孕晚期孕妇肠道菌群对子代婴儿免疫系统发育的影响*

屠文骆,陈先俊,徐建萍,陈安琪,蒋桔莲

台州市妇女儿童医院妇产科(浙江台州 318000)

随着孕妇孕周的不断增加，体内肠道菌群会随之出现一系列变化，从而达到胎儿的生长发育需求，同时母体肠道菌群的这一变化还对子代婴儿肠道菌群的早期定殖具有重要意义[1]。近些年已有多项权威研究表明[2-3]，孕妇免疫系统功能会随着孕期肠道菌群的变化而变化，导致母体相关免疫分子和免疫抗体浓度受到影响，进而通过胎盘影响胎儿免疫系统的建立及各器官功能发育；此外，母体肠道菌群亦可经血液等途径进入胎盘组织，再经羊水、胎盘等向胎儿的免疫系统及肠道转移。既往研究充分印证了孕期母体肠道菌群与子代婴儿免疫系统的强相关性[4]，但孕晚期孕产妇肠道菌群失调经临床干预后是否继续影响子代婴儿免疫系统发育？还有待进一步证实。基于此，本研究采用前瞻性研究的方式分析了孕晚期孕妇肠道菌群对子代婴儿免疫系统发育造成的影响，为今后工作提供依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料 便利抽样选择2019年1月至2020年2月在台州市妇女儿童医院产前检查的孕晚期孕妇建立母婴出生队列。

纳入标准：(1)年龄≥18岁；(2)孕周28～40周；(3)在我院定期产检并计划在我院分娩；(4)单胎，新生儿为足月活产儿；(5)孕产妇知情同意并签署知情同意书。

排除标准：(1)妊娠期糖尿病、高血压产妇；(2)孕产妇有恶性肿瘤、严重感染等身体严重疾病；(3)孕早中期已存在肠道菌群失调症状或诊断为肠道菌群失调者；(4)食物中毒；(5)感染性腹泻；(6)有精神病或既往有精神病史；(7)患有妊娠合并症或并发症(如子痫前期等)；(8)新生儿存在先天性免疫力低下等疾病。

按照纳入和排除标准，最终将524例孕产妇纳入研究，年龄18～31岁，平均(24.58±6.02)岁；文化程度：初中及以下30例，高中及中专148例，大专及以上346例；肠道菌群失调组141例，对照组383例。研究已获得本院伦理委员会批准。

1.2 方法

1.2.1 孕产妇肠道菌群失调判断 采集孕晚期[(35.71±4.25)孕周]新鲜粪便样本行粪便涂片检测，参考《肠道菌群粪便涂片检查图谱》判断肠道菌群失调情况及严重程度[5]，具体为：(1)正常活菌数每视野(FV)在500～5 000集落形成单位(CFU)；(2)正常粪便球杆比1∶3或3∶7；(3)各类肠菌占比在以下范围则视为菌群失调：革兰阴性杆菌>60%或<50%，革兰阳性杆菌>50%或<40%，革兰阴性球菌>10%或<3%，革兰阳性球菌>15%或<5%；(4)根据粪便细菌培养结果对双歧杆菌/大肠杆菌的比值(B/E)进行计算，B/E>1为正常，肠道菌群失调程度越严重B/E值则越小[6]。

