCH)、平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)、平均红细胞体积(MCV)、单核细胞绝对值(MON)、单核细胞百分率(MON%)、平均血小板体积(MPV)、中性粒细胞绝对值(NEUT)、中性粒细胞百分率(NEUT%)、血小板压积(PCT)、血小板分布宽度(PDW)、血小板计数(PLT)、红细胞计数(RBC)、红细胞分布宽度(RDW)和白细胞计数(WBC)，共计22项血液生理指标。

采用奥林巴斯AU400全自动生化分析仪测定白蛋白(ALB)、碱性磷酸酶(ALP)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、尿素(BUN)、钙(Ca)、总胆固醇(CHO)、肌酐(CREA)、葡萄糖(GLU)、磷(P)、甘油三酯(TG)和总蛋白(TP)，共计12项血液生化指标。

1.5 统计学方法

2 结果

2.1 比较不同性别的4周龄R26-hSCARB2小鼠血液生理生化指标

在测定的22项生理学指标中，不同性别的4周龄R26-hSCARB2小鼠WBC具有极显著差异(P<0.01)，LYM和NEUT%指标具有显著差异(P<0.05)，其余生理指标无统计学意义,见表1所列。

表1 不同性别的4周龄R26-hSCARB2小鼠的血液生理指标Table 1 Blood physiological values of 4-week-old R26-hSCARB2 mice in different genders

在测定的12项生化指标中，CHO和TG具有极显著差异(P<0.01)，BUN具有显著差异(P<0.05)，其余生化指标差异不具统计学意义，见表2所列。

表2 不同性别的4周龄R26-hSCARB2小鼠的血清生化指标Table 2 Serum biochemical values of 4-week-old R26-hSCARB2 mice in different genders

2.2 比较不同性别的 8 周龄R26-hSCARB2小鼠血液生理生化指标

在测定的22项生理学指标中，不同性别的8周龄R26-hSCARB2小鼠有BAS%、LYM、MON%及WBC指标,具有极显著差异(P<0.01)，EOS%、NEUT、PDW及PLT指标具有显著差异(P<0.05)，其余指标无统计学意义，见表3所列。在测定的12项生化指标中，CHO、P及TP 指标具有极显著差异(P<0.01)，ALB、ALP、GLU及TG指标具有显著差异(P<0.05)，其余指标无统计学意义，见表4所列。

表3 不同性别的8周龄R26-hSCARB2小鼠的血液生理指标Table 3 Blood physiological values of 8-week-old R26-hSCARB2 mice in different genders

表4 不同性别的8周龄R26-hSCARB2小鼠的血清生化指标Table 4 Serum biochemical values of 8-week-old R26-hSCARB2 mice in different genders

2.3 比较不同周龄的R26-hSCARB2小鼠之间的生理生化指标

在测定的4周和8周龄R26-hSCARB2小鼠的22项生理学指标中，LYM、LYM%、MON、MON%、PLT、RDW及WBC具有极显著差异(P<0.01)，MPV、NEUT、NEUT%及PCT共4项指标具有显著差异(P<0.05)，其余指标无统计学意义，见表5所列。

表5 不同周龄的R26-hSCARB2小鼠的血液生理指标Table 5 Blood physiological values of R26-hSCARB2 mice in different ages

在测定的4周和8周龄R26-hSCARB2小鼠的12项生化指标中， ALB、ALP、ALT、AST、BUN、Ca、CHO、CREA、GLU、P、TG及TP共 12项生化指标均具有极显著差异(P<0.01)，见表6所列。

表6 不同周龄的R26-hSCARB2小鼠的血清生化指标Table 6 Serum biochemical values of R26-hSCARB2 mice in different ages

3 讨论

3.1 性别对于R26-hSCARB2小鼠的影响

在测定的4周龄R26-hSCARB2小鼠，22项生理指标中，LYM、NEUT%及WBC指标上存在显著差异，且均为雌性指标高于雄性；8周龄R26-hSCARB2小鼠BAS%、EOS%、LYM、MON%、NEUT、PDW、PLT及WBC共计8项指标上存在显著差异，其中EOS%、LYM、NEUT、PDW及WBC这5项指标为雌性高于雄性，BAS%和MON%指标为雄性高于雌性。

在测定的12项生化指标中，4周龄R26-hSCARB2小鼠BUN、CHO及TG指标上存在显著差异，且CHO和TG指标均为雄性含量高于雌性，BUN含量则是雌性高于雄性； 8周龄R26-hSCARB2小鼠ALB、ALP、CHO、GLU、P、TG及TP共计7项指标存在显著差异，其中ALP为雌性高于雄性，TP、ALB、GLU、P、CHO及TG均为雄性高于雌性。4周龄和8周龄的R26-hSCARB2小鼠的CHO和TG水平均为雄性高于雌性，在未进行基因改造的C57BL/6小鼠与中青年男女中也有同样的结果[9-10]，说明性别可能会影响生物的激素水平。

3.2 年龄对与R26-hSCARB2小鼠的影响

4周龄和8周龄R26-hSCARB2小鼠在测定的22项生理指标中， LYM、LYM%、MON、MON%、MPV、NEUT、NEUT%、PLT、PCT、RDW及WBC共计11项指标存在显著或极显著差异。由此可见，不同周龄的R26-hSCARB2小鼠在血小板、白细胞等白细胞亚群方面具有显著差异，除嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞外，其他白细胞亚群均具有显著差异，说明随着周龄的增加，R26-hSCARB2小鼠的免疫水平有相应的改变。

测定的12项生化指标在不同周龄小鼠间全部具有极显著差异，均为8周龄含量高于4周龄的含量，反映出周龄对R26-hSCARB2小鼠的肝功能、脂代谢和内分泌功能上有较大影响。

3.3 对于R26-hSCARB2小鼠的选择

小鼠为生物医学研究做出了十分突出的贡献，因为它们是目前培育品系最多、用量最大且标准化程度较高的实验动物[11]。血液生理生化指标可以反映动物的新陈代谢及生理功能状况，能够衡量动物是否健康以及遗传是否稳定，也可以作为临床疾病诊断的依据，对科学研究具有重要的参考价值[12]。在进行相关动物实验的时候，要充分考虑品种、品系、性别、周龄等因素对实验动物基础生物学指标的影响，同时也要考虑到这些因素所产生的影响的大小[13-14]。

本研究检测了R26-hSCARB2小鼠的血液生理生化指标，分析了性别和周龄对于该小鼠的影响，发现性别和周龄都会影响该小鼠的血液生理生化指标，小鼠周龄对血液生理生化指标存在较大影响，可以为R26-hSCARB2小鼠的应用研究提供一定的参考。