PD-L1在肺癌组织学分类中的表达情况及与临床病理特征的关系

朱燕燕，蒋艳，杨小苗，曹明，怀建国

（芜湖市第一人民医院 病理科，安徽 芜湖 241000）

0 引言

肺癌是目前世界范围内最常见的恶性肿瘤之一，死亡率非常高[1]。靶向治疗可以明显改善肺癌患者的生存时间，但是要求患者要有靶向药物的驱动基因突变，因此仍然有很大一部分患者没有靶向治疗的机会。尤其是SCLC的患者，其很少有靶向药物基因的突变。目前肺癌的治疗已经由靶向治疗发展到了免疫治疗时代，其已经成为晚期肺癌治疗中的重要手段。PD-1/PD-L1免疫抑制剂药物自面世以来就备受关注，在 Keynote-3475-042 试验中，PD-L1 TPS≥1%的患者总生存期高于传统化疗的总生存期，而且疗效与肿瘤细胞PD-L1表达呈正相关，所以进行PD-L1检测对指导临床免疫治疗有重要的参考价值[2]。本研究主要通过检测肺癌肿瘤细胞中PD-L1的表达情况，探讨PD-L1在腺癌、SCC、SCLC三种组织学分类中的表达特点及PD-L1阳性表达与临床病理特征之间的关系，为临床治疗提供一定的参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料。收集近5年内芜湖市第一人民医院病理科的肺癌标本，包括手术标本和活检标本共98例，排除肿瘤细胞量不足（≤100个）及经过化疗的标本。其中腺癌36例，SCC 39例，SCLC 23例。其中男79例，女19例，年龄25～88岁，平均70岁。活检标本71例，手术标本27例。有吸烟史60例；肿瘤大小＞5 cm 48例；临床分期Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期分别为22例、14例、28例、34例。

1.2 组织学分类。由两名资深病理医师阅片，按WHO（2015）肺肿瘤组织学分类标准明确诊断及分类。所有标本均行免疫组织化学标记 （TTF-1、Napsin-A、P40、P63、CgA、Syn、CD56、Ki-67）辅助肺癌的组织学分类。

1.3 免疫组化法检测肺癌肿瘤细胞内PD-L1。PD-L1一抗使用Roche公司克隆号SP263，其他试剂如二抗、DAB染色液、返蓝染色液及苏木素染色液等均为Roche全自动免疫组化仪相配套的产品。全自动免疫组化仪为Roche公司Ventana（BENCHMARK-XT）。通过电脑输入一抗名称并打印标签贴于玻片上。蜡块3 um厚切，每一张玻片上均有肿瘤组织和作为阳性对照的胎盘组织。将切片上机后按照电脑设置好的染色方案运行仪器。染色完成后取出玻片，洗去缓冲液，经95%乙醇和二甲苯脱水、透明、封片。

1.4 判读标准及阳性结果设定。①肿瘤细胞PD-L1的判读为：任何强度PD-L1膜染色的肿瘤细胞在所有肿瘤细胞中占的百分比。本研究依据肺癌中肿瘤细胞PD-L1表达的不同百分比值分为三组：阴性组（PD-L1＜1%），低表达组（1%≤P D-L 1＜5 0%）及高表达组（P DL1≥50%）；并把PD-L1≥1%设定为阳性表达。②肿瘤相关免疫细胞PD-L1的判读为：任何强度PD-L1染色的免疫细胞占总免疫细胞的百分比，并把肿瘤相关免疫细胞PDL1≥10%设定为阳性表达。

1.5 统计学分析。本文应用SPSS 17.0统计软件进行数据分析，对计数资料采用χ2检验进行比较；以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 PD-L1在肺癌组织学分类的肿瘤细胞中表达情况。98例肺癌中PD-L1阳性75例，阳性率76.5%（75/98）。其中腺癌、SCC及SCLC阳性率依次为77.8%（28/36）、82.1%（32/39）、65.2%（15/23）。SCC中PD-L1阳性率最高，在高表达组所占比例也最高61.9%（13/21）。腺癌中PD-L1阳性率次之，在低表达组所占比例略高37.0%（20/54）。SCLC中PD-L1阳性率最低，且高表达组为0%。PD-L1在三种肺癌组织学分类之间的表达差异有统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1 PD-L1在肺癌组织学分类的肿瘤细胞中的表达情况（例）

2.2 SCC与腺癌中肿瘤细胞PD-L1阳性表达与临床病理特征之间的关系。SCC和腺癌这两种组织学分类的肿瘤细胞中的PD-L1的阳性表达在患者年龄、性别、有无吸烟史、肿瘤大小及临床分期上均差异有统计学意义（P＜0.05）。在SCC中PD-L1阳性患者男性占96.9%、年龄≥65岁的占84.4%、吸烟患者的占84.4%，均高于腺癌中所占的比例。在肿瘤大小和临床分期方面，SCC中PD-L1阳性患者肿瘤大小＞5 cm的占59.4%、临床分期在Ⅲ+Ⅳ期占78.1%，同样高于腺癌。SCC在肿瘤相关免疫细胞PD-L1阳性率上差异无统计学意义（P＞0.05），见表2。

表2 SCC与腺癌中肿之瘤间细的胞关PD系-（L1例阳）性表达与临床病理特征

3 讨论

近年来免疫治疗成为了肺癌治疗的重要新兴手段。代表药物为PD-1/PD-L1抑制剂，PD-L1也称B7-H1，是B7超家族成员，是Ⅰ型跨膜糖蛋白，广泛表达于多种免疫细胞表面，在免疫调节中发挥重要作用[3]。而当肿瘤细胞高表达PD-L1与免疫细胞上的PD-1结合时，可以帮助肿瘤细胞逃避人体的免疫监控和杀伤。PD-1/PD-L1抑制剂可以阻断负向调控信号，恢复T细胞活性，对抗免疫逃逸，从而抑制和杀灭肿瘤细胞，而非简单的针对肿瘤细胞的杀伤，使患者获得一个更持久的疗效。不管是免疫抑制剂用于肺癌治疗的优势人群的选择还是对免疫抑制剂疗效的评估都需要了解患者肿瘤细胞的PD-L1表达水平。PD-L1在不同检测平台和评分标准也有差异[4-5]。

本研究使用的是Roche公司PD-L1 SP263克隆号作为检测PD-L1的一抗。本研究发现PD-L1在肺癌肿瘤细胞中阳性率为76.5%，略高于国内一些研究结果。还发现PD-L1的表达与肺癌的组织学分类有关，差异有统计学意义（P＜0.05），PD-L1在SCC中表达阳性率最高。本研究还发现PD-L1在SCC中高表达组（PD-L1≥50%）所占的比例也高于腺癌和SCLC。PD-L1在SCLC中的阳性率最低，而且PD-L1表达的也多集中在低表达组，并无一例PD-L1表达≥50%，这一结果和多数研究显示的PD-L1在SCLC中阳性率低相符。虽然PD-L1在SCLC中的表达水平较低，但是仍然有一半的SCLC表达PD-L1（即PD-L1＞1%），而Keynote158研究证实Pembrolizumab对PD-L1＞1%的阳性患者有疗效。这说明有部分SCLC患者仍然拥有选择免疫抑制剂治疗的机会。

综上所述，本研究使用Roche公司PD-L1克隆号SP263做为一抗，研究结果显示PD-L1在SCC中肿瘤细胞阳性率最高，腺癌次之，SCLC阳性率最低。在SCC和腺癌中PD-L1阳性表达和临床病理特征上有关，在SCLC中PD-L1阳性表达和这些临床病理特征相关性不大。