APP下载

离子迁移谱法快速检测保健食品和中成药中4种常见非法添加降糖类化合物

2021-10-19权勤波刘中原宋建建

药学研究 2021年9期
关键词:罗格甲醇化合物

权勤波,刘中原,宋建建

(1.东营市食品药品检验研究院,山东 东营 257091;2.山东省药师协会,山东 济南 250101)

糖尿病在中国已经成为影响人们健康的第一大病。由于保健食品和中成药药物温和、副作用小,越来越多的人倾向选择降糖类的保健食品或者中成药来调节血糖,目前一些不法分子为了牟取暴利,在相关降糖中成药或保健食品中非法添加降糖类的化学药物,以达到较好的降糖效果,这给高血糖患者的身体健康带来了很大的隐患[1-2]。化学降糖类药物中主要有苯乙双胍、二甲双胍、罗格列酮、吡格列酮,高效液相色谱(HPLC)法作为快检方法常被报道并且作为通用方法已经被应用于这4种化合物的非法添加检测[3-5],液相质谱法(HPLC-MS或UPLC-MS)作为非法添加检测的标准也开发了降糖类化合物对应的检测方法[6-7]。还有薄层色谱-红外光谱串联法TLC-IR[8]、近红外光谱法NIR[9]、薄层色谱-拉曼光谱[10]等一些快筛技术也应用于非法添加的快速筛查。

离子迁移谱技术因其简便迅速,要求样品处理简单,检测条件要求低且易于携带至现场的检测,作为一种初筛手段已被广泛应用[11-12]。用离子迁移谱技术快速筛查降糖类化合物苯乙双胍、二甲双胍、罗格列酮、吡格列酮(图1为4种化合物结构图),可以实现对中成药、保健食品等大批量检品的快速筛查,为新形势下药品和保健食品的质量监管提供了强有力的技术保障。

图1 4种化合物结构图

2 方法

2.1 仪器与试药 二甲双胍对照品(批号:100664-200602,纯度:99.9%)、苯乙双胍对照品(批号:100922-201001,纯度:99.7%)、罗格列酮对照品(批号:100673-200401,纯度:91.3%)、吡格列酮(批号:100634-201202,纯度100%)对照品均来自中国食品药品检定研究院。甲醇(色谱纯)购自国药集团化学试剂有限公司。所有溶液分析前均经过0.45 μm滤膜过滤。

2.2 仪器 Excellims GA2100电喷雾离子迁移谱;赛多利斯CP225D电子天平。

2.3 对照品和供试品溶液的制备 对照品溶液:分别取二甲双胍、苯乙双胍、罗格列酮、吡格列酮对照品各约10 mg,精密称定,置于100 mL量瓶中,加甲醇适量,超声溶解,加甲醇-水(90∶10)混合溶液至刻度,摇匀;分别精密量取10 mL,各置100 mL量瓶中,加甲醇-水(90∶10)混合溶液至刻度,摇匀,制成10 μg·mL-1的对照品溶液;分别精密量取10 mL溶液,各置100 mL量瓶中,加甲醇-水(90∶10)混合溶液至刻度,摇匀,制成1 μg·mL-1的对照品溶液。

供试品溶液:取市场可疑中药样品一次服用剂量,加甲醇10 mL溶解,滤过,取续滤液作为供试品贮备液;精密量取适量,用甲醇-水(90∶10)混合溶液稀释10~500倍后,作为供试品品溶液,直接进样。

2.4 离子迁移谱试验条件 通常采用的离子迁移谱正离子源条件为漂移管电压7 500 V、栅电压45 V、栅脉冲宽度120 μs、漂移管流速1.2 L·min-1、排气泵0.8 L·min-1、运行时间30 s、光谱范围25 ms。对离子源电压、进气温度和漂移管温度进行优化。

3 结果

3.1 电喷雾离子迁移条件优化

3.1.1 正负离子模式选择 对4种化合物进行离子源模式分析,结果发现,二甲双胍、苯乙双胍、罗格列酮和吡格列酮在正离子模式下有明显的响应信号,负离子模式下没有明显的响应信号。因而选择正离子模式对二甲双胍、苯乙双胍、罗格列酮、吡格列酮4种化合物进行检测。这几种化合物中都含有伯氨基或仲氨基,容易结合氢离子形成正离子,因而采取正离子模式。

3.1.2 源电压的选择 考察离子源电压对检测信号的影响,选取离子源电压1 400、1 600、1 800、2 000、2 200 V分别对4种化合物进行检测,其响应值如图2所示,分析发现,随着源电压的增强,苯乙双胍检测信号随之减弱,罗格列酮的检测信号随之增强,呈现了一个交叉变化;二甲双胍在1 800 V的检测信号最强,随着电压的增大和减小检测信号明显变弱;吡格列酮也出现了在1 800 V的检测信号最强,随着电压的减小检测信号明显变弱,随着电压的增大信号变弱不明显(见图2)。综合考虑4种化合物的特性,选取1 800 V作为检测时的离子源电压。

图2 离子源电压的变化对4种化合物信号响应值的影响

3.1.3 进气温度和漂移管温度的选择 对进气温度、漂移管温度进一步考察。对进气温度和漂移管温度分别设定在180、200 ℃时的检测结果进行了分析。结果发现两个温度的在一定幅度内的变化对检测结果没有显著差异,选择180 ℃作为最终进气温度和漂移管温度。