1.2.2 肠道菌群失调治疗方法 当孕产妇确诊为肠道菌群失调(均为Ⅰ～Ⅱ度)后，由我院妇产科副主任医师为其制定科学的综合治疗策略，主要包含如下几个方面：(1)去除诱因。使用抗生素(特别是广谱抗生素)的孕产妇，建议其停用抗生素或选择窄谱敏感抗生素；若无明确的抗生素用药指征，可以考虑停用任何抗生素，并密切观察；若存在感染情况，应选择窄谱敏感抗生素，但疗程应尽可能短，用量尽可能小，并配合生态制剂治疗。(2)一般治疗。对腹泻导致的酸碱平衡失调、水和电解质紊乱等进行纠正，指导孕产妇适量补充水分和盐，并酌情使用止泻药。(3)口服微生态制剂。双歧杆菌四联活菌片(思连康)，批号：国药准字S20060010，杭州远大生物制药有限公司生产，规格0.5 g/片，用法：一次3片，3次/d，用药疗程根据孕产妇个体情况酌情加减。(4)饮食及生活指导。指导孕产妇保持饮食均衡，多食用绿豆、红豆等富含膳食纤维食物，食用大蒜、洋葱等富含益生元类食物，食用山楂、苹果等富含果胶类食物，忌生冷辛辣，告知孕产妇适当运动、规律作息、保持心情舒畅、记录大便情况等等。

1.3 观察指标 采集产妇子代婴儿脐静脉血，送检验科经静置、离心、分离血清等操作后，检测各项免疫功能指标：(1)免疫五项。采用双光径免疫浊度分析仪(IMMAGE 800)检测免疫球蛋白(IgG、IgA、IgM)以及补体(C3、C4)水平；(2)T淋巴细胞亚群。采用流式细胞分析仪(FACSCalibur)测定CD3+、CD4+、CD8+，并计算CD4+/CD8+值。

1.4 统计学方法 采用SPSS 23.0统计软件处理数据，计数资料采用例(%)或构成比表示，行2检验；计量资料采用表示，行t检验；若P<0.05则说明差异有统计学意义。

2 结果

2.1 肠道菌群失调组与对照组孕产妇一般资料比较 本研究524例孕产妇中有133例(25.38%)采用剖宫产(均有剖宫产指征)。按照分娩方式的不同，将肠道菌群失调组与对照组分别分为两个亚组；不论阴道分娩还是剖宫产，肠道菌群失调组与对照组孕产妇一般资料比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。见表1。

表1 不同分娩方式下肠道菌群失调组与对照组孕产妇一般资料比较

2.2 不同分娩方式下肠道菌群失调组与对照组子代婴儿免疫五项比较 不论阴道分娩还是剖宫产，肠道菌群失调组孕产妇子代婴儿免疫五项水平均明显低于对照组，差异有统计学意义(均P<0.05)。见表2。

表2 不同分娩方式下肠道菌群失调组与对照组子代婴儿免疫五项比较

2.3 不同分娩方式下肠道菌群失调组与对照组子代婴儿T淋巴细胞亚群比较 不论阴道分娩还是剖宫产，肠道菌群失调组孕产妇子代婴儿CD3+、CD4+以及CD4+/CD8+值均明显低于对照组，差异有统计学意义(均P<0.05)。见表3。

表3 不同分娩方式下肠道菌群失调组与对照组子代婴儿T淋巴细胞亚群比较

3 讨论

3.1 孕晚期孕产妇肠道菌群的变化 一般情况下，母体肠道菌群会随着孕周的增加而出现明显变化，到达孕晚期时，孕产妇肠道菌群与孕早期相比α多样性显著降低，β多样性显著增加[1]。出现上述变化说明机体肠道菌群的调节能力降低，可能与孕晚期生理代谢、内分泌系统及免疫系统的改变有关，因此孕晚期时孕妇肠道菌群失调的风险更大。本研究524例孕产妇中有141例孕晚期出现了肠道菌群失调，占比26.91%(141/524)，肠道菌群失调率明显高于文献报道的普通健康人群[7]。可能与不同地域的饮食生活差异、孕产妇的特有特点以及部分孕产妇盲目使用抗生素有关；同时，既往临床中并非每名孕产妇孕晚期都行粪便涂片检测，也有可能漏掉了有些肠道菌群失调症状不明显的产妇，从而导致了本研究肠道菌群失调的比例较高。提示今后临床中需引起重视。

