APLP2基因多态性与冠心病的相关性研究

贾林·阿布扎力汗,迪拉热·阿迪,马依彤

(新疆医科大学第一附属医院冠心病二科,乌鲁木齐 830054)

冠状动脉粥样硬化性心脏病（coronary artery disease,CAD）简称冠心病，是心血管系统疾病中最常见的一种。作为全球范围内发病率、死亡率及致残率最高的疾病之一，已成为对人类健康造成严重威胁的公共卫生问题[1-2]。冠心病是一种复杂的疾病，涉及多种发病机制、细胞类型，并受多种危险因素的影响，主要危险因素包括糖尿病、高血压、高脂血症、吸烟、肥胖症、慢性炎症、免疫性疾病、缺乏运动和遗传因素等[3-5]。近年来，随着基因组学技术的发展，全基因组关联研究（genome wide association study,GWAS）和二代测序技术（next-generation sequencing,NGS）在冠心病病因学研究领域中的应用得到了广泛关注，一些与冠心病风险相关的遗传易感基因以及单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism,SNP）也被发现。本研究旨在探讨脂代谢相关基因淀粉样肽前体样蛋白2（amyloid precursor-likeprotein 2，APLP2）单核苷酸多态性与冠心病的发病相关性及其临床意义。

1 对象与方法

1.1 研究对象选择2010年8月－2016年10月在新疆医科大学第一附属医院心脏中心住院并行冠状动脉造影术的997例患者，其中，405例为病例组，593例为对照组。病例组的纳入标准为冠状动脉造影结果提示至少一支冠状动脉血管狭窄程度大于50%。对照组则纳入了与病例组同期住院的，完善冠脉造影术后排除冠心病者。两组均排除恶性肿瘤、结缔组织疾病、心脏瓣膜病、肝肾功能不全、慢性炎症性疾病、胰腺疾病、肝硬化，及活动期肝炎的患者。

1.2 方法

1.2.1 临床资料的采集 采集住院患者的一般基线资料如年龄、性别、吸烟史、饮酒史、高血压、糖尿病史等。

1.2.2 实验室指标的测定 研究对象入院后隔夜空腹8-12h，采集所有患者的外周静脉血样。对血样本进行了空腹血清甘油三酯（triglycerides，TG）、总胆固醇（total cholesterol,TC）、低密度脂蛋白胆固醇（lowdensity lipoprotein-cholesterol,LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（high-density lipoprotein-cholesterol,HDLC）及空腹血糖（fasting plasma glucose,FPG）检测。同时对每位受试者进行常规心电图、心脏超声、腹部超声等检查。

1.2.3 提取DNA及基因分型 对收集的血样本使用标准全血基因组提取试剂盒（北京生物技术公司）从外周血白细胞中提取DNA。使用Haploview 4.2软件和国际人类基因组单体型图计划网站数据库(http://www.hapmap.org)，根据次要等位基因频率（minor allele frequency,MAF）≥0.05和r2≥0.8作为切点值的连锁不平衡模式，通过采用改进的多重连接检测反应（improved multiplex ligation detection reaction,iMLDR）技术进行SNP基因分型（上海天昊生物科技公司）。最终获得了APLP2基因两个单核苷酸多态性位点SNP1(rs190276777)和SNP2(rs3740881)。

1.2 统计学分析使用SPSS23.0软件进行分析。计量资料以均数±标准差（±s）表示，在病例组和对照组中的差异用独立样本t检验的方法进行。而计数资料以百分位数的形式表示，使用卡方检验分析分类两组变量的差异。以P值<0.05为差异有统计学意义。多因素相关分析采用二元非条件logistic回归分析方法，计算各研究因素的比值比（odds ratio，OR）。

2 结果

2.1 纳入研究对象的一般基线特征病例组患者年龄较对照组高（P=0.002）。病例组患病率明显高于对照组例（P<0.001）。病例组患者血清总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）和甘油三酯（TG）水平明显升高，差异有统计学意义（P<0.05），见表1。

表1 研究对象的基线资料

2.2 纳入研究对象中基因型和等位基因频率的分布APLP2基因rs190276777多态性位点（SNP1）的基因型分布、隐性模型(CC+CGvsGG)和相加模型(CC+GGvsCG)中的分布频率在病例组和对照组存在明显差异（P<0.001）。而APLP2基因rs3740881多态性位点（SNP2）的基因型分布、显性模型、隐性模型和相加模型在病例组和对照中均无显著差异（P>0.05），表2。

表2 APLP2基因多态性位点基因型和等位基因的分布情况/例（%）

2.3 APLP2基因在研究对象中的非条件Logistic回归分析对纳入研究的研究对象进行了，包括性别、年龄、吸烟、饮酒、高血压病、糖尿病病、TC、TG、LDLC、HDL-C、FPG等冠心病传统危险因素在内的危险因素进行了二元非条件多因素Logistic回归分析。分析结果显示，APLP2基因rs190276777多态性位点表现为冠心病的独立危险因素（OR=1.968，95%CI：1.209～3.204，P=0.006），而rs3740881多态性位点未表现为冠心病危险因素（OR=1.272，95%CI：0.189～1.975，P=0.284）。见表3。

表3 冠心病危险因素的Logistic回归分析

3 讨论

胆固醇调控在人体内维持着严密的平衡状态，一旦此平衡遭到破坏，就会造成一系列疾病，如高胆固醇血症、动脉粥样硬化、脂肪肝、心脑血管疾病等。APLP2是淀粉样前体蛋白（amyloid precursor protein，APP）家族中的一员，APP家族成员包括APP、淀粉样肽前体样蛋白1（amyloid precursor-like protein 1，APLP1）和APLP2，研究者们最初在阿尔茨海默病（Alzheimer's disease,AD）患者中发现该家族[6]。人类APLP2基因位于染色体11q24.3上，编码的有763个氨基酸[7]。单核苷酸多态性是一种最常见的基因组变异形式。但是目前关于人类APLP2基因多态性与冠心病之间的相关性研究很少。有研究结果显示，APP和APLP2通过调节ApoE受体LRP1的水平来影响ApoE和胆固醇水平[8-11]。然而，关于血清胆固醇水平以及APLP2基因多态性之间的研究甚少，为此展开了本研究。

本研究假定rs190276777的GG基因型可能是冠心病的危险遗传标记。在调整混杂因素之后，对冠心病的危险因素进行二元非条件Logistic回归分析，当对冠心病传统危险因素包括：性别、年龄、吸烟、饮酒、高血压病、糖尿病、TG、TC、LDL-C、HDL-C和FPG等进行调整之后，分析结果显示APLP2基因rs19027677位点表现为冠心病的独立危险因素。表明APLP2基因rs19027677位点的G等位基因在该人群中也可能是心血管疾病(cardiovascular disease,CVD)的危险遗传标记。本研究尚存在以下局限性：首先，饮食情况与冠心病具有一定的相关性，在本研究中未将这一因素纳入分析，这成为本研究的局限性之一；其次，该研究为单中心研究且样本量较少，在后续的研究中，本课题组将进行多中心前瞻性队列研究。

综上所述，本研究结果表明携带APLP2基因rs190276777位点G等位基因的人群比携带C等位基因的人罹患动脉粥样硬化性心血管疾病的可能性更高。这种关系与血清中升高的血脂水平和其他心血管风险决定因素无关。然而APLP2基因多态性与CAD发病的相关的机制在很大程度上还不清楚，尚需进一步探究。