3.2 对照品迁移时间研究 对4种化合物的离子迁移谱迁移时间进行了考察,如图3所示,4种对照品在离子迁移谱谱图中都有单一的信号峰,很容易实现鉴别,二甲双胍的迁移时间为(8.163±0.010)ms,苯乙双胍的迁移时间为(10.075±0.008)ms,吡格列酮的迁移时间为(13.008±0.013)ms,罗格列酮的迁移时间为(12.910±0.012)ms,其迁移特性见表1所示。

表1 4种化合物的离子迁移谱特征

图3 4种化合物离子迁移谱检测图

3.3 稳定性及耐用性考察试验 为了测定检测结果的稳定性,对4种对照品连续3 d在同一台离子迁移谱上进行了数据收集,测试结果见表2所示。表明4中化合物对照品连续3 d迁移时间测试结果的RSD均小于0.1%,说明其稳定性良好。

表2 4种化合物迁移时间在不同时间上的稳定性

3.4 4种化合物同时存在时检测可行性研究 研究发现,二甲双胍、苯乙双胍、罗格列酮和吡格列酮同时存在时,出现了对应4种对照品的检测信号(见图4)。从图中可以看出,二甲双胍、苯乙双胍、罗格列酮和吡格列酮可以很好地区分开来,而且迁移时间与4种化合物单独检测时的迁移时间一致,无交叉影响。

图4 4种化合物同时存在时检测结果图

3.5 空白试验及基质干扰考察 选用LC-MS验证为阴性的降糖宁胶囊作为空白对照样品,考察辅料和保健食品中其他成分对4种化合物定性分析的干扰情况。按照“2.3”项下方法配制空白对照样品,按照从低到高的浓度进入IMS进行分析,发现在二甲双胍、苯乙双胍、罗格列酮和吡格列酮出峰的位置,4种浓度的空白样品溶液均无干扰峰出现(见图5)。

图5 空白对照样品IMS图

3.6 样品制备 考虑到样品溶解后直接进样,不同溶剂的溶解度和迁移谱峰不同,分别测试了乙腈、甲醇、丙酮、乙醇等溶剂,采用色谱级溶剂直接进样到离子迁移谱,结果发现不同溶剂的检测峰不同,但大都集中在5~7.5 ms,而待测目标物的检测峰位于8~14 ms区间,不受影响。分别用这些溶剂溶解4种化合物的对照品,然后进样,回收率都在93%以上。考虑到甲醇良好的溶解性和弱毒性,选择甲醇作为制备溶剂(见表3)。

表3 4种化合物不同溶剂的回收率

3.7 标准曲线、检出限和定量限 按照优化后的IMS检测条件,分别取4种化合物的不同浓度的对照品溶液试验。以得到的峰面积为纵坐标,待测物质浓度(ppm)为横坐标,进行线性回归处理,并分别得出检出限(S/N=3)与定量限(S/N=10),发现二甲双胍和苯乙双胍的检出限很高,达到0.2 ppm;吡格列酮和罗格列酮的检出限较低,为1 ppm,以上结果见表4。

表4 4种化合物离子迁移谱检测的标准曲线、线性范围、检出限和定量限

3.8 实际样品测定 取5种市场上降糖类保健食品进行离子迁移谱检测,分别称取一次服用剂量,用甲醇溶解后,再稀释10~50倍进行离子迁移谱检测,结果发现有一个样品的离子迁移谱峰图中出现了8.168 ms的信号峰,与二甲双胍的迁移时间一致(见图6),怀疑出现二甲双胍非法添加。将样品采用药典中二甲双胍标准检测方法HPLC法进行检测,检出二甲双胍,与离子迁移谱测定结果一致。

图6 阳性样品IMS图

4 讨论

4.1 样品前处理 考虑到中药样品成分复杂且制剂剂型不同,首先对样品进行研磨,然后溶解后稀释,由于不同溶剂的溶解度和迁移谱峰不同,比较了乙腈、甲醇、丙酮、乙醇4种提取液的提取效果,乙腈和丙酮超声提取后杂质干扰较强且挥发有毒性,甲醇提取较乙醇更完全,考虑到甲醇良好的溶解性和弱毒性,选择甲醇作为制备溶剂。试验同时比较了超声提取时间,超声时间越长提取物干扰越大,由于非法添加物仅掺杂进中药制剂中,且非法添加物极易溶于甲醇中,所以对超声时间进行考察,结果选择超声提取3 min,非法添加物回收率就可达到93%以上。

4.2 小结 本试验建立的离子迁移谱方法,可以实现快速检测中成药和保健食品中是否有二甲双胍、苯乙双胍、罗格列酮、吡格列酮降糖化合物的非法添加,操作简单,检测迅速,为有效打击此类非法添加行为提供技术支撑。

猜你喜欢

罗格甲醇化合物
硅胶吸附管采集甲醇汽车尾气排放中甲醇的方法研究
曾担任过12年国际奥委会主席的雅克·罗格逝世,享年79岁
气相色谱内标法测洗涤剂中的甲醇
你看到的是美,我看到的是责任
浅谈天然气制甲醇与煤制甲醇的区别
例析高考中的铁及其化合物
例谈氯及其化合物的学习与考查
钒及其化合物在高考中的考查
金属元素及其化合物
对不起