3.2 孕晚期孕产妇肠道菌群对子代婴儿免疫系统发育造成的影响 近年来越来越多的研究证实母体肠道菌群对胎儿免疫系统发育的重要性：其中，母体肠道菌群稳定有助于饮食中化合物的分解代谢，促进维生素合成，产生用于上皮整合及调节性T细胞发育的短链脂肪酸，使营养分子传递给母体的速度加快，并通过胎盘直接传递给胎儿，进而促进胎儿免疫系统的发育[2]；此外，不管是动物实验还是人体研究，孕晚期及新生儿出生短时间内口腔及肠道微生物体的迁移均明显加快，有证据表明上述微生物可影响婴儿微生物菌群的定植，而且在胎儿免疫系统发育中扮演着非常重要的角色[8]。免疫球蛋白是体液免疫的物质基础，怀孕初期合成量较小，随着孕周的不断增加(特别是孕晚期)，胎儿自身IgG、IgM的合成量会明显增多，同时孕晚期胎儿还可通过自身少量合成IgA[9]。而T淋巴细胞亚群是体现机体细胞免疫功能的重要指标，因此本研究将免疫球蛋白及T淋巴细胞亚群水平用于分析子代婴儿免疫系统的发育情况。本研究结果发现，不论阴道分娩还是剖宫产，肠道菌群失调组孕产妇子代婴儿免疫五项(IgG、IgA、IgM和补体C3、C4)水平以及T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+以及CD4+/CD8+水平均明显低于对照组(均P<0.05)。提示孕晚期孕妇一旦出现肠道菌群失调，即便采取了相关干预措施也会对子代婴儿免疫系统发育造成一定影响，可能原因为：孕晚期是胎儿免疫球蛋白等物质合成的关键时期，而孕产妇出现肠道菌群失调后需要一段时间调整，这段时间肠道菌群的改变足以影响到胎儿免疫球蛋白合成及T细胞发育。因此临床医生应充分认识到孕晚期肠道菌群失调对胎儿免疫系统发育的影响，并加强孕产妇孕期肠道菌群失调预防和指导工作。

3.3 孕晚期肠道菌群失调的几点预防建议 (1)合理使用抗生素。抗生素破坏肠道菌群的稳定性已经成目前公认，孕期(特别是孕晚期)应谨慎使用；(2)合理饮食。科学合理膳食在改善和维持孕产妇健康状态的同时，合理摄入不饱和脂肪酸以及适量摄入膳食纤维还有助于构建稳定的肠道菌群环境，降低肠道菌群失调风险[10]，可建议孕产妇通过营养师指导或互联网APP的形式制定饮食食谱，并掌握一些破坏肠道菌群稳定的常用饮食禁忌；(3)口服微生态制剂。通过让孕妇孕晚期口服肠道益生菌，不仅有助于调节机体胃肠道菌群，还有助于帮助新生儿建立肠道微生物环境，提高新生儿的免疫力[11]。因此建议孕晚期可根据自身经济情况服用医生推荐的微生态制剂；(4)保持身心愉悦。“菌群-肠-脑轴”是肠道与大脑双向交流的神经体液网络，肠道内菌群可以对大脑和机体行为构成影响，相反大脑也可以对肠道内菌群构成影响，因此让孕产妇保持身心愉悦极为重要。孕产妇心理状况的影响因素主要为个性特征、经济水平、怀孕认知度、不良妊娠史、家庭和社会支持度等等[1]，临床中需给予个体化干预;(5)控制体重。怀孕期间高脂饮食、肥胖及体重增长过多等均易引起肠道菌群失调，如肠道菌群多样性下降，葡萄球菌与大肠埃希菌增多，双歧杆菌属与拟杆菌属减少等[12]。因此控制体重对预防孕晚期肠道菌群失调也具有重要意义。

综上所述，孕晚期孕妇肠道菌群失调现状并不容乐观，即便采取了相关干预措施也会对子代婴儿免疫系统发育造成一定影响，临床中需引起重视，并积极制定预防策略，尽可能降低孕晚期肠道菌群失调的发生率。